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人重组LIGHT-Fc分子的真核表达及其抗肿瘤活性研究 被引量:1
1
作者 黄钢 白云 +1 位作者 姜曼 黎万玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期499-502,共4页
目的 :构建人LIGHT Fc基因的真核表达质粒 ,并表达获得有较高生物学活性的纯化人LIGHT Fc融合蛋白。方法 :从cDNA文库中PCR扩增LIGHT全长编码基因 ,并导入克隆载体。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,用重叠延伸技术(SOE)引入CD... 目的 :构建人LIGHT Fc基因的真核表达质粒 ,并表达获得有较高生物学活性的纯化人LIGHT Fc融合蛋白。方法 :从cDNA文库中PCR扩增LIGHT全长编码基因 ,并导入克隆载体。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,用重叠延伸技术(SOE)引入CD137信号肽基因。将SOE产物与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,瞬时转染 2 93T细胞 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE检测其纯度与Mr,并以肿瘤细胞为靶细胞 ,检测其生物学活性。结果 :测序证实构建的LIGHT与LIGHT FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA和SDS PAGE证实LIGHT Fc融合蛋白的表达与纯度 ;MTT证明人LIGHT Fc蛋白对一些肿瘤细胞系具有生长抑制作用。结论 :获得了有抗肿瘤活性的纯化hLIGHT Fc融合蛋白 ,为探讨LIGHT在免疫自稳调节中的地位、结合相应受体后的动力学与信号转导机制 。 展开更多
关键词 LIGHT LIGHT-Fc 信号肽 重叠延伸 蛋白A亲和层析 抗肿瘤 生物学活性
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PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法 被引量:40
2
作者 胡晓红 彭惠民 +2 位作者 刘昕 黄正根 袁科 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期155-158,共4页
目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提... 目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。 展开更多
关键词 DNA提取 PCR 实时荧光定量PCR
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抗氧化蛋白Peroxiredoxin家族研究进展 被引量:41
3
作者 章波 向渝梅 白云 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期352-355,共4页
Peroxiredoxin是新近发现的抗氧化酶系 ,广泛存在于各种生物体内。根据分子所具有保守半胱氨酸数目的不同 ,哺乳动物的 6个Peroxiredoxin分为 2个亚类。Peroxiredoxin除了具有共同的抗氧化功能外 ,它还具有其它的功能如细胞增殖与分化... Peroxiredoxin是新近发现的抗氧化酶系 ,广泛存在于各种生物体内。根据分子所具有保守半胱氨酸数目的不同 ,哺乳动物的 6个Peroxiredoxin分为 2个亚类。Peroxiredoxin除了具有共同的抗氧化功能外 ,它还具有其它的功能如细胞增殖与分化、细胞信号转导及保护其它蛋白的氧化等。对该类蛋白分子结构的深入研究已初步揭示其抗氧化的作用机制。Peroxiredoxin与肿瘤关系密切 ,它可能成为一个肿瘤标记物 ,可为肿瘤的治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 PEROXIREDOXIN 抗氧化 蛋白家族
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采用RNAi技术抑制PeroxiredoxinⅠ的表达 被引量:3
4
作者 章波 艾国平 +3 位作者 王燕 王峰超 白云 粟永萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期709-712,共4页
Peroxiredoxin Ⅰ(PrxⅠ) is involved in many important cellular progresses such as cell proliferation and differentiation. To further elucidate its roles in ionizing radiation, eukaryotic expression vector containing s... Peroxiredoxin Ⅰ(PrxⅠ) is involved in many important cellular progresses such as cell proliferation and differentiation. To further elucidate its roles in ionizing radiation, eukaryotic expression vector containing siRNA targeting mRNA of peroxiredoxin 1 gene was constructed and transected into NIH3T3 cell line following sequencing.Western blot analysis showed that this siRNA significantly inhibited PrxⅠ expression by 65% at protein level; cell proliferation experiment demonstrated that the double proliferation time of NIH 3T3PrxⅠ cells was postponed for 1.8 hours as compared with control group. MTT results showed that 12 and 48 hours after irradiation the survival rate of NIH 3T3PrxⅠ was dramatically decreased when comparing with sham-irradiated group.These results suggested that peroxiredoxin 1 has radiation-cytoprotection role. 展开更多
关键词 RNAI技术 硫氧还蛋白 过氧化物 哺乳动物 真核生物 原核生物 超氧化物 生化功能 肿瘤细胞 NK细胞
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染色质隔离子研究进展 被引量:5
5
作者 章波 刘昕 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期551-555,共5页
染色质隔离子是真核生物染色质上的顺式调控元件,它将染色质隔离成不同的转录功能域,使其一侧的基因免受另一侧调控元件的影响。染色质隔离子发挥作用是通过与其相结合的蛋白质来实现,它能阻断增强子和沉默子的作用,并使插入在两个隔离... 染色质隔离子是真核生物染色质上的顺式调控元件,它将染色质隔离成不同的转录功能域,使其一侧的基因免受另一侧调控元件的影响。染色质隔离子发挥作用是通过与其相结合的蛋白质来实现,它能阻断增强子和沉默子的作用,并使插入在两个隔离子间的外源基因不受染色体位置效应影响。目前存在多种有关隔离子的作用机理的假说,比较成熟的是loop假说。随着研究的深入,染色质隔离子的应用也将受到更大的重视。 展开更多
关键词 染色质隔离子 增强子 沉默子 染色质边界元件
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禽流感病毒检测技术研究进展 被引量:6
6
作者 胡晓红 彭惠民 刘昕 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2006年第4期305-308,共4页
关键词 禽流感病毒 检测技术 综述[文献类型]
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人ICOSIg的真核表达及其对MLR反应的影响 被引量:2
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作者 许雪青 白云 +3 位作者 王丰 黎万玲 杨晓亚 王艳艳 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期269-272,共4页
目的构建人ICOSIg基因的真核表达载体,表达并鉴定ICOSIg蛋白,初步研究其对MLR中细胞增殖以及对IL-10分泌的影响。方法从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增ICOS胞外区cDNA编码基因,并和人IgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,采... 目的构建人ICOSIg基因的真核表达载体,表达并鉴定ICOSIg蛋白,初步研究其对MLR中细胞增殖以及对IL-10分泌的影响。方法从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增ICOS胞外区cDNA编码基因,并和人IgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,采用脂质体转染COS-7细胞,G418筛选,用ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE和Westernblotting进行鉴定。进一步通过3H-TdR掺入法和夹心ELSIA法探讨其对双向MLR反应中细胞增殖以及对IL-10分泌的影响。结果酶切和测序证实构建的ICOS膜外区和人IgG1Fc段基因序列正确、阅读框完整;ELISA、SDS-PAGE、Westernblot验证ICOSIg的正确表达;功能实验提示ICOSIg能抑制MLR中的细胞增殖和IL-10的分泌。结论成功构建并表达了ICOSIg,而获得的ICOSIg能抑制MLR。 展开更多
关键词 ICOSIg 共刺激分子 混合淋巴细胞反应
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TWEAK蛋白对肝癌细胞增殖的影响 被引量:1
8
作者 程晓刚 陈玮 +6 位作者 陈恬 李晋川 邹强 杨淑霞 刘阳 李敏惠 白云 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期510-513,共4页
目的观察TWEAK蛋白对肝癌细胞系增殖的影响,探讨TWEAK对肝癌细胞增殖的作用。方法构建PAVU6-TWEAKsiRNA干涉质粒,转染HepG2和QGY7703肝癌细胞株,MTT法检测抑制TWEAK蛋白表达对肝癌细胞增殖的影响,并于培养体系中加入TWEAK蛋白,检测肝癌... 目的观察TWEAK蛋白对肝癌细胞系增殖的影响,探讨TWEAK对肝癌细胞增殖的作用。方法构建PAVU6-TWEAKsiRNA干涉质粒,转染HepG2和QGY7703肝癌细胞株,MTT法检测抑制TWEAK蛋白表达对肝癌细胞增殖的影响,并于培养体系中加入TWEAK蛋白,检测肝癌细胞增殖活性。结果成功构建PAVU6-TWEAKsiRNA干涉质粒,转化肝癌细胞后肝癌细胞增殖受抑。肝癌培养体系中加入TWEAK蛋白后,肝癌细胞增殖活性有所增强。结论TWEAK蛋白可促进肝癌细胞的增殖活性,抑制TWEAK表达,一定程度上可抑制肝癌细胞增殖。 展开更多
关键词 TWEAK 肝癌 RNA干涉 增殖
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OX40在免疫治疗中的应用 被引量:2
9
作者 王艳艳 李茂全 《国外医学(免疫学分册)》 2003年第5期257-261,共5页
OX4 0及OX4 0配体 (OX4 0L)是一对在T细胞初次和再次应答中都发挥重要作用的共刺激分子[1] ,它们对于维持CD4 + T细胞的增殖、存活 ,记忆性T细胞的形成起到关键作用 ,从而影响细胞免疫、体液免疫应答以及免疫耐受。越来越多的研究显示 ,... OX4 0及OX4 0配体 (OX4 0L)是一对在T细胞初次和再次应答中都发挥重要作用的共刺激分子[1] ,它们对于维持CD4 + T细胞的增殖、存活 ,记忆性T细胞的形成起到关键作用 ,从而影响细胞免疫、体液免疫应答以及免疫耐受。越来越多的研究显示 ,OX4 0在调节自身免疫性疾病 ,治疗移植物抗宿主病 (GVHD)中有明显疗效 ,尤其在抗肿瘤、抗感染疫苗设计中有很好的应用前景。 展开更多
关键词 OX40 共刺激分子 生物学功能 应用
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一DXFD_(52)相关人肝细胞cDNA的部分序列分析及其反转录病毒载体的构建
10
作者 何凤田 朱锡华 +1 位作者 谭骏 刘昕 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期235-239,共5页
为了寻找和研究新的人类基因cDNA,本实验以T7DNA聚合酶对—DXFD_(52)相关人肝细胞cDNA(DE)进行了分段部分测序,并将所测各部分序列分别在EMBL(欧洲分子生物学库)中进行核酸同源性检索,结果在库中没... 为了寻找和研究新的人类基因cDNA,本实验以T7DNA聚合酶对—DXFD_(52)相关人肝细胞cDNA(DE)进行了分段部分测序,并将所测各部分序列分别在EMBL(欧洲分子生物学库)中进行核酸同源性检索,结果在库中没有找到任何具有同源性的人类基因或DNA(或cDNA)片段。因此,我们初步认为DE为一新的人类基因cDNA片段。同时为初步探讨DE的功能,我们还成功地将DE构建于反转录病毒载体pLXSN上。 展开更多
关键词 DXFD52 CDNA 反转录病毒 载体
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人TNFα-EGF重组质粒的构建
11
作者 何凤田 朱锡华 +1 位作者 谭骏 刘昕 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期158-161,共4页
本实验将编码人TNFa分子上与其受体相关的部分核苷酸序列缺失,代之以人EGF基因cDNA,实现基因重组。转化子经快速细胞破碎法初筛、经Dotblot和Southernblot鉴定,从中挑选出20个人TNFa-EGF阳... 本实验将编码人TNFa分子上与其受体相关的部分核苷酸序列缺失,代之以人EGF基因cDNA,实现基因重组。转化子经快速细胞破碎法初筛、经Dotblot和Southernblot鉴定,从中挑选出20个人TNFa-EGF阳性重组质粒,为进一步获得重组嵌合人TNFa-EGF分子和TNFa作用机制的深入探讨奠定了初步基础。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 表皮生长因子 重组
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真核生物染色质隔离子
12
作者 章波 刘昕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期315-315,共1页
关键词 真核生物 染色质隔离子 基因表达 调控
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人凝血因子Ⅸ基因pKG_5—Ⅸ直接注入小鼠骨骼肌中瞬间表达的研究 被引量:3
13
作者 谭骏 王燕 +4 位作者 朱锡华 纪贤文 刘昕 薛京伦 邱信芳 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1993年第20期1918-1919,共2页
血友病 B 是由于凝血因子 IX 缺乏所致的一种严重出血性疾病.年发病率大约30万分之一.血友病 B 临床治疗主要靠输血或补充人 IX 因子浓缩剂.但经常输血不仅费用昂贵,而且使患者面临着爱滋病病毒及肝炎病毒感染的威胁.自1982年人凝血因子
关键词 血友病 凝血因子IX 基因 骨骼肌
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p53基因与DNA修复 被引量:4
14
作者 李晋涛 刘昕 吴玉章 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 2001年第3期151-153,共3页
DNA的损伤修复是一个多因子参与的、多环节的复杂修复系统。p5 3基因以多条信号通路 ,多种调控方式参与 DNA修复。它可以通过其下游一系列靶基因 p2 1、gadd4 5等调控细胞周期 ,使细胞停滞于 G1 期、G2 期等检测点 ,从而使受损 DNA有足... DNA的损伤修复是一个多因子参与的、多环节的复杂修复系统。p5 3基因以多条信号通路 ,多种调控方式参与 DNA修复。它可以通过其下游一系列靶基因 p2 1、gadd4 5等调控细胞周期 ,使细胞停滞于 G1 期、G2 期等检测点 ,从而使受损 DNA有足够的时间进行多因子参与的修复过程 ;也可以与 DNA修复因子 RPA、PCNA、XP p4 8基因等相互作用 ,直接参与 DNA修复 ;还可以蛋白—蛋白相互作用参与 DNA修复。 展开更多
关键词 P53 DNA修复 基因调控
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衰变加速因子及其所在膜微区在T淋巴细胞信号传递中的作用
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作者 程晓刚 叶琬 白云 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期9-12,共4页
低温抽提Jurkat细胞膜去污剂抗性的膜成分(DIG),检测Src家族酪氨酸激酶(PTK)及衰变加速因子(DAF)的分布情况。共聚焦扫描显微技术检测Jurkat细胞静息与交联状态下DAF分子对去污剂Triton-X100的抗溶性,以探讨其在Jur-kat细胞免疫识别中... 低温抽提Jurkat细胞膜去污剂抗性的膜成分(DIG),检测Src家族酪氨酸激酶(PTK)及衰变加速因子(DAF)的分布情况。共聚焦扫描显微技术检测Jurkat细胞静息与交联状态下DAF分子对去污剂Triton-X100的抗溶性,以探讨其在Jur-kat细胞免疫识别中的作用,结果显示静息状态CD3对去污剂无抗溶性,而DAF与Lck有抗溶性。单抗交联后CD3对去污剂抗性有所增加。静息状态DAF与Src家族PTK特异分布于膜微区中,交联CD3可诱导CD3与膜微区特异性聚集,DAF所在的膜微区可能促进T细胞的免疫识别和信号传递作用。 展开更多
关键词 膜微区 JURKAT细胞 信号传递 衰变加速因子
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