叉头盒O1(FoxO1)调节RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性

目的研究叉头盒O1(FoxO1)对RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性的调控作用。方法采用100 ng/m L脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞6、12、24 h,流式细胞术观察RAW264.7细胞活化过程中LAIR-1、CD11b以及细胞吞噬功能的变化。软件预测FoxO1与LAIR-1启动子之间存在结合位点。构建FoxO1fl/fl/Lys M-Cre小鼠,观察FoxO1敲除后,RAW264.7巨噬细胞LAIR-1的水平变化。构建LAIR-1基因启动子荧光素酶报告基因载体,转染FoxO1观察对其转录活性的影响。结果 LPS刺激后RAW264.7细胞活化,CD11b表达升高,吞噬能力增强,LAIR-1水平下调。成功构建了髓系细胞FoxO1基因敲除小鼠FoxO1fl/fl/Lys M-Cre,该小鼠LAIR-1 mRNA水平显著降低。软件预测发现在LAIR-1基因启动子区域存在潜在的FoxO1转录因子结合位点,荧光素酶报告基因证实FoxO1可激活LAIR-1启动子转录活性。结论 FoxO1可激活巨噬细胞LAIR-1启动子转录活性。

CD226调控自然杀伤细胞参与小鼠肥胖的作用机制研究

目的观察CD226基因敲除(KO)对高脂饲养的肥胖小鼠相关指标的影响,分析CD226KO肥胖小鼠脾脏各主要免疫细胞的构成,探讨CD226分子参与高脂饮食诱导肥胖的免疫学机制。方法野生型(WT)和CD226KO小鼠随机分为高脂和正常饮食两组,饲喂14周,建立2型糖尿病模型。通过流式细胞术分析小鼠脾脏及外周血的免疫细胞构成。体外试验使用pshRNA-CD226慢病毒感染NK92-MI细胞,qPCR法检测Foxp3、TNF-α及IFN-γ表达水平。结果CD226KO可以降低肥胖小鼠血糖水平和血清胰岛素含量,下调胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),上调胰岛素敏感指数(HOMA-IS);减少胰岛组织的代偿性增生,上调胰岛β细胞功能指数(HOMA-β);CD226KO显著降低小鼠脾脏NK细胞比例;但CD3^- CD49b^+ CD25^+ Foxp3^+调节性NK细胞(NKreg)比例明显增加。敲除CD226可以显著上调NK92-MI细胞Foxp3表达,下调TNF-α及IFN-γ表达。结论CD226KO减轻肥胖小鼠胰岛素抵抗,提高胰岛β细胞数量及功能;其作用机制可能与上调Foxp3^+ NKreg比例相关。