乙型肝炎病毒HBcAg免疫优势CTL表位多肽在HBV转基因小鼠体内的免疫学功能研究

目的 探讨基于乙型肝炎 (Hepatitisbvirus,HBV)核心抗原免疫优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlympho cyte,CTL)表位的治疗性多肽抗原组分、结构以及在HBV转基因小鼠体内的免疫学功能。方法 用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的治疗性多肽疫苗候选分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,经高效液相色谱 (HPLC)纯化、鉴定。以HBV转基因小鼠为试验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果 所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CD8+ T细胞应答和适度的抗体反应 ,并抑制HBV特异性抗原的分泌和乙型肝炎病毒复制。结论 提示所设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的多肽分子可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗候选分子。

人源轮状病毒转基因马铃薯口服免疫小鼠的免疫应答研究

目的分析人源轮状病毒转基因植物抗原的口服免疫应答反应。方法在根癌脓杆菌介导获得系列转基因马铃薯植株的基础上,用ELISA分析转基因马铃薯中目的蛋白表达水平。马铃薯块茎直接口服免疫Balb/c小鼠,ELISA分析免疫小鼠血清、唾液、粪便提取物特异抗体水平。结果获得一株最高表达量的转化株;口服免疫可诱导较强的血清IgG反应和强烈的黏膜sIgA反应,粪便的sIgA最高,唾液次之,尿液中无sIgA;加霍乱毒素B亚单位(CTB)佐剂免疫组小鼠和霍乱毒素(CT)佐剂免疫组小鼠抗体水平无显著差异,无佐剂免疫组小鼠抗体水平略低。结论人源轮状病毒转基因植物疫苗联合黏膜佐剂免疫动物可诱导特异的系统与黏膜免疫应答,且黏膜免疫强度略高于系统免疫。

颗粒性肽-DNA复合疫苗抗肿瘤免疫的研究

诱导有效的抗肿瘤免疫应答是肿瘤免疫治疗的主要目标 ,由于肽疫苗和DNA疫苗具备较高的安全性和实用性 ,因而成为肿瘤疫苗学领域中发展最为迅速的肿瘤免疫治疗方案之一。但是这两种疫苗形式仍然具有各自的缺点 ,其抗原呈递动力学存在显著差异 ,提示这两种疫苗可能存在互补性。本研究对多肽疫苗和DNA疫苗进行综合 ,设计出新型肽 DNA复合疫苗 ,并以P815A为模式抗原 。

MAGE-12 B细胞表位联合应用的免疫原性研究

目的设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位并研究其表位联合应用的免疫原性。方法在MAGE-12的B细胞表位序列MAGE-123-14(LEQRSQHCKPEE)、MAGE-1282-93(QSDEGSSNEEQE)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽后分MAGE-123-14组、MAGE-1282-93组、MAGE-123-14联合MAGE-1282-93组,分别以MAGE-123-14、MAGE-1282-93、MAGE-123-14联合MAGE-1282-93抗原肽免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA和免疫组化实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体。结果免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,且多表位抗原肽联合使用组抗体效价高于单表位抗原肽组产生的抗体效价。结论证明MAGE-12的B细胞多表位抗原肽联合使用的免疫原性强于单个B细胞表位抗原肽的免疫原性。

宫颈癌治疗性多肽疫苗的分子设计及免疫学功能研究

目的:探讨基于人乳头瘤病毒抗原优势表位的治疗性多肽抗原组分、结构与诱导免疫应答之间的关系。方法:以芴甲氧羰基固相法合成多肽,用高效液相色谱分析多肽的纯度,对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定,用标准51Cr释放试验检测特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结果:合成的多肽经纯化后纯度都达到80%以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符,所设计的治疗性多肽在体内外均诱导出较强的表位特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结论:在治疗性表位多肽设计中,将辅助性T细胞表位及脂类分子构建于分子内部可提高细胞毒性T淋巴细胞表位肽的免疫原性。

基于小鼠肥大细胞瘤P815模型的肿瘤免疫学研究进展

肿瘤动物模型是研究肿瘤免疫学、临床前期评价肿瘤治疗方案有效性和安全性的重要前提。P815肿瘤模型是一种较为成熟的小鼠肿瘤研究模型 ,因其具有某些独特的优点而被研究者广泛采用。近年来 ,在已鉴定出P815AB、P815E等肿瘤抗原的基础上 。

可食性转基因植物疫苗的免疫学特性研究

转基因植物疫苗是疫苗研究的一个新热点 ,本文综述了转基因植物疫苗在体诱导的免疫学特点 ,包括实验动物和人免疫应答情况 ,讨论了未来转基因植物疫苗研究重点及将面临的问题和解决对策 。

猪圆环病毒2型CAP蛋白新型表位抗原肽的设计、合成及免疫原性研究

目的设计合成PCV2 CAP的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定。方法采用DNAStar和BcePred分析软件并结合吴玉章氨基酸抗原指数计算方法预测PCV2 CAP的B细胞表位．以此合成4分支多重抗原肽结构．同时串联一个通用型n表位；采用Fmoc法合成4分支PCV2CAP多重抗原肽（MAP），通过高效反相液相色谱（RP-HPLC）、质谱（MS）分析对其进行初步鉴定。以合成的抗原肽免疫昆明系小鼠及兔，观察体液免疫反应。结果初步筛选出3种抗原指数较高的表位，即98～103aa（命名为B98），156～162aa（命名为B156），228～233aa（命名为B228）；合成的多重抗原肽经RP-HPLC层析后，纯度达到92.49％，MS鉴定其相对分子质量一致，误差小于0．1％。以合成的MAP疫苗免疫小鼠及兔后，可产生高滴度的特异性抗PCV2CAP抗体。结论PCV2CAP的B细胞新表位多重抗原肽有免疫原作用，将为PCV2CAP表位肽疫苗的研究奠定基础。

MAGE-12的新B细胞表位抗原肽的设计、合成及免疫原性研究

【目的】设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位并研究其免疫原性。【方法】在预测MAGE-12的B细胞表位序列为LEQRSQHCKPEE（3～14）、MAGE-1282-93（QSDEGSSNEEQE）的基础上，采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽，免疫C-57BL／6小鼠，产生多克隆抗体，应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体。【结果】免疫C-57BL／6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体。【结论】证明所预测的表位LEQRSQHCKPEE（3—14）为MAGE-12的新B细胞表位。

肿瘤内三级淋巴组织免疫治疗研究进展

三级淋巴组织常见于慢性炎症、自身免疫性疾病和肿瘤的病变组织局部。对疾病状态下机体的免疫调节发挥着重要作用。最近发现,肿瘤组织中成熟的三级淋巴结构能够募集T细胞并激活其抗肿瘤效应,但在三级淋巴组织形成的不同阶段,其对肿瘤的免疫抑制或耐受作用并不一致。因此,对肿瘤浸润的三级淋巴组织的发展阶段及其内部的免疫细胞群的动态变化进行分析、评估,可为免疫治疗策略提供一种有益借鉴。本文综述三级淋巴组织的免疫学特征、形成过程及临床相关性。

肿瘤抗原MAGE-12的B细胞新表位多重抗原肽的免疫原作用研究

目的 在已设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞新表位多重抗原肽基础上对其进行免疫原作用研究.方法 在预测MAGE-12的B细胞表位序列为LEQRSQHCKPEE（3～14）的基础上,采用4分支多重抗原肽（MAP）结构设计合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验及免疫组化实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体.结果 免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,抗体效价最高达1：256,免疫组化实验阳性证明为人MAGE-12抗原肽的特异性抗体.结论 MAGE-12的B细胞新表位多重抗原肽有免疫原作用.

多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究

目的 开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 选择小鼠精子 /睾丸特异性抗原SP1 7、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架 ,按一定连接方式设计、合成新抗原 35肽 ,并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB/C小鼠。结果 在 430A固相自动肽合成仪上成功地合成 35肽 ,并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达 95 %以上 ;免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达 1∶6 0 0 0 ,阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达 1∶30 0 ;小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达 50 %左右 ,淋巴细胞分泌的INF γ和IL 4分别为 60、1 0 8μg/ml;实验组BALB/C雌鼠妊娠率平均降至 60 % ,每胎产仔数平均降低 58%～71 %。结论 含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫 ,并使小鼠受孕率下降 。

浅谈免疫学专业研究生基础科研能力培养

我国研究生教育是导师负责制,以培养学生的科研思维为主要目标,并且在科研工作开展时系统地对相关实验能力进行培养。但目前很多高校都在进行研究生扩招的情况下,导师很难"手把手"的培养众多的研究生,科研一线的青年工作者,就担负起了研究团队中培养研究生基础科研能力的责任,本文主要结合笔者自身的经验,探讨如何有效地做好研究生基础科研能力的培养工作。

IgA肾病免疫病理机制的研究进展

IgA肾病是全球范围内最常见的原发性肾小球肾炎 ,以肾小球系膜区IgA沉积为特征。其发病机制至今依然不清。许多研究表明与粘膜及骨髓的免疫失常 ,T细胞免疫调节功能紊乱有关。

胸腺内免疫耐受机制的研究进展

正常机体的免疫系统能有效地区分“自身”与“异己”成份。免疫系统对自身抗原的无反应性是通过免疫耐受机制而形成 ;自身耐受机制的破坏常导致自身免疫性疾病的产生。胸腺在形成中枢免疫耐受以及指导 T细胞发育中有着重要的作用。近年来对胸腺免疫耐受机制的研究已取得不少新的进展 ,本文就胸腺内自身抗原表达、胸腺 APC细胞、胸腺细胞选择机制以及参与其中的细胞膜辅助分子 ,如 CD40、CD2 8、Fas、CD30等在胸腺免疫耐受形成机制中的作用及意义作一综述。

FGL2在急性病毒感染过程中对T细胞免疫应答的影响研究

目的探讨纤维蛋白原样2凝血酶原酶(FGL2)在急性病毒感染过程中对T细胞的增殖、分化和功能的影响。方法模型一:淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)感染Fgl2基因敲除小鼠(实验组)与C57BL/6J对照小鼠,感染后第8天,检测T细胞的增殖、分化和功能。模型二:过继转移能够特异性识别LCMV的TCR转基因小鼠SMARTA或P14的T细胞到Fgl2基因敲除小鼠(实验组)和C57BL/6J对照小鼠内,LCMV感染后第8天,检测小鼠体内供体SMARTA或P14细胞的增殖和分化。结果FGL2在LCMV急性感染过程中表达上调(P<0.05);实验组和对照组的滤泡辅助T细胞(T_(FH))、Th1细胞和效应CD8^+T细胞的频率和数量均无明显差异(P>0.05);GC B细胞和浆细胞的数量和频率、LCMV特异性抗体的滴度以及效应CD8^+T细胞中表达TNF-α和CD107a/b的频率均无明显差异(P>0.05)。结论 FGL2在急性病毒感染过程中不影响T细胞的免疫应答。

B7-H3在肿瘤免疫中作用的研究进展

B7-H3(B7RP-2,CD276)是新近鉴定的对淋巴细胞存活及活化、NK细胞及成骨细胞的发育等都具有重要调节作用的B7家族共刺激分子。最近的研究则显示,B7-H3还高表达于各种类型的肿瘤组织中并参与了肿瘤的发生及发展。本文就B7-H3的生理功能及其在肿瘤免疫中的最新进展做一综述。

深化医学免疫学实验教学改革的探讨

医学免疫学是一门重要的基础医学课程，作为生命科学的前沿学科，与基础医学以及临床医学的各个学科相互交叉和渗透，是沟通基础医学和临床医学的重要桥梁。同时，免疫学作为一门实验学科，其知识更新迅速，且理论知识密切联系实际应用。因此，医学免疫学教学不仅要培养学生对免疫学理论的认知能力，更重要的是培养学生严谨的逻辑思维能力及独立的实践操作能力。这就要求我们教学过程中不仅要重视理论教学，同时要加强实践教学［1］，即免疫学实验教学。医学免疫学实验通过实验教学环节，巩固学生对免疫学知识的理解和掌握程度，同时培养学生严谨的科学态度以及分析问题和解决问题的能力。实验教学的质量直接影响学生对免疫学基本理论的认知能力和实践应用能力。

乙型肝炎患者HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T细胞的研究

目的对乙肝患者尤其是慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T细胞(CTL)的分布频率及功能状态进行研究。方法应用多色流式分析结合HLA-A*0201限制性表位肽/五聚体复合物技术对乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性CTL进行精确定量,应用胞内细胞因子染色技术结合流式细胞分析技术研究HBcAg18-27表位特异性CTL穿孔素,颗粒酶B,干扰素-γ的分泌水平。结果在急性与慢性乙型肝炎患者外周血中均可测到HBcAg18-27表位特异性CTL,两者的分布频率存在显著性差异。慢性乙肝患者外周血中HBcAg18-27表位特异性CTL分泌穿孔素,颗粒酶B,干扰素的水平明显降低。结论HBcAg18-27表位特异性CTL在乙型肝炎病毒清除中起到重要作用,慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性CTL存在功能缺陷。

溶酶体膜蛋白-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成的实验研究

目的研究溶酶体膜蛋白-2抗体(LAMP-2-antibody)诱导中性粒细胞胞外捕网形成(NETosis)的作用,为进一步探讨这种新型细胞死亡模式在系统性小血管炎中的作用及机制奠定基础。方法采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,抗LAMP-2抗体刺激中性粒细胞,以及通过NADPH氧化酶抑制剂二甲苯基碘(DPI)阻断活性氧簇的产生,电镜、免疫荧光观测胞外捕网的形成,激光共聚焦检测自身抗原LAMP-2、PR3、MPO的表达。结果 LAMP-2抗体促进中性粒细胞胞外捕网NETs形成,自身抗原MPO、PR3及LAMP-2包含在NETs内,抑制NADPH氧化酶的活性可以阻断NETs形成。结论 LAMP-2抗体可能通过诱导中性粒细胞异常死亡,释放内源性危险信号,激活自身免疫反应等来维持血管炎的恶性持续状态。