改进生物化学教学方法,提高军医学员的综合素质

培养高综合素质的军队高级医学人才是军医大学的主要任务,作者在生物化学课堂教学的过程中通过课前调研、课堂教化及课外引导,充分掌握生物化学教学在当前大学生素质教育过程中的薄弱环节,通过改进传统教学方法,将综合素质培养融合于科学知识的传授过程中。

将科学史教育融入医学生的生物化学教学中

通过对科学史教育融入生物化学教学的探索，总结了采用的教学手段和达到的教学效果。有利于培养素质全面的军事医学科学人才。

不同教学法在医学生物化学教学中的实践应用

医学生物化学是普通高等医学院校一门重要的基础课程,对于后续专业基础课程及临床专业课的学习起到铺垫作用。医学生认为医学生物化学内容过于抽象,概念性较强,代谢复杂,难以理解和把握,加上传统的教学方法枯燥,从而使学生逐渐丧失对医学生物化学的兴趣和信心。因此,探索合适的教学方法,激发学生医学对生物化学的兴趣和信心,提高教学质量已成为生物化学教师一项重要任务。该文就启发式教学方法、病例式教学法、错导式教学法、讨论式教学法以及多媒体教学法在医学生物化学教学中的应用进行分析比较,为该学科教学内容与教学模式的改革提供参考。

医学院校本科生生物化学教学探讨

通过总结近几年从事医学5年制及7年制本科生生物化学教学的经验,分析了当前医学院校5年制及7年制本科生生物化学教学中面临的主要困难,存在的主要问题,探讨了新形势下进一步有效提高本科生生化教学质量的可行性及方法。

hLNα4LG1基因克隆、表达及生物学活性检测

目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。

基于增殖诱导配体新型抗肿瘤分子的构建及初步筛选

目的构建针对APRIL的免疫抑制分子,并对其原核表达蛋白进行纯化及活性筛选。方法将可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)cDNA进行突变并插入TELTh表位序列,突变体用pQE-80L/DH5α原核表达系统进行表达,表达蛋白经SDS-PAGE鉴定、Ni-NTA亲和层析纯化及Western印迹分析,最后检测纯化蛋白对Raji细胞增殖的影响。结果成功构建并表达了4种sAPRIL突变体:C端引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅰ)、N端引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅱ)、C端缺失45bp序列并引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅲ)、N端缺失45bp序列并引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅳ)。SDS-PAGE电泳、Western印迹分析均检测到相应的特异蛋白带。用Ni-NTA系统成功纯化表达的突变体蛋白。细胞试验表明,突变体Ⅰ、Ⅱ纯化蛋白具有明显的促细胞增殖活性,而突变体Ⅲ、Ⅳ纯化蛋白没有促细胞增殖活性。结论在4种sAPRIL突变体中初步筛选到不具有促细胞增殖活性的APRIL免疫抑制分子,为下一步确定该分子的免疫抑制功能奠定了物质基础。

2型糖尿病基础研究中的难题与突破

近年来，糖尿病研究进展迅速，从刚结束的第5届国际前驱糖尿病及代谢综合征大会就可见一斑。糖尿病是以临床高血糖为特征的常见病，其中以2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）占绝大多数（90％～95％）。糖尿病常导致心血管和微血管并发症。我国糖尿病患者约9400万。T2DM的发病过程经历了正常糖耐量→糖调节受损→T2DM，主发病机制涉及胰岛β细胞功能障碍和外周胰岛素抵抗。

过表达SARI通过抑制AP-1转录并下调抗凋亡分子Mcl-1的表达诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探讨过表达SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)对宫颈癌细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法在He La细胞和Ca Ski细胞转染可表达SARI的质粒后,使用Real-time PCR和Western blot检测细胞中SARI表达水平的变化;CCK-8法检测上述宫颈癌细胞模型的增殖;流式细胞术分析上述细胞模型的周期及凋亡;报告基因检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot检测抗凋亡分子Mcl-1及Bcl-2的表达。结果成功构建过表达SARI的细胞模型。SARI表达水平上调后,细胞增殖受到抑制(P<0.01);早期凋亡细胞增加但细胞周期无明显变化。转录因子AP-1的转录活性及Mcl-1的表达明显下调(P<0.05),但Bcl-2的表达无明显变化。结论宫颈癌细胞中过表达SARI诱导宫颈癌细胞发生早期凋亡,可能是通过抑制AP-1的转录并下调抗凋亡分子Mcl-1的表达来实现的。

一种快速鉴定RNA质量的方法

目的 建立一种快速鉴定RNA完整性的方法。方法 在常规琼脂糖凝胶电泳的基础上 ,结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。结果 提取的总RNA用此方法电泳后可得到 2 8S、18S、5 .8S(5S)三条清晰的rRNA条带。结论 此方法可以达到对RNA完整性进行快速鉴定的目的。

橙皮甙抗LDL氧化及对MCP-1 mRNA转录的影响

目的 研究橙皮甙体内外抗脂质氧化作用及其对兔食饵性动脉斑块中单核细胞趋化蛋白 1mRNA转录的影响。方法 ①采用一次性密度梯度超速离心法制备正常人低密度脂蛋白 ,Cu2 + 诱导其氧化 ,测定不同药物浓度和作用时间体系中丙二醛含量。②采用高脂饮食加免疫损伤的方法建立家兔动脉粥样硬化模型 :将 18只家兔随机化分为正常对照组、模型组、橙皮甙组。每组 6只 ,分别给予普通饲料 (正常对照组 )和高脂饲料 (模型组 )喂养 ,橙皮甙组在喂高脂饲料的同时 ,加橙皮甙 ( 2g d)一同喂养。建模 10周末耳缘静脉采血 ,检测各组动物血清中丙二醛和一氧化氮的含量。而后处死动物 ,取胸主动脉 ,用逆转录聚合酶链反应技术检测动脉壁细胞中单核细胞趋化蛋白 1mRNA的转录水平。结果 体外实验中 ,橙皮甙显著抑制丙二醛的生成 ,并呈一定浓度依赖关系 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 0 1)。体内实验中 ,橙皮甙明显降低血浆丙二醛的含量 (P <0 .0 1)和一氧化氮的水平 (P <0 .0 0 1) ;并对胸主动脉壁细胞单核细胞趋化蛋白 1mRNA的转录有明显抑制作用 (P <0 .0 5 )。结论 橙皮甙在体内外均有抗氧化作用 ,其下调单核细胞趋化蛋白

大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白与皮质神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠全脑缺血再灌注后皮质组织中HAX-1蛋白(HS1-associated protein X-1,HAX-1)与皮质神经元凋亡的关系。方法建立大鼠四血管法全脑缺血模型,将实验动物分为5组(n=5):正常组,缺血6、24、48、72h组。采用HE染色,观察大鼠皮层组织病理变化;采用免疫组化、TUNEL法检测大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白的表达以及皮质神经元凋亡蛋白Caspase-3的表达情况。结果HAX-1蛋白在缺血后6h表达最高(37.60±3.45),24、48、72h降低[分别为(11.40±1.14)、(10.40±1.52)、(9.80±1.30)],且低于正常水平(P<0.01);Caspase-3蛋白随着缺血时间的延长逐渐增高[6、24、48、72h分别为(72.80±5.49)、(106.20±6.91)、(129.00±19.74)、(166.20±15.32)](P<0.01),并伴随神经元凋亡的数目逐渐增加[(92.00±9.06)、(133.80±10.64)、(157.00±10.83)、(187.80±14.96)]。结论全脑缺血再灌注后皮质神经元中HAX-1蛋白在短期缺血中表达升高,可能参与神经元的抗凋亡,随着缺血时间延长,其表达水平降低,与神经元的凋亡增强相关。

创伤死亡不同血糖水平患者存活时间、感染率和MODS发生率病历调查

目的研究创伤死亡不同血糖水平患者院前创伤评分(revised traum a score,RTC;glasgow com a scale,GCS)、3 d后死亡构成比、感染率和多器官功能不全综合征(mu ltipe organ dysfunction syndrom e,MODS)发生率的变化。方法随机抽查本院1999年1月至2005年1月455份住院创伤死亡病历,根据空腹血糖水平及正常参考范围分为创伤死亡正常血糖组57例和创伤死亡高血糖组298例。统计创伤死亡不同血糖水平组RTC、GCS、3 d后死亡构成比、感染率和MODS发生率及的变化,并计算创伤死亡患者血糖与MODS相关定量指标的相关系数。结果①创伤死亡高血糖组RTC为6.31±1.04,GCS为4.23±0.52;创伤死亡正常血糖组RTC为4.43±0.22,GCS为2.21±0.34。创伤死亡高血糖组院前创伤评分明显高于创伤死亡组正常血糖(P<0.01)。②创伤死亡高血糖组3 d后死亡构成比为67.34%,创伤死亡正常血糖组3 d后死亡构成比为17.54%。创伤死亡高血糖组3 d后死亡构成比明显高于创伤死亡正常血糖组(P<0.01)。③创伤死亡高血糖组感染率为83.92%,MODS发生率为71.86%;创伤死亡正常血糖组感染率为21.05%,MODS发生率为10.53%。创伤死亡高血糖组感染率和MODS发生率均明显高于创伤死亡正常血糖组(P<0.01)。④455例创伤死亡患者血糖水平与血ALT、AST、BUN、CRE、PCO2、CK明显正相关(P值均<0.01)。结论创伤死亡高血糖患者院内存活时间长,感染率和MODS发生率高。创伤死亡正常血糖患者伤情重,存活时间短,感染率和MODS发生率低。创伤高血糖患者死亡因素以感染和MODS为主,创伤正常血糖患者死亡因素以非MODS因素(大出血和颅脑直接损伤等)为主。创伤血糖水平升高可作为创伤MODS预警指标,但血糖正常预后也不一定好。

金龟子绿僵菌固体培养条件的筛选

测定了不同温度和pH及碳氮源、微量元素对金龟子绿僵菌菌丝生长及产孢的影响.结果表明:pH 7、温度25℃最适合绿僵菌生长,固体培养中蔗糖为碳源、酵母为氮源、加入微量元素Mn,金龟子绿僵菌生长最好、产孢量最高.用正交方法探索了金龟子绿僵菌的最适固体培养条件.

基于基因芯片的乳腺癌干细胞miRNAs检测分析

目的利用流式细胞仪(FACS)细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF-7中分选乳腺癌干细胞,并利用基因芯片进行其miRNAs表达谱分析。方法利用已知的乳腺癌干细胞的表面分子标志(CD44+ESA+CD24-/low),以相应的荧光标记抗体对细胞加以标记,FACS细胞分选获得乳腺癌干细胞,NOD-SCID移植瘤实验进行干细胞功能鉴定;分别提取细胞总RNA以及小分子RNA,经荧光标记后与miRNAs基因芯片杂交,获得乳腺癌干细胞miRNAs表达谱。结果从MCF-7中分选到约1%的CD44+ESA+CD24-/low细胞,NOD-SCID移植瘤实验表明其具有干细胞特性,基因芯片杂交获得20个乳腺癌干细胞相关miRNAs,其中4个为低表达,16个为高表达。结论乳腺癌干细胞具有自身特征性miRNAs,为进一步从干细胞层面研究乳腺癌发病机制及靶向治疗打下基础。

乳腺癌miRNAs表达谱检测及初步分析

目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱。结果成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达。结论建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。

一种用Tripure试剂从冻存组织分离纯化RNA的方法

目的 探索一种使提取的冻存组织RNA纯度和完整性均较高的方法。方法 在Tripure分离试剂说明书基础上 ,结合异硫氰酸胍等提取RNA的方法 ,对提取组织RNA的操作步骤进行调整、改进。结果 用此法提取的冻存组织RNA ,经电泳鉴定及进一步RT PCR检测 ,显示RNA的纯度及模板性较好。结论 用此法提取的冻存组织RNA质量稳定可靠。

抑制FoxO1基因表达的siRNA重组腺病毒载体的构建及功能鉴定

目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染293细胞,包装得到含si-FoxO1的重组腺病毒,体外转染人肝癌细胞系HepG2,Westernblot检测FoxO1蛋白表达水平的变化。结果成功构建针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。

姜黄素对乳腺癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制。方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0、1.25、2.5、5、10、20μg/m L)、姜黄素(0、1、5、20、30、50、100μmol/L)单独及联合处理后FEN1(flap endonuclease 1)表达水平的变化;CCK-8检测沉默FEN1对MCF7细胞中CDDP敏感性的影响。结果 CDDP、姜黄素均可以剂量依赖方式抑制MCF7细胞增殖,其IC50分别为5、30μmol/L;与单独2μg/m L CDDP处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素、30μmol/L姜黄素处理组对细胞增殖的抑制效应明显增强[分别为(84.1±0.8)%、(51.1±0.5)%、(29.4±0.3)%,P<0.05];与单独20μmol/L姜黄素处理组比较,20μmol/L姜黄素联合2μg/m L CDDP、5μg/m L CDDP处理组对细胞增殖的抑制效应也明显增强[分别为(76.9±0.7)%、(42.4±0.3)%、(31.6±0.4)%,P<0.05];2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组的细胞凋亡明显增强(P<0.05);与Control siRNA组比较,FEN1 siRNA+CDDP组可显著增强CDDP抑制MCF7细胞增殖的敏感性[(25.4±0.3)%vs(18.7±0.2)%,P<0.05];CDDP增殖抑制无效浓度或低浓度时,FEN1蛋白的表达随CDDP的处理剂量依赖性上调,而姜黄素可剂量依赖性下调FEN1蛋白表达;与单独CDDP和姜黄素处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组可显著降低FEN1蛋白表达(P<0.05)。结论姜黄素可增强CDDP对乳腺癌细胞的敏感性,其机制与降低细胞FEN1的表达有关。

盐酸青藤碱诱导EA.hy926细胞自噬及其在抗炎中的作用

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞EA.hy926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的EA.hy926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后EA.hy926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理EA.hy926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及EA.hy926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制EA.hy926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导EA.hy926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。

hERR1在乳腺癌中的表达及其对芳香族化酶表达的调控

目的 了解hERR1在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况 ,以及它对芳香族化酶基因表达的调节作用。方法 收集乳腺癌患者的临床标本 ,应用RT PCR法 ,研究癌组织及相应的癌旁组织中hERR1的表达情况 ;采用瞬时转染和CAT活性分析的方法 ,研究hERR1对芳香族化酶基因表达的调节。结果 hERR1在癌组织中的表达明显高于相应的癌旁组织 (16 2 6例 ) ;hERR1以剂量依赖方式促进芳香族化酶启动子Ⅰ 3活性。结论 hERR1在体内可能起到促进乳腺癌生长的作用。