提高烧伤患者自尊水平的心理干预

目的:制定一套临床可行、有效的烧伤患者心理干预训练模式以提高烧伤患者自尊水平。方法:120例烧伤患者分为干预组和对照组各60例,均给予常规治疗和护理,干预组并配合心理干预训练2个月。参照自尊量表36个项目对2组患者治疗前后自尊水平进行评分。结果:治疗2个月后,干预组患者自尊水平与对照组比较有显著提高,其中轻度患者自尊水平改善比中、重度患者更明显;不同性别、文化程度患者在自尊改善项目上存在差异。结论:有效的心理干预模式能显著改善烧伤患者的心理素质,提高自尊和健康水平。

混合胸腺移植诱导免疫耐受和防止发生自身免疫性疾病的实验研究

目的:探讨混合胸腺移植诱导移植免疫耐受而不发生自身免疫性疾病的可行性。方法:BALB/c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺,建立异种、同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。4个月后,用流式细胞仪技术检测受者外周血中T细胞,用混合淋巴细胞培养了解T细胞对刀豆素A(ConA)以及同种异种淋巴细胞的反应性,异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。术后6个月内比较各组发生自身免疫性疾病情况,观察胃的组织学变化,用ELISA法检测受者血清中抗DNA自身抗体。结果:胸腺移植后,受者T细胞重建良好;T细胞对ConA及无关的SD鼠淋巴细胞的反应强,而对移植胸腺供者来源的淋巴细胞无增殖反应;受者对胸腺供者来源皮肤移植物不发生排斥,而对无关的SD鼠皮肤移植物发生排斥。异种组发生自身免疫性疾病率高,异种组胃组织有明显的炎性损害,血清中自身抗体明显高,而混合组未观察到明显的炎性改变。结论:同系或同种、异种胎胸腺混合移植,可诱导供者特异性免疫耐受和防止器官特异性自身体免疫性疾病。

心肌细胞牵张模型建立的实验研究

目的:机械信号的转导与感受成为生命科学研究的理论前沿,如何对细胞施加机械刺激是进行此领域研究的前提。建立体外培养的心肌细胞牵张模型是研究的目的。方法:实验于2003-11/2004-01在解放军第三军医大学创伤烧伤复合伤国家重点实验完成。采用胰酶消化法分离培养乳鼠心肌细胞,纯化后接种于硅酮膜上,依照10%的牵张强度对心肌细胞施加机械刺激,观察心肌细胞形态、培养液中乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)含量及碘化丙啶染色阳性细胞比例的变化。结果:10%牵张过程中,细胞沿受力方向排列。10%牵张后心肌细胞进一步铺展,伪足数目明显增加。牵张前后培养液中LDH含量犤培养12h(710.6±69.5)IU/L,牵张12h(769.8±66.7)IU/L犦及碘化丙啶染色阳性细胞比(牵张前0.53%,牵张12h后0.54%)无明显变化。结论:建立了较好模拟体内刺激强度的模型,并证实10%牵张对心肌细胞不是一种损伤因素,在某些方向还可能上调细胞功能。

2006年至2007年我院烧伤创面感染细菌及耐药性监测

目的了解近2年本所分离菌株和耐药情况。方法采用纸片扩散法(KB法)和采用CLSI 2006年的判断标准对595株临床分离菌做药敏试验。结果595株细菌中G-菌占61.51%,G+菌占36.3%;G-球菌占0.84%,真菌占1.75%。发现铜绿假单胞菌对头孢曲松、头孢呋新、头孢塞肟和哌拉西林耐药率高达92.5%～99.1%,更甚者为鲍曼不动杆菌,对头孢唑啉、头孢曲松、头孢哌酮和丁胺卡那霉素耐药率均高达100%。变形杆菌和大肠埃希菌耐药性相对较低。结论烧伤感染常见菌为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、变形杆菌和金葡菌,而且耐药性很强。

212例烧伤患者创面细菌学分析

目的指导临床合理用药,提高医疗质量。方法常规细菌培养,采用Kerby-Baner纸片扩散法对487份病人标本行耐药性监测。结果212例病人送标本487份,检出412株病原菌;其中G-214株(51.94%),G+菌189株(45.87%),耐甲氨西林金黄色葡萄球菌(MRSA)92株(18.89%),霉菌9株(2.18%);敏感率较高的抗生素是美罗培南,亚胺培南,氧哌嗪青霉素和丁胺卡那霉素。结论烧伤创面感染病原菌常见为金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,变形杆菌,且耐药性强。

100例严重烧伤死亡病例分析

目的 通过对两阶段烧伤死亡病人基本情况进行对比分析 ,以期探讨进一步提高烧伤救治率的有效措施。方法 总结近 2 0年死亡烧伤病人 10 0例 ,按前后各 10年各 5 0例病人分组 (A和B两组 ) ,对其病死率 ,烧伤面积 ,深度 ,致伤原因 ,院前治疗情况 ,入院时间 ,存活时间 ,吸入伤 ,气管切开 ,呼吸机与纤支镜的应用 ,手术例次 ,血液透析及死亡原因等进行对比分析。结果 两组烧伤严重程度无差别 ,致伤原因 (多为火焰 ,爆炸和热液 )和死亡原因 (严重全身感染 ,多脏器衰竭和吸入性损伤 )也类似 ,而近 10年烧伤病死率明显降低 ,而入院时间明显滞后 ,但病人入院后存活时间明显延长 ,进一步分析发现近 10年气管切开和呼吸机应用更加积极和应用广泛 ,纤支镜辅助检查和治疗增多 ,手术积极并例次增多 ,血液透析病例增多。结论 近 10年积极的气管切开 。

人β1整合素近端和远端启动子报告基因载体的构建和鉴定及启动活性分析

目的:克隆整合素β1近端启动子和远端启动子基因序列,构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3-261和pGL3-1442。方法:以本室构建的含整合素β1全长启动子基因序列(1756 bp)的重组载体pGL3-β1为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1近端和远端启动子基因序列,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的基因的表达载体pGL3-261和pGL3-1442,经NheⅠ、XhoⅠ酶切、聚合酶链式反应(PCR)扩增及测序鉴定;并用pGL3-261和pGL3-1442质粒与pGL3-β1质粒同时转染人表皮细胞株HaCaT进行活性分析。结果:酶切及序列测定表明,克隆获得的近端启动子261bp和远端启动子1442bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确;此三种质粒都有明显的启动子活性,远端启动子活性与全长启动子活性无显著差异,但明显高于近端启动子活性。结论:成功构建了整合素β1近端和远端启动子基因序列荧光素酶报告基因载体,整合素β1远端启动子在HaCaT细胞中起主要作用。为下一步研究人整合素β1启动子核心区、基因表达调控机制及其信号转导通路等奠定基础。

β_1整合素启动子荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定

目的克隆β1整合素(CD29)启动子区基因全长序列,构建并鉴定β1整合素启动子全长序列荧光素酶报告基因载体pGL3-β1。方法以含β1整合素启动子基因全长序列的基因片段(2 735 bp)的重组pGEM-T easy载体为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1启动子基因全长序列1 756 bp,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的基因的表达载体pGL3-β1,并NheⅠ、XhoⅠ酶切、PCR及测序鉴定;并以该质粒转染人表皮细胞株HaCaT进行活性检测。结果酶切、PCR及序列测定表明,克隆获得的1 756 bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,插入方向正确;且pGL3-β1启动子在人表皮细胞株HaCaT中有明显转录活性。结论成功构建了β1整合素启动子基因全长序列荧光素酶报告基因载体,为下一步研究人β1整合素启动子的活性分析、基因表达调控机制及其信号转导通路等研究奠定基础。

如何指导学生查阅科技文献

科技文献的阅读与信息收集是科学研究的基础,就如何指导学生进行高效、完整、全面而深入的文献阅读,而从如何确定阅读的范围、如何进行大范围文献的泛读、如何进行相关文献的精读、如何进行信息的收集、整理及总结等几个方面进行了论述,对教师指导学生及学生本人阅读科技文献有一定帮助。

His-AMPKα1^312截短缺失融合蛋白原核表达载体的构建与纯化

目的构建His-AMPKα1312截短缺失融合蛋白原核表达载体,表达重组AMPKα1312为深入研究各种病理生理条件对AMPK活化的影响奠定基础。方法经RT-PCR获得AMPKα1截短基因片段,定向插入原核表达载体PET28a(+),构建重组表达质粒YH2/PET28a(+),转化DH5αE.coli,经IPTG诱导表达及镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化后SDS-PAGE分析及Western blot检测。结果经测序和PCR证实重组表达质粒YH2/PET28a(+)构建正确。表达的截短缺失蛋白相对分子量约为38 kD,Westernblot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性。结论已成功构建并纯化了具有生物学活性的AMPKα1312截短缺失蛋白,为深入研究AMPK奠定了基础。

抗内毒素Fab’的制备

目的研究抗内毒素卵黄免疫球蛋白(IgY)的活性片断Fab’,探讨防治内毒素血症的新途径。方法用内毒素(LPS)作为抗原免疫25周龄德国罗曼鸡,改良水溶法提取抗内毒素IgY,胃蛋白酶切后提取Fab’片断,光密度法测抗内毒素Fab’的浓度和含量、ELISA检测抗内毒素Fab’效价、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度。结果抗内毒素Fab’含量为4.2mg/mL蛋黄液,效价为1∶51200,纯度为92%,相对分子质量为44000。结论抗内毒素Fab’产量大、效价高、特异性强。

血管内皮细胞EA．hy926对短期低氧的反应性研究

目的观察短期低氧应激对血管内皮细胞的影响。方法制作血管内皮细胞低氧应激模型,采用低细胞毒性的染料Almnar Blue染色法测定常氧和低氧培养条件下的细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞周期,采用膜联蛋白V-荧光素/碘化丙锭(Annexin V-fluorescein/PI)双标记法检测细胞凋亡,应用蛋白免疫印迹方法(Westem blot),检测细胞内缺氧诱导因子和增殖细胞核抗原的表达。结果短期低氧(1～3 h)应激可以增强血管内皮细胞活力,细胞周期显示细胞4倍体峰比例增高,随着低氧时间的延长(6～12 h),细胞4倍体峰回落至常氧水平。短暂低氧(3 h),细胞凋亡比例明显增高。蛋白免疫印迹检测显示,缺氧诱导因子-1α和增殖细胞核抗原在低氧后表达增高,与低氧反应呈时间效应依赖关系。结论短期低氧启动了以增殖和活力增高为特征的血管内皮细胞适应性反应,同时也诱导了以细胞凋亡为特征的细胞损伤性反应。

一种双侧供肾大鼠肾移植模型的建立

目的探讨同时取大鼠双侧肾脏分别移植的可行性,其目的是节省实验费用、缩短手术时间。方法以近交系Brown-Norway大鼠为供者,同时取其双肾作为供肾,原位灌洗;近交系Lewis大鼠为受者,切除其左肾,移植供肾1只。以冠状动脉造影支架为支撑行供肾静脉与受者肾静脉端端吻合,供肾动脉与受者的腹主动脉行端侧吻合,供肾输尿管膀胱瓣与受者的膀胱吻合。受者术中预置右侧肾脏血管体外结扎线,术后3d结扎。结果每只供鼠手术耗时约40min,热缺血时间约10s,冷缺血时间约20min。40次实验均获成功,移植肾功能正常,在不用免疫抑制剂的情况下,受者存活时间均超过7d。结论同时取双侧肾脏分别移植给2个受者是可行的,可降低实验成本;要获得相同数量的供肾,同时取双肾的耗时较仅取单侧肾脏大大缩短。

缺氧对钙／钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶表达的影响及其与p38 MAPK信号通路活化的关系

目的探讨缺氧对钙／钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）表达的影响及其与p38MAPK信号通路活化的关系。方法采用定量PCR方法Western blot技术，检测内皮细胞株的CASK在常氧和缺氧1、3、6、12h条件下表达情况。采用Western blot技术，检测常氧和缺氧1、3、6、12h条件下p38 MAPK 180位苏氨酸／182位酪氨酸双位点磷酸化情况，及p38信号通路特异性阻断剂SB203580预处理1h，血管内皮细胞缺氧3h后CASK蛋白的表达。采用双荧光素酶报告系统，分析常氧和缺氧1、3、6．12h条件下CASK启动子报告基因的活性。结果缺氧能够明显上调CASK mRNA和蛋白的表达，缺氧3h，CASK mRNA的表达为常氧对照组的1．8倍，CASK蛋白表达为常氧对照组的1．4倍。p38MAPK信号通路阻断剂SB203580预处理，能够以剂量依赖性方式抑制3h缺氧诱导的内皮细胞CASK蛋白表达。不同时间的缺氧能够明显增强CASK荧光素酶报告基因的活性。结论缺氧能够诱导内皮细胞CASK的表达部分依赖于p38MAPK信号的活化。

表皮细胞迁移与创面愈合

创面愈合是动态的、严格有序的生物学过程,再上皮化在其中起着非常重要的作用。皮肤创面的再上皮化主要依赖于表皮细胞从创缘向创面中心的迁移。创面形成后由于局部血液循环障碍和创周细胞氧耗的增加,导致创面形成低氧的微环境,低氧已经被证明能够促进表皮细胞迁移和创面愈合。创面形成后由于跨上皮电势差的消失产生内源性的直流电场,此电场是创面愈合过程中指导表皮细胞向创面中心迁移的最重要的方向信号。此外,创面形成后产生的炎症因子一氧化氮被证实也能够促进表皮细胞迁移和创面愈合。综上所述,低氧、电场和一氧化氮可通过促进表皮细胞向创面中心迁移进而加快创面愈合过程。