肺腺癌细胞株体外三维培养模型的建立及其药物敏感性的观察

目的 探讨肿瘤细胞三维培养的理想方法 ,为模拟体内实体瘤细胞间相互作用提供良好模型。方法 在抑制细胞贴壁、间断振荡条件下 ,培养无载体三维细胞模型 ;利用微载体CutiSpher进行多细胞球 (multicellularspheroids ,MCS)培养 ;MTT法检测单层细胞 (monolayercells ,MC)药物敏感性 ,细胞计数法检测MCS药物敏感性 ;利用透射电镜比较MCS与MC超微结构的差异。结果 无载体三维细胞培养在培养 4d后即可形成由多个细胞组成的细胞团。MCS在培养 0 5h后即可见细胞贴附于载体 ;培养 5d后 ,形成有多层细胞结构的细胞球。与MC相比 ,MCS药物敏感性显著下降 ;细胞器及微绒毛丰富 ;细胞间粘附广泛而紧密。结论 MCS细胞生长活性好 ,能较好地模拟体内实体瘤的细胞间相互作用 ,特别是细胞间粘附 ;

腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰的骨髓基质细胞诱导特异性免疫耐受的实验研究

目的 通过腺病毒介导CTLA4Ig在骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs)中的表达 ,探讨CTLA4Ig体外诱导特异性免疫耐受的机制 ,为该基因修饰的BMSCs联合造血干细胞移植 (hematopoieticstemcelltransplantation ,HSCT) ,达到预防移植物抗宿主病 (graft versus hostdisease ,GVHD)和纠正预处理损伤的造血微环境 (hematopoieticinductivemicroenvironment,HIM)积累实验依据。方法 以CTLA4Ig 重组腺病毒按感染复数 (mutiplicityofinfection ,MOI) 5 0转染BMSCs,利用亲和层析的方法纯化培养上清中的目的蛋白CTLA4Ig ,加入到混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)体系中 ,通过MTT显色观察其抑制淋巴细胞增殖的生物学效应 ,以ELISA检测体系中IL 2的水平。结果 纯化的CTLA4Ig对MLR反应体系中淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用 ,且在一定范围内与CTLA4Ig的浓度呈依赖性关系 ;体系中IL 2水平与淋巴细胞数有相似的变化趋势 ,且成正相关 (γ =0 85 2 2 ) ;CTLA4Ig组的淋巴细胞数与IL 2水平与对照组相差显著 (P <0 0 5 )。结论 转染后BMSCs表达的目的蛋白CTLA4Ig能有效阻断B7/CD2 8共刺激信号途径 ,从而抑制T细胞活化 ,抑制IL

A549-ADR与纤维连接蛋白结合后对其耐药性的影响

目的 研究肿瘤细胞与基质粘附对肿瘤耐药性的影响 ,并探讨其机制。方法 应用MTT法研究A5 4 9 ADR耐药细胞与基质成分纤维粘连蛋白 (FN)结合对药物敏感性的影响 ;采用TUNEL法检测细胞凋亡 ,采用流式细胞术观察bcl 2和Bax基因表达。结果 A5 4 9 ADR细胞与FN结合后 ,其耐药性明显增加 (抑制率为 10 2 7% ,对照组为 4 6 0 1% ,P <0 .0 1) ,用抗 β 1整合素抗体阻断其与FN结合 ,其对药物的敏感性又恢复至对照水平 (抑制率为 4 0 86 % ,与对照组比P <0 .0 5 ) ;A5 4 9 ADR细胞与FN结合后 ,bcl 2基因蛋白表达上升 (6 2 0 8% ) ,Bax表达降低 (14 79% ) ,凋亡率 (8 74± 1 0 1) %显著降低 ,对照组为 (16 38±1 0 7) %阻断其与FN结合 ,bcl 2表达明显下降 (2 3 5 9% ) ,而Bax表达上升 (75 83% ) ,凋亡率也升至 (17 2 4± 1.75 ) % (与对照组比P <0 .0 5 )。结论 肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调bcl 2基因表达 ,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力 ,从而增加肿瘤耐药性。

骨髓基质细胞支持CD34^+细胞扩增的实验研究

目的 体外模拟造血微环境 ,观察CD34+ 细胞在骨髓基质细胞支持下的扩增效应。方法 将免疫磁珠阳性选择分选的骨髓CD34+ 细胞接种于构建的基质细胞层培养 ,通过骨髓基质细胞支持CD34+ 扩增的细胞总数及集落形成细胞数 (colonyformingcell,CFC)的变化 ,评价骨髓基质细胞支持CD34+ 细胞扩增的功能。结果 扩增后细胞总数及CFC数分别增加 ,表示骨髓基质细胞能很好地支持CD34+ 细胞扩增。结论 体外证实了骨髓基质细胞在造血干细胞更新。

自发性腹膜炎腹水细菌潜生体形成及其生物学特性研究

目的 :观察自发性腹膜炎患者腹水中细菌潜生体 (CGC)的生物学特性。方法 :用细菌形态学检测方法观察腹水细菌 CGC的形成 ;用细菌显微培养技术、细菌遗传稳定性试验和最小抑菌浓度 (MIC)测定并观察CGC的生物学特点。结果 :自发性腹膜炎患者腹水中 CGC具有传代生长、繁殖方式多样、活动能力强和抗生素耐受力强的特点。结论 :自发性腹膜炎患者腹水 CGC有很强的繁殖能力、运动能力和抗生素耐受力 。

CTLA4Ig基因修饰的BMSCs在GVHD发生中的意义

目的 通过腺病毒介导CTLA4Ig在骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs)中表达 ,探讨CTLA4Ig体外诱导T细胞特异性免疫耐受的可行性及其机制 ,并观察该基因修饰的BMSCs促进造血的功能。方法 以CTLA4Ig 重组腺病毒按感染复数 (mutiplicityofinfection ,MOI) 5 0转染BMSCs,利用亲和层析的方法纯化培养上清中的目的蛋白CTLA4Ig,加入到混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)体系中 ,通过MTT显色观察其抑制淋巴细胞增殖的生物学效应 ,以ELISA检测体系中IL 2的水平 ;通过BMSCs支持CD34+ 细胞扩增 ,观察基因修饰对其支持造血的影响。结果 纯化的CTLA4Ig对MLR反应体系中淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用 ,且在一定范围内与CTLA4Ig的浓度呈依赖性关系 ;体系中IL 2水平与淋巴细胞数有相似的变化趋势 ,且成正相关 (r =0 .85 2 2 ) ;CTLA4Ig组的淋巴细胞数与IL 2水平与对照组相差显著 (P <0 .0 5 ) ,但支持CD34+细胞扩增的能力无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 CTLA4Ig的表达能有效阻断B7 CD2 8/CTLA4共刺激信号途径 ,从而抑制T细胞活化 ,抑制IL 2的产生 ;

脐血CD34^+细胞分化为树突状细胞过程中JAK2、STAT5蛋白的表达及活化

目的 检测脐血CD3 4+ 造血干 祖细胞分化为树突状细胞过程中JAK2、STAT5蛋白的表达及活化 ,从而了解JAK STAT信号途径在CD3 4+ 造血干 祖细胞向DC分化中的作用。方法 体外诱导脐血CD3 4+ 细胞向DC分化 ,用免疫印迹方法检测CD3 4+ 细胞、分化第 7天细胞和分化第 14天的细胞中与GM CSF密切相关的JAK2和STAT5蛋白的表达及其在GM CSF作用下蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果 分离的CD3 4+ 细胞和诱导分化第 7天、第 14天的细胞在正常静止状态下 ,均表达一定量的JAK2 ,而且在所有的时间点JAK2蛋白的表达量类似 ,随着细胞向DC分化酪氨酸磷酸化JAK2水平明显增加 ;STAT5在CD3 4+ 细胞分化前即有明显表达 ,随着向DC分化 ,其表达量增加。随着DC的分化成熟 ,STAT5的酪氨酸磷酸化水平提高。STAT5的活化高峰较JAK2的酪氨酸磷酸化滞后。结论 JAK STAT途径可能参与了GM CSF刺激作用下CD3 4+

重组腺病毒介导的反义c-myc基因对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察重组反义cmyc腺病毒(AdAscmyc)对急性早幼粒白血病HL60细胞周期及增殖的影响,探讨其作用的分子机制.方法:将AdAscmyc与鱼精蛋白硫酸盐(Protaminesulfate)混合后转染HL60细胞,MTT法观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞增殖周期,RTPCR检测cmyc转录变化,免疫细胞化学检测cmyc及增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化.结果:AdAscmyc转染HL60细胞后,细胞生长受抑,细胞周期呈现G1期延长、S期缩短,增殖指数逐渐下降,出现大量凋亡细胞.cmyc基因转录及表达下降,PCNA表达降低.结论:AdAscmyc可使HL60细胞的生长减缓,增殖能力降低,凋亡细胞增加.其生物学活性与HL60细胞cmyc和PCNA表达受抑有关.

cagA基因阳性幽门螺杆菌培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系GES-1生长的影响

目的 研究cagA+ 幽门螺杆菌 (Hp)培养滤液对人胃粘膜上皮细胞 (GES 1)的作用及机制。方法 制备Hp培养滤液 ,PCR鉴定cagA基因。采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验、单细胞微凝胶电泳及流式细胞仪等 ,观察Hp(cagA+ )培养滤液对GES 1细胞的作用。结果 经Hp(cagA+ )培养滤液处理的GES 1细胞 ,细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂。生长曲线可见细胞增生活跃 ,增殖率 195 %。克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强 ,增殖率达到 337.5 %。流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组。Hp(cagA+ )培养滤液可使GES 1细胞形成彗星现象。结论 Hp(cagA+ )培养滤液可以导致GES 1细胞的生长特性改变 ,呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征。DNA损伤可能是cagA诱导GES 1细胞生长特性改变的机制之一。