福建省猪伪狂犬病病毒新流行株gD、gE基因遗传变异分析

为了解福建地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律。本试验分离了2011-2013年福建省不同地区的11株PRV,并对其gD、gE基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区被检测的规模化猪场均存在野毒感染,病料接种PK-15细胞均能出现典型的细胞病变,分离的毒株接种家兔能出现典型的伪狂犬病症状。PRVgD、gE基因序列分析表明,自2011年福建地区PRV同源性较高且处于一个独立的分支,表明福建地区流行的PRV可能存在一定的抗原变异。

猪瘟病毒福建野毒分离株FJ-1E2基因序列分析

应用RT-PCR技术对福建省某一猪场采集的疑似猪瘟样品进行猪瘟病毒E2基因扩增,并对其核苷酸序列进行分析。结果表明,猪瘟野毒与标准参考毒株及国内分离株的同源性为81%～98.1%;遗传进化树分析表明流行野毒与中国C株存在很大差异;预测的抗原表位表明该野毒株与中国C株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示福建流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚待进一步的研究。

环介导等温扩增技术快速检测猪流行性腹泻病毒

为建立一种快速、灵敏的检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究针对PEDV的NP基因设计LAMP引物,对反应体系优化并进行特异性及敏感性等试验。结果表明,该方法在65℃下恒温扩增60 min,经SYBR Green I染色后仅肉眼观察即可判定结果。该方法特异性好,与传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒及大肠杆菌等无交叉反应,对重组质粒最低检测限度为16拷贝/μL,灵敏度高于普通PCR。该LAMP检测方法特异性强,灵敏度高,操作方便,适于临床检测PEDV。

福建省龙岩市规模化猪场伪狂犬野毒感染的血清学调查

为了掌握龙岩市规模化猪场猪伪狂犬野毒感染状况和流行趋势,应用IDEXX的PRV-gE抗体试剂盒,对2007～2009年龙岩市新罗区、连城、上杭、武平、永定、漳平、长汀的规模化猪场进行PR野毒感染血清学调查。结果表明:2007～2009年PRV野毒抗体样品阳性率分别为19.2、17.2、18.0%,猪场阳性率分别为54、65、64.6%,三年来的样品阳性率和猪场阳性率没有明显的变化,依然存在感染压力。PR野毒感染随季节的变化有一定的规律性,在每年1月到2月期间,猪PR野毒抗体阳性率都会大幅上升,夏秋两季PR感染率在一年中总体较高。种猪群是所有调查猪群中PR野毒抗体阳性率中最高的,是猪场伪狂犬野毒的主要来源,饲养密度大的区域PR野毒抗体阳性率较高。本次调查结果对指导规模化猪场猪伪狂犬病的控制与净化具有重要的现实意义。

金线莲提取物体外抑菌及抑制鸡新城疫病毒在CEF上的增殖

采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较强抑制作用,表现为高敏;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌表现为中敏;对酵母菌和普通变形杆菌的抑制作用不明显,表现为低敏.最小抑菌浓度均不高于12.5 g.L-1.药物与病毒混合组对NDV的抑制率显著高于先病毒后药物组和先药物后病毒组(P<0.05).药物浓度与NDV抑制率存在明显的正相关(P<0.05).在先药物后病毒组和药物与病毒混合组中,15.62-31.25 g.L-1金线莲水提取物具有显著的抗NDV效果;1.95-3.90 g.L-1金线莲水提取物抗NDV效果不明显.

俪人康纯中药洗液杀菌效果与毒性实验研究

本文采用悬液定量杀菌实验和动物毒性实验观察俪人康纯中药抗菌洗液的杀菌效果及其毒性.结果显示:该洗液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别作用2 min后,平均杀灭率分别为99.96%、99.97%;对白色念珠菌作用10 min后,平均杀灭率达99.91%;原液于37℃存放90 d,杀灭率无明显下降.该抗菌洗液对小鼠急性经口毒性实验LD50>5 000 mg/kg BW,属实际无毒,对动物皮肤和阴道黏膜无刺激性.以上结果表明,该中药抗菌洗液对革兰氏阳性菌和阴性菌以及真菌都具有良好的杀灭效果,动物实验属于无毒级、无刺激性.

银杏叶提取物抑制鸡新城疫病毒增殖试验

进行了银杏叶提取物对10日龄鸡胚人工感染新城疫病毒(NDV)的抑制试验。抑制NDV增殖试验结果表明,NDV强毒组在48h的鸡胚保护率为20%,0.500g/mL银杏叶提取物+NDV组鸡胚保护率为50%,两者差异显著(P<0.05);0.250g/mL+NDV组、0.125g/mL+NDV组的鸡胚保护率分别为70%、80%,与强毒组相比,差异显著(P<0.05),可见银杏叶提取物对NDV增殖具有抑制作用。

β-谷甾醇与Vc抗氧化性能比较及β-谷甾醇抑菌活性研究

本试验旨在研究β-谷甾醇与Vc抗氧化性能比较及其抑菌活性。采用清除DPPH自由基、羟自由基(OH)及超氧阴离子自由基(O_(2)^(-)·)能力分析,比较β-谷甾醇与Vc的抗氧化性;采用牛津杯法,测定β-谷甾醇对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性。结果表明,在一定的试验条件下,β-谷甾醇对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为93.8%和23.5%,与Vc效果相当,但β-谷甾醇对DPPH自由基没有清除作用。β-谷甾醇对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌有一定的抑制性,抑制率随着β-谷甾醇浓度的增加而增强,对金黄色葡萄球菌抑制效果优于其它两种细菌。

银杏叶提取物的免疫调节作用研究进展

银杏叶提取物是一种具有广泛生物学功能的活性物质。该文从免疫器官重量、单核巨噬细胞与自然杀伤细胞、体液免疫、细胞免疫、细胞因子以及红细胞免疫、粘膜免疫等方面综述了银杏叶提取物的免疫调节作用。

IHA与ELISA检测猪瘟病毒抗体的比较

应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟病毒抗体,IHA试验以1∶16为判定孔,抗体效价大于或等于1∶16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40%为判定标准,阻断率大于或等于40%为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段免疫猪血清。结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92份,相关性为75.4%,不同抗体水平分布的血清数也不同,个别血清出现较大差异,卡方检验P值为0.13(>0.05),两种检测方法统计上无差异,研究结果为选择猪瘟病毒抗体检测方法提供参考。

福建地区PRRSV分离株Nsp2基因新变异序列鉴定

为了解福建省2009年以来猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,本研究收集了福建省不同地区的14株PRRSV分离株,并对其Nsp2基因进行遗传变异分析。结果表明与参考病毒株VR-2332相比共有4种类型氨基酸的缺失和1种类型的氨基酸插入,3株分离株在472位～520位和533位～561位发生了不连续的78个氨基酸缺失;2株分离株472位～520位、533位～561位和593位～595位发生了不连续的81个氨基酸缺失;1株分离株在593位～595位发生了3个氨基酸的缺失;其余8个分离株的Nsp2蛋白存在第481位和533位～561位共30个氨基酸的不连续缺失,其中有1个分离株在599位～603位插入了5个氨基酸,同时又在481位和533位～561位发生了不连续的30个氨基酸的缺失,这是国内首次发现有氨基酸插入的病毒株。这些新的缺失和插入与PRRSV致病性及其与生物学特性的关系有待于进一步研究。

银杏叶复方制剂对实验性脾虚证模型小鼠内脏器官发育及其抗氧化酶活性的影响研究

采用利血平复制脾虚证小鼠模型,观察银杏叶复方制剂对实验性脾虚证模型小鼠内脏器官发育及其抗氧化酶活性的影响。结果表明,①银杏叶复方组小鼠胃、肾的指数较脾虚模型组有所提高但差异不显著(P>0.05);银杏叶复方组小鼠小肠、脾的指数显著高于脾虚模型组(P<0.05),与对照组差异不显著(P>0.05);脾虚模型组小鼠的肝、肺指数显著高于银杏叶复方组(P<0.05),银杏叶复方组小鼠的肝、肺指数与对照组差异不显著(P>0.05),提示银杏叶复方有促进脾虚小鼠脾胃发育和促进肝脏的解毒作用,对脾虚模型小鼠的肾、肺功能亦有改善作用。②银杏叶复方组小鼠脾脏、肾脏中MDA含量较脾虚模型组显著降低(P<0.05),而肝脏组织中SOD和GSH-Px含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05),同时脾脏、肾脏和肝脏中T-AOC含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05)。提示银杏叶复方对脾虚小鼠的脾脏、肾脏和肝脏的功能有良好的保护作用。

猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立

为了建立快速检测猪瘟病毒(CSFV)环介导等温扩增(LAMP)方法,试验利用Primer Explorer4.0(https://primerexplorer.jp/)针对CSFV的NS3基因设计LAMP引物,并对LAMP反应体系、反应条件进行优化,评定其特异性和敏感性。结果表明:该方法可在65℃、50 min内快速扩增CSFV,扩增结果可通过可视的颜色判断;LAMP反应对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等无交叉反应,其检测CSFV的最低浓度为13.6 fg/μL,对临床样品的检出率高于RT-PCR技术。说明LAMP方法灵敏、准确,操作快速、方便,可用于猪瘟的临床诊断。

猪细小病毒的分离与鉴定

本试验从福建省某猪场疑似猪细小病毒病死胎的淋巴结、肝脏中分离到1株病毒。病料接种PK-15细胞36h后出现了圆缩、集聚、脱落等细胞病变,猪细小病毒阳性血清能特异性地中和该分离病毒。根据已发表的细小病毒(PPV)VP2基因的序列设计并合成了一对引物,采用PCR方法可扩增531bp DNA片段。测序结果表明,分离株VP2基因与NCBI公布的NADL-2株的同源性高达99.2%,证实分离的病毒株为猪细小病毒。为进一步开展该病毒致病机理、流行病学、诊断研究与疫苗免疫等奠定了基础。

福建地区猪繁殖与呼吸综合征ORF7基因遗传变异分析

为了解福建地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的分子生物学特性与变异规律,收集了福建省不同地区的12株PRRSV,并对其ORF7基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区存在欧洲型PRRS和美洲型PRRS,10株为美洲型PRRSV,与VR-2332、JXA1等美洲型参考毒株的氨基酸的同源性为89.5%-100%,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为59.5%-63.6%。而FJ-11、FJ-12 2株分离株为欧洲型PRRSV,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为91.4%、92.2%,而与VR-2332、CH-1a等美洲参考毒株的氨基酸的同源性为60.3%-64.5%。美洲型PRRSV ORF7编码N蛋白氨基酸虽然发生了变异,但相对保守。

猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊断及病原特性分析

[目的]诊断由猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病毒(PRV)引发的猪疫病,并分析病原。[方法]采集福建某猪场发病猪的组织器官,提取病毒DNA或RNA,PCR检测病毒感染。采用ELISA方法检测CSFV、PRRSV和PRV的感染情况。[结果]测序分析和ELISA结果表明,猪场存在PRRSV、CSFV、PRV3种病毒感染。[结论]该次猪病疫情主要是由CSFV和高致病性PRRSV混合感染引起。

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒三重PCR检测方法的建立

通过设计三对引物分别扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪轮状病毒(RV)的特异性基因,建立了一个能对TGEV、PEDV及RV感染鉴别诊断的三重PCR方法。该方法能同时检测TGEV的M基因252bp片段、PEDV的N基因540bp片段及RV的VP7基因412bp片段,而对CSFV、PCV2、PRRSV、PRV等无扩增,其检测TGEV、PEDV及RV的极限为100pg核酸/μL;用该方法对临床收集的26份粪便样品进行检测,结果表明:建立的多重PCR方法具有特异性强,强灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查。

猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种具有敏感性高、特异性强、方便、快速等特点的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的环介导等温扩增技术(LAMP),针对美洲型PRRSV的ORF5基因设计了一套LAMP引物,建立了LAMP反应体系,并对其敏感性、特异性等进行了评估。结果表明,该方法可在65℃、1h内完成最低限度5.49pg/μL含量的PRRSV核酸扩增,结果仅肉眼就能判定。该检测方法特异性强,与猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)等病原体无交叉反应;对25份临床样品检测表明,该方法的检出率高于常规RT-PCR法,且操作更为方便、快速。该检测方法特异、敏感、准确,可应用于临床检测PRRSV。

银杏叶超微粉对仔猪肠道菌体外抑菌作用的研究

在制备银杏叶超微粉的基础上,研究其对仔猪肠道菌的体外抑菌作用。结果表明,银杏叶超微粉经39℃水浴浸提2 h后,其水提液中黄酮含量比室温下浸提2 h后的高。银杏叶超微粉经39℃水浴浸提2 h或室温浸提2 h后,对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、化脓性链球菌和枯草芽孢杆菌都表现出一定的抑菌作用。在相同的作用时间内,银杏叶超微粉的浓度越高,抑菌率越高;同一浓度的银杏叶超微粉作用时间越长,抑菌率也越高。银杏叶超微粉经39℃水浴浸提2 h后的抑菌效果好于室温浸提2 h后的抑菌效果。

应用特异PCR方法诊断2例猪弓形虫病

[目的]应用特异PCR方法诊断猪弓形虫病。[方法]分别以弓形虫核糖体DNA第一内部转录间隔区(ITS1)序列和529 bp重复序列为目的片段,扩增2例疑似猪弓形虫病的病料肺门淋巴结DNA,对疑似猪弓形虫病的病料进行PCR诊断。[结果]2对引物均能分别扩增出2例肺门淋巴结中弓形虫DNA的特异条带。[结论]基于2种扩增片段的PCR方法均具有较高的特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。