重庆地区69例丙型肝炎病毒感染基因分型研究

目的 探讨重庆地区HCV流行的主要基因型。方法 提取 69份血清标本的HCVRNA ,通过逆转录套式PCR(RTnested PCR)扩增 5′端非编码区 (5′NCR) ,以 4种限制性内切酶BstUⅠ、NciⅠ、HaeⅢ、RsaⅠ对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析 (RFLP) ,依据不同的酶切电泳图谱确定HCV基因型。结果 69份HCV感染者血清标本有 60份可以通过上述方法进行基因分型 ,其中主要基因型是 1b,2a分别占 36 2 4 %和 31 88%。结论 HCV 1b ,2a仍然是重庆地区主要的基因型 ,但其所占比例不如中国其它地区高 。

乙型肝炎病毒感染原代培养人绒毛膜滋养层细胞的实验研究

目的探讨原代培养的人绒毛膜滋养层细胞感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的可能性及规律。方法采用胰酶/DNA酶序贯消化及Percoll密度梯度离心分离纯化人绒毛膜滋养层细胞后,采用血清直接感染法进行滋养层细胞的HBV感染,同时通过与对正常成人肝细胞株L02细胞的HBV感染后及转染HBV的肝癌细胞株（HepG2.2.15）的传代培养比较,实时荧光定量PCR检测培养上清的HBV DNA;并用透射电镜观察HBV感染后滋养层细胞的超微结构改变及其在滋养层细胞中的定位。结果原代培养的滋养层细胞感染HBV后释放至培养上清中的HBV DNA于感染后48-72h达高峰,而L02细胞则于感染后12-24h达高峰,HepG2.2.15细胞株感染后则一直攀升。透射电镜观察HBV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒,主要定位于细胞核周。结论HBV可以感染滋养层细胞,定位于核周并导致滋养层细胞的超微结构改变。

CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C多态性与慢性HBV感染发病易感性的关系研究

目的探讨MHCⅡ类反式激活因子(CⅡTA)启动子Ⅳ区G-944C基因多态性与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染发病易感性的关系。方法在1203例慢性HBV感染无症携带与慢性肝患者中,应用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)对CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C位点进行基因分型研究。结果CC基因型频率在2组人群中分别为25·7%和19·7%,彼此间相差显著(χ2=5.560,P=0·018),而GC基因型频率分别为43.6%和49.9%,彼此间相差显著(χ2=4·774,P=0·029);在G基因显性模式下(C基因隐性模式),即GG+GC基因型频率在无症状携带和发病组人群中分别为74.3%和80.3%,两者间相差显著(χ2=5.560,P=0·018);在慢性肝炎、慢性重型肝炎和肝炎肝硬变3组人群中,C等位基因频率分别为44.1%、45.8%和45.0%,彼此间相差不显著(P>0.05)。结论CⅡTA基因启动子Ⅳ中的G-944C位点多态性与慢性HBV感染者发病易感性存在一定的关系,而与疾病的严重程度无明显关系;基因型为CC纯合子的慢性HBV感染者不容易发展成慢性肝病。

肝移植后乙型肝炎病毒再感染相关因素的研究进展

目前,全球约有3亿5千万人感染乙型肝炎病毒(hepatitisB virus,HBV),近50％的感染者出现临床症状,约有5％发展为肝炎肝硬化,而每年因HBV感染而死亡的人数近一百万.对HBV相关的终末期肝病,根治一直是世界性难题,近年来,原位肝移植(OLT)的成功开展无疑为此类患者带来了曙光.但如果不给予一定的预防措施,其OLT后HBV再感染率可高达58-83％,最高可达90％.文献资料显示,OLT后HBV再感染发生可能与术前HBV复制状态、抗HBV药物应用前后病毒变异、免疫抑制剂及糖皮质激素的应用、肝外组织HBV存在情况等因素有关.本文就近年来相关的研究进展作一综述.

丙型肝炎病毒感染动物模型研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)感染是全球关注的公共卫生问题,对HCV分子生物学特性的深入探讨有赖于实验模型的建立.建立理想的HCV动物模型,不仅有利于丙型肝炎疫苗的研制,同时对深入研究丙型肝炎慢性化机制,包括病毒变异与宿主免疫应答以及与疾病的关系等,均具有重要意义. 文章主要介绍了黑猩猩、猴、树鼩转基因鼠以及人鼠嵌合肝模型感染HCV,同时探讨了该模型体系存在问题及应用前景。

欧洲肝病学会临床实践指南：HCV感染的管理(推荐意见)

欧洲肝病学会（EASL）近期发布了关于HCV感染管理的临床实践指南，并在线发表于（（JournalofHepatology〉）。作者在此对指南的推荐意见进行翻译，以供临床医生参考。建议分级参考表1。

发热门诊应对新发感染病应急演练流程

结合应对不同新发感染病演练的实践,设计总结出符合发热门诊特点的应急演练标准流程与实施程序路径图,对增强发热门诊应对新发感染病的能力,以及完善应急系统建设具有重要价值。

拉米夫定耐药的HBV再感染者阿德福韦酯治疗前后HBV多聚酶基因区序列演变的研究

目的探讨原位肝移植(OLT)后对拉米夫定(LMV)耐药的乙型肝炎复发者应用阿德福韦酯(ADV)治疗前后HBV多聚酶(P)基因区序列的演变,为肝移植后乙型肝炎复发的抗病毒治疗,以及针对病毒逃逸株的疫苗研制提供一定的理论依据。方法8例LMV耐药的HBV再感染者接受了ADV治疗,对2例治疗无效的患者服药前后HBVP基因区进行PCR扩增及TA克隆,随机选取10个阳性克隆进行DNA序列测定及分析。结果核酸序列分析未发现目前已证实的与ADV耐药性变异有关的A181V/T及rtN236T变异体,但有多个目前未报道的氨基酸替换位点,且服药前均有与LMV耐药性变异有关的rtL180M变异体存在。结论rtL180M替换可能影响ADV的抗病毒疗效;ADV耐药性变异很可能还存在于A181V/T及rtN236T以外的位点,抑或ADV耐药性变异株出现较晚。

聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV 6型感染者的临床疗效回顾性观察研究

目的探讨HCV 6型感染者的临床治疗方法。方法以聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV 6型感染者为试验组,治疗2/3型感染者为对照组,纳入病例必须完成治疗24周且随访时间达到24周以上。分析2组基本资料特征,比较2组病毒学应答效果。结果纳入HCV 6型感染者53例、2/3型感染者84例。HCV 6型、2/3型感染者获得RVR比例分别是88.7%、89.3%,率差95%可信区间为:(-0.113 9,0.101 9);获得EVR的比例分别是94.3%、96.4%,率差95%可信区间为:(-0.095 0,0.053 0);获得SVR的比例分别是86.8%、90.5%,率差95%可信区间为:(-0.147 6,0.073 6);HCV 6型、2/3型感染者RVR对SVR的阳性预测值分别为89.4%、93.3%,率差95%可信区间为:(-0.143 6,0.065 6);EVR对SVR的阳性预测值分别为88.0%、91.4%,率差95%可信区间为:(-0.142 8,0.074 8)。结论采用聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV 6型感染者的疗效非劣于2/3型感染者,故HCV 6型感染者推荐使用24周的标准联合抗病毒治疗方案。

腺病毒介导CTLA4Ig转染正常人肝细胞株的研究

目的研究腺病毒介导CTLA4Ig基因转染正常人肝细胞株L02后,CTLA4Ig在L02细胞内的表达、生物学活性以及对L02细胞生物学特性的影响。方法重组腺病毒载体Ad-CTLA4Ig-EGFP转染体外培养的正常人肝细胞株L02,观察绿色荧光在细胞内的表达情况。以免疫细胞化学、Western blot、ELISA等方法检测CTLA4Ig在L02细胞内、外的表达情况;通过绘制细胞生长曲线、检测尿素合成能力观察转染前后L02细胞的生物学特性;转染后的L02细胞与大鼠脾脏细胞共培养,通过检测脾脏细胞增殖情况评价表达CTLA4Ig的L02细胞在体外的免疫耐受活性;收集共培养体系中的大鼠脾脏细胞,再分别与正常L02细胞、HeLa细胞共培养,检测脾细胞增殖情况以评价转染后L02细胞免疫耐受的特异性。结果转染后的L02细胞可在细胞质内大量表达CTLA4Ig蛋白,并分泌至培养上清中;转染后L02细胞生长速度无明显改变(P>0.05),单个细胞尿素合成能明显升高[(0.56±0.01)pmol/d,P<0.01];转染后的L02细胞在体外可显著抑制大鼠脾脏细胞的增殖(抑制率约为36.8%,P<0.05),被抑制后的大鼠脾脏细胞在正常L02细胞刺激下增殖较低,但在HeLa细胞刺激下则可显著增殖(P<0.01)。结论Ad-CTLA4Ig-EGFP转染后的L02细胞可表达具有生物学活性的CTLA4Ig,并在体外表现出显著的具有抗原特异性的免疫抑制活性。

4种感染性腹泻病原菌免疫磁珠-多重PCR快速检测体系的建立

目的基于免疫磁珠分离及多重PCR技术建立出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的快速检测体系。方法根据出血性大肠埃希菌uidA、福氏志贺菌ipaH、空肠弯曲菌hipo及副溶血弧菌tlh的基因序列设计特异性引物,优化免疫磁珠分离过程及多重PCR扩增中的各个环节,建立上述4种病原菌同步快速扩增体系,并鉴定该体系特异性、敏感性。结果发现Mg2+浓度对该体系影响最大,在Mg2+浓度为4 mmol/L时扩增效率最高;该体系对4种病原菌的敏感性分别为:出血性大肠埃希菌2.7×10 cfu/ml、福氏志贺菌6.4×10 cfu/ml、空肠弯曲菌7.6×10 cfu/ml、副溶血弧菌3.6×10 cfu/ml。结论建立了出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的免疫磁珠-多重PCR快速检测体系,该体系特异性及敏感性高,检测过程简单,结果稳定,可应用于临床诊断及食品卫生监管中致病菌的快速检测。

构象敏感凝胶电泳用于检测乙型肝炎病毒P区核苷类似物耐药准种的初步研究

目的建立经济、实用、准确的乙型肝炎病毒准种分析方法。方法采用"PCR-克隆-测序"的方法,对2例血清样本的各60个克隆测序,χ2检验分析所研究克隆毒株的数量对准种组成反映准确性的影响;用建立的构象敏感凝胶电泳(CSGE)法区分克隆目的片段,比对CSGE结果与测序结果的一致性。结果对于优势准种比例的反映检测15个克隆以上(χ2=2.700,P=0.100>0.05)、对劣势株的检出检测30个以上则与检测60个克隆无统计学差异(χ2=2.411,P>0.05);比较8个样本共270个克隆的CSGE及测序结果,两者表现出良好的对应性(准确率达98.9%)。结论用"PCR-克隆-CSGE-测序"的方法视不同需求检测15或30个克隆可准确反映1份血清样本中HBV准种的组成和分布。

PGE1治疗慢性重型病毒性肝炎的临床研究

目的为探讨PGE1治疗慢性重型病毒性肝炎的机理和价值。方法本文观察了31例慢性重型病毒性肝炎患者PGE1治疗前后血浆内毒素、肿瘤坏死因子α(TNFα)、前列腺素E2(PGE2)水平及其他临床指标的变化。结果发现PGE1治疗有效患者血浆内毒素、TNFα、总胆红素(SB)水平下降,PGE2水平上升。结论应用PGE1治疗慢性重型病毒性肝炎可部分缓解病情和纠正重型肝炎的病理障碍,故可作为慢性重型病毒性肝炎综合治疗的一种有效药物。

重庆市儿童乙型肝炎病毒感染及治疗现状分析

目的了解我院就诊儿童乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染和治疗现状。方法收集2014年在第三军医大学西南医院门诊和住院部就诊并检测乙型肝炎病毒血清标记物（hepatitis B virus serum markers,HBV M）的重庆籍儿童（年龄≤17岁）共4 494例,对HBV M结果进行统计分析。结果查体HBs Ag、HBs Ab、HBc Ab阳性率及HBV M全阴性率分别为1.7%、49.8%、16.6%、31.9%;1~3岁组HBs Ab阳性率为65.4%,显著高于其他3组（χ2=17.0、73.3、49.4,P〈0.05）;11-17岁组HBs Ag阳性率为2.6%,显著高于其他3组（χ2=5.6、12.4、8.4,P〈0.05）。因慢性乙型病毒性肝炎复诊儿童HBs Ag确诊阳性率为89.2%,1~3岁组最低,为53.8%;核苷类似物（LAM、Ld T、ETV）抗病毒治疗96周时,生物化学和病毒学应答率均高于85%;LAM、Ld T治疗96周和IFN-α治疗48周时血清学应答率均达到40%。在抗病毒治疗过程中,定期监测相关指标的共35例,占36.5%。结论重庆市儿童乙型肝炎病毒查体阳性率（1.7%）明显下降,但仍高于国家要求的防治目标（1%）;新发现HBs Ag阳性的儿童应增加监测次数,需复诊明确HBs Ag阳性情况。儿童抗病毒治疗取得了理想的应答率,但定期监测情况并不乐观,应加强其治疗方案的管理监督。

HLA-DQA1和-DQB1等位基因与乙型病毒性肝炎相关性的研究

不同个体对乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)易感性的差异与个体的免疫特性有关,而后者主要取决于人类主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex, MHC)。人类白细胞抗原(Human leucocyte antigen, HLA)是MHC的基因产物,是首次发现的与疾病有明确关系的遗传系统。HLA复合体作为调节机体免疫应答的重要基因群,与抗HBV免疫反应有着密切的关系,某些特殊的HLA基因型可能影响着HBV感染的慢性化和免疫反应的强弱。作者利用PCR/

慢性HBV感染者血清病毒动力学的检测及分析

目的:观察未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者体内病毒载量的变化及其动力学特征。方法:采用荧光定量PCR方法对未进行抗病毒治疗的3例不同临床表型的慢性HBV感染者血清HBV载量进行连续监测,同时测定每一时相点的血清ALT和总胆红素. 结果:不管是间隔1 d、1wk还是1mon,3例慢性HBV 感染者体内HBV DNA水平均存在自发波动,且与血清ALT和总胆红素变化相关性不确定. 结论:3例慢性感染者体内HBV载量的自然波动表现出一定的模式特征.我们提出—种宿主对病毒负反馈控制的PID 模式,以期对持续性病毒感染的体内生态演化作出评价和预测.

科学认识H7N9,有效防控人感染禽流感病毒

自2013年2月以来,华东地区上海市、安徽省、江苏省、浙江省先后发生不明原因重症肺炎病例,大多数患者病前曾有活禽鸟接触史,经病原体分离鉴定后,于3月31日将其确诊为人感染H7N9禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）。截止到2013年4月15日共确诊病例63例,死亡14例。目前病例均为散发,并未见人际间传播。疫情出现后,国家卫生与计划生育委员会、疾病防治控制中心立刻启动应急预案,