多抗原肽免疫血清体外阻断丙型肝炎病毒感染树鼠句肝细胞的初步研究

目的 探讨多抗原肽 (MAP)免疫血清在体外能否阻断丙型肝炎病毒 (HCV)感染树鼠句肝细胞 ,为研制HCV分子疫苗提供实验基础。方法 用兔抗MAP血清分别与两份感染血清按一定比例混合后接种于原代培养的树鼠句肝细胞中 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫组化、原位杂交分别检测细胞内或上清中正负链RNA ,细胞内HCVNS3抗原的表达情况 ,以及原位检测细胞内HCV负链RNA。结果 1份HCVRNA阳性血清与兔抗MAP血清按 1∶1混合后接种于培养的树鼠句肝细胞中 ,细胞内可检出HCV正负链RNA ,并有HCVNS3抗原的表达 ,而另外 1份HCVRNA阳性血清与兔抗MAP血清按 1∶1、5∶1、10∶1混合后接种于培养的树鼠句肝细胞中 ,细胞内未检测出HCV正负链RNA ,也未见特异性抗原表达。结论 兔抗MAP血清在体外能部分阻断HCV感染。

HCV体外感染正常成人肝细胞的研究

目的 为进一步研究丙型肝炎免疫发病机制、临床治疗和疫苗研制提供最接近自然感染状态的理想细胞模型。方法体外二步灌流法分离正常成人肝细胞并维持培养 1月以上 ,丙型肝炎患者血清感染上述肝细胞并用免疫组化和逆转录 聚合酶链反应法 (RT PCR法 )检测被感染肝细胞HCV抗原表达及HCVRNA。结果 正常成人肝细胞可在体外存活 1月以上 ,加丙肝患者血清4～ 3 6d后免疫组化法可检测到肝细胞内HCVNS3、NS5抗原表达 ,感染后 2～ 3 6d ,RT PCR法可在感染肝细胞培养上清和细胞悬液中间断检测出HCVRNA。结论 正常成人肝细胞可在体外存活 1月余并被HCV感染者血清感染。

丙型肝炎病毒结构区基因变异的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒 (HCV)结构区变异在HCV感染慢性化中的作用。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增HCV的C、E1及E2 /NS1区核苷酸片断 ( 1kb) ,扩增产物进行克隆 ,以单链构象多态性 (SSCP) /异质性双体分析 (HDA)方法对每份血清中 30个克隆的C/E1和E2 /NS1区准种 (Quasispecies )进行优化筛选 ,分析HCV急性感染者和持续性感染者血清准种复杂性。结果 HCV的C/E1区和E2 /NS1区扩增片段形成的SSCP条带间差异明显 ,但E2区形成的异质性双体与同源双体之间差距更显著 ,准确地反映结构区准种的复杂性 ;HCV持续性感染者比急性感染者血清的E2区准种复杂性明显增加。

477例重型病毒性肝炎预后影响因素分析

目的 通过 4 77例重型病毒性肝炎的临床总结 ,探讨重型病毒性肝炎预后的影响因素。方法 对 4 77例重型病毒性肝炎临床资料进行回顾性分析。结果 急性重型病毒性肝炎 ,亚急性重型病毒性肝炎及慢性重型病毒性肝炎病死率分别为87.5% ,78.7%和 72 .5% ,三者之间无明显差异 ,与性别无关 (P >0 .0 5) ;年龄大于 50岁者病死率为 85.1 % ,预后差 ,但病死组病人血清胆红素 [( 4 0 8.5± 1 0 4 .1 ) μmol/L]、肝性脑病 ( 6 7.1 % )、消化道出血 ( 2 8.0 % )、肝肾综合征 ( 31 .1 % )及严重感染 ( 38.6 % )发生率明显高于好转或治愈组 [( 36 7.4± 1 1 2 .5) μmol/L ,1 8.1 % ,1 3.5% ,0 ,2 1 .3% ,P <0 .0 1 ];凝血酶原活动度 ( 2 5.7%± 7.1 % )明显低于好转或治疗愈组 [( 34 .4± 5.4 ) % ,P <0 .0 1 ]。结论 高龄 ,高胆红素 ,凝血酶原活动度降低并发肝性脑病、消化道出血、肝肾综合征及严重感染是重型肝炎预后不良的因素。

乳猪肝细胞-196℃保存的初步研究

目的 探索适合于乳猪肝细胞 -196℃冷冻保存的条件和方法。方法 体外分离新生乳猪肝细胞 ,以含不同浓度二甲亚砜 (DMSO)的冻存液及不同的细胞浓度在液氮中保存。 2个月后复苏接种培养 ,对其存活率、贴壁率、尿素合成能力、猪白蛋白mRNA的表达等进行检测 ,并观察其形态结构变化。结果 不同DMSO浓度保存猪肝细胞复苏后的活力及形态均有所不同 ,其中含 5 %DMSO冻存液组保存效果最差 ;10 %组次之 ;15 %组最佳。 15 %DMSO冻存液组复苏后肝细胞的存活率为 ( 83± 4) % ,贴壁率是 ( 81± 5 ) % ,细胞形态与未冻存组相似 ,均保持较强的尿素合成能力及猪白蛋白mRNA的表达 ,较 5 %与 10 %DMSO冻存液组有显著性差别 (P <0 .0 5 )。冻存时肝细胞浓度为 ( 5～ 10 )× 10 6个 /ml组复苏后细胞存活率明显优于 ( 1～ 2 .5 )× 10 6个 /ml组。结论 15 %DMSO浓度适合于乳猪肝细胞的长期保存。

用猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的初步研究

目的 对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价。方法 采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统 ,对 5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持 ,综合评价其临床疗效和安全性。结果 5例患者经混合人工肝支持后 ,肝衰竭均得到不同程度的控制 ,表现为临床症状和肝衰竭相关指标好转 ,肝性脑病改善。最终 2例好转出院 ,1例经肝移植存活 ,2例死亡 ,死亡原因与不良反应无关。

中药消核片所致药物性肝炎的临床与病理特点

目的 分析中药消核片与部分女性肝炎的关系 ,并探讨其所致药物性肝炎的临床与病理特点。方法 对 30例病因不明的女性肝炎患者 ,进行各种血清肝炎相关病毒标志、自身抗体、肝功能检测及临床分析 ,并对 1 0例患者进行常规病理检查。结果 30例患者病前均有服用中药消核片的病史 ,血清甲 戊型肝炎病毒标志及HGVRNA、TTVDNA、抗 EBVIgM、抗 CMVIgM均阴性 ,血清各种自身抗体阴性。服用消核片时间越长者 ,其肝损害也越严重。本组病例的临床表现和病理改变与病毒性肝炎基本相似 ,但仍有以下特点 :①血清AST升高幅度明显超过ALT ,分别为 (40 7 2±2 0 3 7)IU/L和 (2 78 1± 1 66 2 )IU/L ;②83 3 %患者出现黄疸 ,其中 56 7%的患者血清TB≥ 1 71 μmol/L ,且以直接胆红素升高为主 ;③ 66 7%患者凝血酶原活动度降低 ,其中 4例低于 40 % ;④黄疸持续时间较长 (9 6± 3 1 )周 ,53 3 %患者超过 8周。结论 中药消核片可导致严重肝损害 ,甚至引起急性肝衰竭。中药消核片所致药物性肝炎患者病情较重、黄疸深、持续时间长 。

LDH检测BALB/c小鼠CTL活性的初步研究

目的 建立一个简便易行的动物模型及细胞毒性T细胞 (CTL)检测体系 ,为HCV感染中CTL作用研究奠定理论基础。方法 用SP2 O作为靶细胞 ,LDH检测HCV核心区多肽免疫BALB c小鼠的CTL活性。结果 HCV核心区多肽免疫BALB c小鼠后 ,可用LDH检测其CTL活性 ,CTL活性可被CPA10 ( 5～ 2 3位氨基酸 )增强及被CPA9( 3 9～ 74位氨基酸 )抑制。结论 LDH可稳定检测BALB

胸腺五肽治疗慢性重型乙型病毒性肝炎的疗效评价

目的 评价胸腺五肽治疗慢性重型乙型肝炎的临床疗效。方法 将 70例慢性重型乙型肝炎患者按入院先后分为 2组 ,其中一组 3 5例患者仅用常规内科支持治疗 ,另一组 3 5例患者在常规内科支持治疗基础上加用胸腺五肽 ,比较两组患者治疗后肝功能状况与外周血CD4+ /CD8+ 比值及其存活率。结果 在重型肝炎早中期患者 ,胸腺五肽治疗组的存活率( 66.7%)显著高于对照组 ( 3 3 .3 %) ,P <0 .0 5 ;胸腺五肽治疗 2周后 ,40 0 %患者的肝功能开始好转 ,对照组肝功能开始好转者只有 10 .0 %,两者间相差显著 (P <0 0 5 ) ;与治疗前相比 ,胸腺五肽治疗组重型肝炎患者在治疗 2周与 4周后的外周血CD4+ /CD8+ 比值均增高非常显著 (P <0 0 1) ,且均显著高于对照组患者 (P <0 0 1) ;治疗 2周时重型肝炎患者外周血CD4+ /CD8+ 比值越大 ,其最终存活率也越高。

乙型肝炎肝内ICAM-1和HLA-A,B,C表达的研究

目的 研究乙型病毒性肝炎肝内ICAM 1和HLA A ,B ,C表达间的关系及其在乙型肝炎免疫发病机制中的作用。方法用免疫组化单种染色检测 11例正常人和 70例HBV感染者肝内ICAM 1、HLA A ,B ,C表达水平 ,并用免疫组化双重染色检测其肝内ICAM 1和HLA A ,B ,C复合表达。结果 乙型肝炎患者肝细胞ICAM 1表达水平与HLA A ,B ,C表达水平之间呈显著正相关 (P <0 .0 5 ) ;在炎症坏死区 ,表达ICAM 1的肝细胞多数也同时表达HLA A ,B ,C。结论 ICAM 1和HLA A ,B ,C共同参与介导乙型肝炎肝细胞的免疫损伤过程 ;ICAM 1/HLA A ,B ,C双阳性肝细胞可能是CTL发挥有效细胞毒作用的靶细胞。

血清胆红素与甲状腺激素在糖尿病患者中的变化及意义

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清胆红素和甲状腺激素水平的变化及临床意义。方法检测87例T2DM患者和45例健康人血清胆红素和血清甲状腺激素。结果 T2DM患者FT3和IBIL水平分别为2.6±1.1pmol/L和5.0±2.8μmol/L,显著低于正常对照组的4.8±1.0pmol/L和8.8±2.6μmol/L(P<0.05);血糖控制差的患者FT3和IBIL水平较低(P<0.05);轻症糖尿病组FT3和IBIL水平分别为3.03±1.21pmol/L和7.51±3.17μmol/L,而重症组治疗前分别为1.91±0.86pmol/L和6.25±2.85μmol/L,治疗后为3.55±1.29pmol/L和8.11±3.06μmol/L。结论 FT3和IBIL水平变化与T2DM病情密切相关,可为临床诊治提供参考依据。

抗生素对宿主体内微生态平衡影响的数学模型研究

目的 探讨抗生素对宿主体内菌群的影响。方法 应用微分方程定性理论分析抗生素作用的两菌群数学模型。结果 宿主体内微生态系统的平衡与失调与抗生素的输入浓度和各菌群的初始值有关。结论 临床上运用抗生素去治疗细菌感染性疾病时 ,必须十分注意抗生素的输入浓度和相关菌群的初始值 ,否则将可能会引起新的急性菌群失调。

CTLA-4Ig预防小鼠自身免疫性肝炎的实验研究

目的 研究CTLA 4Ig在防治C5 7BL/6小鼠自身免疫性肝炎上的作用。方法 通过用C5 7BL/6近交系小鼠的肝特异性抗原与弗氏完全佐剂混合物免疫攻击小鼠 ,同时用CTLA 4Ig治疗 ,观察小鼠的肝脏组织学改变。结果 随着免疫次数的增多 ,治疗组结果与正常对照组相似 ;而病理模型组发现炎细胞的浸润 ,肝细胞的肿胀、灶性坏死甚至广泛坏死 ,这与正常对照组有明显差异。结论 CTLA 4Ig能有效地预防C5

中间型和混合型人工肝对肝衰竭支持效果对比研究(英文)

目的 比较中间型 (血浆置换 )和混合型 (血浆置换 +血液灌流吸附 )人工肝支持方法对肝衰竭患者肝功能的支持效果及安全性。方法 5 1例重型肝炎肝衰竭患者分别进行血浆置换 (17例 )和血浆置换 +血液灌流吸附 (34例 )治疗 ,观察治疗前后患者临床症状变化 ,比较治疗前后肝肾功能、血常规、PT变化。结果 血浆置换和血浆置换 +血液灌流吸附治疗后 ,患者的临床症状均有不同程度改善。两种方法治疗后转氨酶、总胆红素、直接胆红素、凝血酶原时间、总蛋白下降、凝血酶原活动度升高均有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,但两种治疗方法间比较各项指标变化程度均无显著性差异。两种方法治疗的不良反应均较轻。结论 中间型、混合型人工肝对重型肝炎肝衰竭患者的肝功能均有肯定的支持效果。

多粘菌素B及其模拟肽体外抗内毒素的实验研究

方法:LPS(或FITC-LPS)100μg/L分别与PMB 100mg/L、peptide 0 100mg/L、peptide1 100mg/L、PBS,37℃孵育30min后(分别加入50mL/L NHS)刺激PBMC,用流式细胞仪检测FITC-LPS与PBMC的结合能力及CD14表达;ELISA法检测培养上清中细胞因子TNFα、IL-6含量。结果:FITC-LPS分别与PMB、peptidel孵育后,细胞膜平均通道荧光显著减少,LPS与PBMC的结合能力显著降低(分别为8.1±1.8 vs 15.8±4.5 P<0.01;8.5±2.0 vs15.8±4.5 P<0.01)。100μg/L LPS刺激PBMC3h后CD14阳性率明显增加;LPS分别与PMB和peptidel预孵育后可显著降低LPS刺激PBMC细胞膜CD14表达(分别为45.5±6.2％vs 68±5.5％ P<0.01;43.2±4.1％ vs 68±5.5％ P<0.01),LPS刺激PBMC分泌TNF-α和IL-6显著增加,LPS分别与PMB和peptidel预孵育后能显著减少细胞因子TNF-α(分别为15.30±1.0 vs 45.9±5.7 P<0.01;18.2土0.9 vs45.9±5.7 P<0.01)和IL-6分泌(分别为50.5±4.2 vs 176.4±12.1 P<0.01;58.1± 4.1 vs 176.4±12.1 P<0.01)。结论:多粘菌素B及其模拟肽(Peptidel)可能通过下调PBMC CD14表达,降低细胞因子水平来减少LPS诱导的炎症反应。

严重病毒性肝病的病因治疗新认识

严重病毒性肝病的病因非常复杂,不同地区之间存在很大差异,在我国以乙型肝炎和丙型肝炎最为常见。已证明抗病毒治疗在HBV相关严重肝病中具有重要意义,需长期乃至终生用药;选用药物仍需注意强效、低耐药和安全性;肾功能不全者应慎用核苷酸类药物;但对于即将接受或已使用免疫抑制剂的HBV感染患者,预防性或早期抗病毒治疗至关重要。现研究支持HCV相关严重肝病包括伴有慢性肾脏疾病的患者使用直接抗病毒药物治疗方案,初步获得满意疗效,但复发率高于普通患者,故仍需更多、更大规模、更长时间的临床研究验证。总之,应结合具体情况,采取有效的抗病毒治疗措施,争取提高严重病毒性肝病患者的存活率。

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒 (Porcineendogenousretrovirus ,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREVgag区的序列 ,选用特异性引物 ,采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列 ;以及RT PCR方法检测血清中PERV RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列 ;此外 ,在猪血清标本亦检测出病毒序列 ,而其它 2份HBV、HCV阳性血清及 2份其它动物血清 (大鼠、兔 )检测结果均为阴性 ,说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒 ,并可以释放到血清中 ;采用该法具有特异、简便的特点 。