人肝癌细胞与自体激活B淋巴细胞融合制备肿瘤疫苗

目的：观察３例人肝癌组织细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合后融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况，以便为肿瘤疫苗向临床试验过渡提供人体细胞的实验依据。方法：应用聚乙二醇（ＰＥＧ）法将人肝癌细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合，利用流式细胞仪观察融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况。结果：融合细胞表面不仅表达肝癌细胞表面的ＧＰ７５分子，还可表达共刺激分子Ｂ７及ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ。结论：人肝癌细胞与其自体激活的Ｂ淋巴细胞融合后的杂交瘤细胞既能表达肝癌细胞表面分子ＧＰ７５，又可表达共刺激信号分子。

细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探

目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；（２）事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌ＢＥＲＨ－２细胞和大鼠膀胱癌ＮＢＴ－Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；（３）该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠ＣＤ４单抗或抗ＣＤ８单抗多次注射，以清除大鼠ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：ＢＥＲＨ－２细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而ＮＢＴ－Ⅱ细胞可致瘤；事先清除ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌ＢＥＲＨ－２细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了ＣＤ４＋细胞后不能被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤，清除了ＣＤ８＋细胞后则可被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用。

HSV-TK、B7联合基因治疗诱发乳腺癌细胞凋亡及增强免疫作用的观察

目的 观察逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)、共刺激因子 (B7)基因联合治疗乳腺癌的作用 ,并探讨其作用机理。方法 应用基因重组技术 ,构建携带TK/B7基因的逆转录病毒载体。在 80只SD大鼠乳腺癌模型上 ,分别于瘤体内注射基因转染的乳腺癌细胞 ,3d后腹腔内连续 15d注射更昔洛韦 (GCV) 5 0mg·kg-1·d-1。用 4h51Cr释放法检测脾细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性。结果 TK组瘤细胞大量凋亡 ;B7组淋巴细胞聚集 ;TK +B7组肿瘤细胞凋亡 ,并可见淋巴细胞的聚集。CTL活性分别为 :对照组 (35 .6± 2 .7) %、TK组 (39.2± 3.8) %、B7组 (6 7.4±4.3) %、TK +B7组 (6 2 .1± 3.5 ) % ,B7、TK +B7组较对照组、TK组显著增强 (P <0 .0 1)。结论 HSV TK、B7联合基因治疗大鼠乳腺癌 ,具有直接杀伤肿瘤和增强机体抗肿瘤免疫双重作用。

Fas介导凋亡的免疫学研究进展

激活Ｔ细胞表达Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ），ＦａｓＬ与靶细胞Ｆａｓ结合，可使其凋亡。Ｆａｓ介导凋亡是Ｔ细胞杀伤途径之一。Ｆａｓ－ＦａｓＬ介导的淋巴细胞凋亡有免疫下调作用。其中主要参与外周Ｔ细胞克隆清除和活化Ｔ细胞凋亡。当Ｆａｓ介导凋亡功能缺失或功能过强均可出现免疫病理现象。

肝细胞癌腹腔镜射频消融治疗前后活检组织端粒酶活性检测对治疗效果评价的意义

目的:探讨肝细胞癌腹腔镜射频消融(LRFA)治疗前后活检组织端粒酶活性检测对治疗效果评价的价值。方法:2001年8月至2004年10月,34例肝细胞癌合并肝硬化患者在全麻下行LRFA治疗。其中男性27例,女性7例,平均年龄49.9±11.7岁。平均肿瘤直径4.0±1.0cm。肿瘤均位于肝脏表面、肝左外叶或临近胆囊等空腔脏器。LRFA治疗前后,分别对瘤体行腹腔镜超声检查及活检,所得微量组织采用ELISA-TRAP法行端粒酶活性检测及病理学检查。结果:所有病例均顺利完成LRFA治疗。RFA治疗前,病理学诊断阳性率为100%(34/34),端粒酶活性阳性率为91.2%(31/34);RFA治疗后,病理学检查均未发现肿瘤细胞,端粒酶活性阳性率26.5%(9/34)。术后1个月螺旋CT增强扫描提示肿瘤完全坏死率达100%。随访7～40个月(中位21个月),9例RFA治疗后端粒酶表达阳性的患者中,8例射频治疗部位复发;而25例RFA治疗后端粒酶表达阴性的患者中,2例发现肝内新病灶。结论:肝细胞癌合并肝硬化患者LRFA治疗后,活检组织端粒酶活性检测对LRFA治疗效果的评价及预后具有一定的参考价值。

HSV—TK、B7联合基因治疗乳腺癌的动物实验研究

目的观察逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)、B 细胞活化抗原(B7)基因联合瘤体内直接注射,对荷瘤动物瘤体大小、重量、生存期以及全身细胞免疫功能的影响。方法建立乳腺癌 SHZ-88细胞株的动物模型,随机分为对照组、TK组、B7组及TK+B7组,每组30只。二周后瘤体内分别注射转染有空壳载体及不同重组的Gc-TKpSN、GcB7pSN和GcTKpB7SN 基因载体的乳腺癌细胞,并按50mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔内注射羟甲基无环鸟苷(GCV)治疗15天,观察对肿瘤体积、重量及荷瘤生存时间的影响,4小时^(51)Cr法释法检测荷瘤小鼠脾细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性。结果TK、B7组肿瘤生长速度减缓,重量减轻,荷瘤生存期延长(P<0.05),TK+B7组尤为显著(P<0.01)。B7、TK+B7两组脾细胞CTL活性较对照组、TK相比明显增强(P<0.01)。结论HSV-TK、B7基因联合组瘤体内注射不仅能抑制肿瘤的生长、延长荷瘤动物的生存期,而且具有增强机体免疫力作用。

应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究

观察人肝癌细胞的端粒酶活性。应用非放射同位素银染的端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ），检测６株人肝癌细胞株（ＢＥＬ－７４０２，ＨｅｐＧ２，ＱＧＹ－７７０１，ＱＧＹ－７７０３，ＳＭＭＣ－７７２１，ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）的端粒酶活性，同时检测ＲＮａｓｅ处理的阴性标本。６株人肝癌细胞的端粒酶均为阳性。

B细胞融合人肝癌细胞疫苗^(60)Co照射后生长及表型的观察

目的：探讨Ｂ细胞与人肝癌细胞的融合细胞经６０Ｃｏ照射后的生长和免疫原性相关表型的变化。方法：体外照射后观察融合细胞生长曲线和软琼脂集落形成；体内采用裸鼠成瘤试验，观察体外生长和动物体内成瘤性，应用流式细胞仪检测照射后融合细胞ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及肝癌抗原（ＧＰ７５）表达，观察其免疫原性相关表型变化。结果：经６０Ｃｏ照射的融合细胞失去增殖能力，４ｄ后可见部分细胞死亡，７ｄ后几乎全部死亡。６０Ｃｏ照射后３ｄ内ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及ＧＰ７５表达无明显变化。结论：经６０Ｃｏ照射后融合细胞失去增殖能力。

银染的端粒重复序列扩增法检测人细胞端粒酶活性的研究

目的：探讨应用简便、快速及无害化的非核素银染端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）检测人细胞端粒酶活性。方法：与核素ＴＲＡＰ相比较，采用非核素银染ＴＲＡＰ检测了２９３细胞，并检测了经ＲＮａｓｅ和加热处理的阴性对照标本和ＱＧＹ７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１２株人肝癌细胞。结果：１０个以上的２９３细胞均为阳性，而ＲＮａｓｅ和加热处理的标本均阴性；２株人肝癌细胞均阳性；非核素银染ＴＲＡＰ比核素ＴＲＡＰ快１０ｈ左右。结论：非核素银染的ＴＲＡＰ是特异、敏感及快速的端粒酶活性检测方法，证实２株人肝癌细胞株均有端粒酶活性表达。

人端粒及端粒酶的研究进展及其生物学意义

人端粒及端粒酶的研究进展及其生物学意义卫立辛综述吴孟超郭亚军审校第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫和基因治疗中心（上海市２００４３８）恶性肿瘤表现为异常增殖的特性，是什么机制介导癌细胞异常生长？是肿瘤学家一直关注的课题。端粒是由ＤＮＡ重复序列和结...

Ⅰ型细胞间粘附分子在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨肝癌细胞产生的Ⅰ型细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）在肝细胞癌侵袭和转移过程中的作用。方法用原位分子杂交技术检测了３４例原发性肝癌及癌旁组织中ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达。结果２１例侵袭性生长的肝癌中１９例ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达阳性，明显高于癌旁；１１例伴门静脉癌栓或肝内转移灶形成的肝癌，其癌组织均表达强阳性，癌栓及转移灶表达阳性；而１３例包膜完整的肝癌仅有４例表达阳性。结论肝癌细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达与肝癌细胞的侵袭及转移相关。

bcl-2基因转染阻断Fas介导的Jurkat细胞凋亡

目的：通过ｂｃｌ２阻断Ｆａｓ介导的细胞凋亡了解ｂｃｌ２基因在淋巴瘤癌变过程中逃避机体免疫监控的作用机制。方法：应用基因重组技术重组ｐＬＸＳＮｂｃｌ２，采用电穿孔法将其与空载体分别转染包装细胞系ＰＡ３１７，将阳性克隆病毒上清感染人Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ，用Ｇ４１８筛选，其阳性克隆进行免疫组化检测，应用抗Ｆａｓ抗体诱导细胞凋亡来模拟细胞毒Ｔ细胞的杀伤机制，观察ｂｃｌ２在淋巴瘤逃避免疫机制中的作用。结果：转染人ｂｃｌ２基因的Ｊｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔｂｃｌ２）细胞较对照Ｊｕｒｋａｔ及转染空载体Ｊｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔｎｅｏ）细胞，ｂｃｌ２表达量明显增加，而Ｆａｓ基因表达量无明显变化。其Ｊｕｒｋａｔｂｃｌ２能明显耐受抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡。结论：人ｂｃｌ２基因在淋巴瘤中过量表达，能部分阻断抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡，ｂｃｌ２基因过量表达可能是淋巴瘤癌变过程中逃脱机体免疫监控的机制之一。

检测人端粒酶活性的端粒酶TRAP-ELISA法的建立

目的为改进端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）存在定量困难、应用同位素及每次检测标本数受限等缺点，研究建立及评价端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ法。方法端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ法是将ＴＲＡＰ与ＰＣＲＥＬＩＳＡ系统结合。与常规ＴＲＡＰ法相比较，应用端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ法检测端粒酶阳性的２９３细胞和阴性对照标本（加热或ＲＮａｓｅ处理和正常人内皮细胞）。结果２９３细胞端粒酶阳性，对１０，１０２，１０３及１０４个细胞检测均为阳性，所测到的吸光度值（Ａ，曾称光密度ＯＤ）依赖于被检２９３细胞数。ＲＮａｓｅ或加热处理标本和正常人内皮细胞均阴性。该方法可在当日观察结果，不需放射性同位素。结论端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ是一种非放射性同位素、快速及可定量的人端粒酶活性检测方法。

β胡萝卜素对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的 研究 β胡萝卜素对四氯化碳 (CCl4 )诱导的实验性大鼠肝纤维化的影响 ,并探讨其作用机制。方法 ①在CCl4 诱导实验性大鼠肝纤维化 3周后 ,同时给予 β胡萝卜素 2 5 0 0 0 0U/kg体重 ,每周 2次灌胃 ,同时设正常及CCl4 对照组。②观察肝脏组织学及超微结构改变 ,检测大鼠肝组织羟脯氨酸含量 (生化法 )、α2 Ⅰ型胶原RNA(点杂交法 )和转化生长因子β1(TGFβ1,免疫组化法 )的表达。结果 β胡萝卜素防治组中 ,肝纤维化程度计分显著低于CCl4 组 (P <0 .0 5 ) ,肝星形细胞中的脂滴数量少于正常对照组 ,但多于CCl4 对照组 ;β胡萝卜素防治组中 ,肝组织羟脯氨酸含量显著低于CCl4 组 (P <0 .0 5 ) ;肝脏α2 (Ⅰ )型前胶原RNA和TGFβ1表达显著低于CCl4 组 (P <0 .0 5 )。结论 上述剂量的 β胡萝卜素 ,能显著降低由CCl4 诱导的大鼠肝纤维化的程度 。

巨噬细胞炎性蛋白-1α联合4-1BB配体降低肝癌细胞体内致瘤性研究

目的观察巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP1α）联合4-1BB配体（4-1BBL）对肝癌细胞体内致瘤性的影响。方法以小鼠4-1BBL（m4—1BBL）重组逆转录病毒感染Hepa1-6小鼠MIP-1α（mMIP-1α），筛选并扩增抗性克隆，以流式细胞术检测m4—1BBL的表达，绘制并比较mMIP-1α和m4—1BBL同时或单独表达的Hepa1—6细胞的生长曲线。C57B／L小鼠随机分为7组，每组9只，各组分别接种Hepa1-6mMIP-1α＋m41BBL、Hepa1-6m4—1BBL、Hepa1-6mMIP-1α、Hepa1-6pBabepuro、Hepa1-6、Hepa1-6pLXSHD和PBS，观察比较各组肝癌细胞的致瘤性，比较各组小鼠的存活率。结果成功获得同时表达mMIP1α和m4—1BBL的小鼠肝癌细胞Hepa1—6mMIP—1α＋m4—1BBL，mMIP-1α和m4—1BBL同时或单独表达不影响Hepa16的生长曲线。观察5周，Hepa1-6mMIP-1α＋m4—1BBL接种的小鼠均未生长肿瘤，Hepa1-6mMIP-1α＋m4—1BBL的体内致瘤性低于Hepa1-6mMIP-1α和Hepa1—6m4—1BBL。接种Hepa1-6mMIP1α＋m41BBL的小鼠12周末存活率（9／9）高于接种Hepa1-6m41BBL小鼠（6／9）和Hepa1-6mMIP-1α小鼠（1／9）。结论趋化因子MIP-1α联合共刺激分子4-1BBL降低了肝癌细胞体内致瘤性，并使小鼠的生存期延长。