聊城大学制药工程专业实验室建设的探索与实践

分析聊城大学制药工程专业实验室现状,从培养适合专业实验室建设的实验教学团队、专业实验室的建设与管理体制的完善、专业实验室的开放共享和合理配置等几个方面,对制药工程专业实验室建设的思路进行论述,实现充分利用实验室资源,提高实验室运行效率,推动制药工程专业实践教学改革,确定制药工程专业实验室为教学和科研服务的目标。

枯草芽孢杆菌B579对黄瓜枯萎病的防治及其诱导抗性研究

【目的】探究枯草芽孢杆菌B579对黄瓜枯萎病菌的生防效果及诱导抗性机理。【方法】采用平板对峙试验和温室盆栽试验,检测病原菌生长及形态变化、植物生长量、叶片防御酶活性、丙二醛含量、防御相关基因表达量等指标。【结果】枯草芽孢杆菌B579对黄瓜枯萎病菌具有较强的抑制作用,抑菌圈周围菌丝出现粗细不均、膨胀、断裂等现象。盆栽试验表明B579对黄瓜枯萎病的防治效果为78.80%。B579处理组黄瓜幼苗的株高、茎粗、鲜重、干重分别比对照组增加了13.87%、4.17%、15.15%、12.77%。相比单独接种病原菌(FOC)处理,接种B579再接种病原菌(B579+FOC)处理在第4天和第7天显著提高了黄瓜叶片苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性,并减少黄瓜叶片丙二醛(MDA)的含量(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测结果表明,接种B579再接种病原菌后,黄瓜叶片防御相关基因LOX、PR1、PR3和CAT表达量在第4天和第7天显著高于其他处理(P<0.05)。【结论】枯草芽孢杆菌B579能够通过直接抑制病原菌生长和使黄瓜产生诱导抗性来有效防治黄瓜枯萎病。

基于导师制的药学专业课程开放实验教学新模式

传统的实验教学模式很难适应行业企业对高素质药学人才的需求。从传统实验教学模式存在的问题、导师制开放实验教学模式的设计、实施和成效等方面,探讨以导师制为基础、以开放式科研平台为载体的药学专业课程开放实验教学新模式的建立。

英夫利西单抗糖化方法开发验证及其在抗体药物中的普适性

糖化修饰作为一种非酶促糖修饰,通过还原性糖与蛋白氨基酸残基共价结合,普遍发生于抗体药物生产储存等过程,显著影响产品的质量和功能。硼酸亲和色谱(BAC)法虽然是检测抗体类药物糖化修饰的主要技术,但其在测定英夫利西单抗糖化水平时仍面临准确性挑战,在一定程度上限制了其在质量控制上的应用。本研究深入探讨了影响该单抗BAC方法准确性的因素,明确了该单抗BAC方法糖化检测不准确的原因,并针对性地对流动相的组成和浓度进行了优化,成功开发出一种改进的BAC方法,能够更精准地测定英夫利西单抗的糖化水平。该方法的准确性通过基于质谱的快速多属性方法确认,并通过了严格的方法学验证。验证结果表明该方法具有良好的准确性、精密度、耐用性等。此外,通过对不同类型抗体药物进行测试,证实了该方法在常规抗体药物糖化检测中的广泛适用性。本研究不仅解决了英夫利西单抗糖化检测的关键技术难题,还确认了该方法的普适性,为抗体药物的质量控制提供了一种新的快速、准确的技术方案。这些研究结果有助于推动相关技术平台的改进和理念的更新,从而增强产品开发和质控的能力。

根际微生物组装影响因素的研究进展

根际微生物群落被认为是植物与土壤密切作用的重要产物,对于植物的健康生长发挥着重要作用。尽管已有越来越多的研究证实了根际微生物群落的巨大功能潜力,但对其组装具体机制的了解仍然十分有限。理解植物微生物群及其组装机制对于设计有效、经济且环境友好的方法以促进农业健康发展具有重要意义。为此,文章对驱动微生物群落组装的多种生物和非生物因素进行综述,并展望该领域未来的发展趋势。

含喹唑啉-4-酮结构的芳氧苯氧丙酸二苯醚酯衍生物的设计、合成及除草活性研究

为了开发新型芳氧苯氧丙酸酯类除草剂,以前期工作发现的QPP-I为先导化合物,采用活性亚结构拼接法,设计、合成了19个含喹唑啉-4-酮结构的芳氧苯氧丙酸二苯醚酯衍生物,其结构经^(1)H NMR和^(13)C NMR确证。利用小杯平皿法初步测试除草活性发现,目标化合物对单子叶植物稗草具有较高的生长抑制率。其中,化合物QPPD-16在10ug/mL浓度下对稗草的生长抑制率达到81.6%,与商品化除草剂-精喹禾灵的抑制效果相当。利用温室盆栽法进一步测试除草活性发现,在土壤处理、750 g/hm2施药量情况下,化合物QPPD-16对稗草、马唐、狼尾草和狗尾草的生长抑制率分别为79.6%,83.1%,84.0%和70.0%。更重要的是,化合物QPPD-16对农作物大豆和花生具有较高的安全性。该研究结果表明,化合物QPPD-16具有作为芳氧苯氧丙酸酯类除草剂先导化合物的潜力。

环糊精糖基转移酶JSL-1的鉴定及功能研究

环糊精糖基转移酶(Cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase)可以通过环化反应催化淀粉及其衍生物生成环糊精(Cyclodextrin,CDs)。研究通过基因工程技术手段,成功获得东洋芽孢杆菌Bacillus toyonensi s P18中环糊精糖基转移酶JSL-1蛋白,探讨其产物特异性及酶学性质。同时,将JSL-1基因超表达到日本晴水稻中,研究环糊精糖基转移酶JSL-1对水稻淀粉质量的影响。结果表明,JSL-1主要催化淀粉生成α-CD,其最适反应pH和最适反应温度分别是8.0和50℃。随着JSL-1表达水平的增加,水稻中直链淀粉含量及老化程度下降,透光率及冻融稳定性增加,有利于提高水稻的食味品质以及外观品质等特性。总之,对环糊精糖基转移酶JSL-1的研究有利于环糊精生产工艺的改良以及水稻品质的提升。

枯草芽孢杆菌微囊泡的高效分离及其抗炎活性研究

建立枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)微囊泡(Microvesicles,MV_(S))的高效分离方法,评估枯草芽孢杆菌微囊泡(BS-MV_(S))的抗菌和抗炎活性。通过筛选B.subtilis 2-1和B.subtilis 579菌株培养基和培养条件提高BS-MV_(S)的产量;使用超速离心和密度梯度离心对BS-MV_(S)进行纯化,采用滤纸片扩散法检测BS-MV_(S)的体外抑菌活性,筛选抑菌活性较好的BS-MV_(S),通过建立DSS诱导的溃疡性结肠炎模型,进行BS-MV_(S)的抗炎活性研究。确定了高产BS-MV_(S)的培养基为添加0.5%葡萄糖的LB培养基,培养时间为24 h,提高了BS-MV_(S)分离效率。抗菌活性研究结果表明1×10^(10)颗粒数/mL的BS_(2-1)-MV_(S)和BS_(579)-MV_(S)对白色念珠菌的抑菌效率分别为135%、99.2%,对金黄色葡萄球菌的抑菌效率分别为90%、62.5%。基于体外抗菌实验结果,对BS_(2-1)-MV_(S)进行体内抗炎活性研究,结果表明BS_(2-1)-MV_(S)可以有效改善DSS诱导的溃疡性结肠炎的病症症状,包括小鼠体重、疾病活动指数、结肠长度和组织病变程度等,有较强的抗炎活性。结论:通过优化培养基和培养条件提高MV_(S)的产量,BS_(2-1)-MV_(S)对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌的抑菌效率均高于BS_(579)-MV_(S),且BS_(2-1)-MV_(S)具有较强的抗炎活性,为今后新型高效抗炎药物的开发奠定基础。

基于Wnt/β-catenin信号通路的DKK-1抗体药物生物活性报告基因法开发与评估

生物活性检测对于确保治疗性抗体的安全性和有效性至关重要,需要准确反映药物的作用机制(MOA)。作为一类新兴靶点药物,DKK-1抗体在骨质疏松和肿瘤治疗领域展现出巨大潜力。然而,当前针对DKK-1抗体的生物活性评价主要基于碱性磷酸酶活性测定,该方法存在操作复杂、耗时长及结果变异性大等问题,在一定程度上限制了此类抗体的研发及质控。为了建立一种DKK-1抗体高性能生物活性检测方法,本研究引入了报告基因法(RGA),通过将TCF/LEF反应元件控制的稳定表达荧光素酶的报告基因质粒转染HEK 293细胞,成功建立了一种基于DKK-1抗体MOA的Wnt/β-catenin信号通路的报告基因检测方法。该方法经过优化及模拟实验评估,显示出在实际应用中的潜力和可靠性。该新方法的建立预计将进一步促进DKK-1抗体类药物的筛选评估及其在后续开发过程中的质量控制。

多糖基化位点抗体药物质控中基于单四级杆的多属性分析方法开发与验证

抗体药物已经成为生物制品的重要组成部分,此类产品具有复杂的质量属性,尤其是具有多糖基化位点的抗体药物,其质量控制面临更高挑战。虽然基于高分辨质谱的多属性分析方法(Multi-attribute method,MAM)已在抗体药物的质控中获得应用,但针对多糖基化位点抗体药物的快速且简便的检测技术仍较为少见。开发一种基于单四级杆的多属性分析方法,对于提升这类药物的质控效率具有重要意义。本研究以双糖基化位点的治疗类单抗CMAB009为模型。通过基于高分辨质谱的MAM对其进行了深入的预表征分析,成功获取了其主要质量属性。随后将预表征信息用于基于单四级杆的MAM开发。该方法在单次分析中有效监测了多种产品质量属性,其准确性通过基于高分辨质谱的方法进行了确认。随后我们对该方法进行了严格的方法学验证。验证结果显示,该方法具有良好的专属性、线性、准确度以及精密度等。基于单四级杆的MAM不仅有效地解决了多糖基化位点单抗药物的多属性检测难题,还展示了一定的方法普适性,为不同糖基化位点抗体药物的质量控制提供了一种新的、简便的技术方案。本研究结果预计将推动相关技术平台的改进和理念的更新,从而增强产品开发和质控的整体能力。

干细胞药学课程设置初步探讨

干细胞药物是一种新兴的生物制药产品,具有巨大的潜在治疗意义。目前,大部分国家已将干细胞制剂归为药品进行管理并大力扶持,然而药学生缺乏干细胞相关课程的学习,难以满足干细胞药物产业的发展需求,药学高等教育中开设干细胞药学课程很有必要。文章阐述了课程设置的必要性、培养目标、教学内容和方法等方面,希望通过该课程帮助学生了解该领域的基础知识和最新进展,优化知识结构体系,培养高素质的复合型药学人才,为干细胞药物产业发展奠定基础。

从药学视角探讨间充质干细胞产品研发的策略与进展

干细胞治疗研究应用开始向“药物”管理模式转变,借鉴传统药学思路将有益于干细胞产品的研究和开发。本文以间充质干细胞(MSCs)产品为例,从药物化学、药剂学、药物分析学与药代动力学等药学学科的角度探讨制约干细胞产品的研发的问题,为未来干细胞药物的发展开拓思路。

含香豆素结构的芳氧苯氧丙酸酯衍生物的设计、合成及除草活性研究

为了开发新型芳氧苯氧丙酸酯类除草剂,采用活性亚结构拼接的方法,设计合成了一系列含香豆素结构的芳氧苯氧丙酸酯衍生物,其结构经1HNMR,13CNMR及高分辨质谱确证。利用平皿小杯法初步评价了目标化合物的除草活性,结果显示部分化合物对稗草表现出较好的抑制活性。其中,化合物CPP-4在100μg/mL浓度下对稗草的抑制率达到87.4%,与商品化除草剂-喹禾灵的抑制效果相当。温室盆栽实验结果显示,在土壤处理、1 500 g/hm2施药量情况下,化合物CPP-4对稗草和马唐呈现出很好的防除效果,抑制率达到80%以上。该研究结果表明,化合物CPP-4可以作为新型芳氧苯氧丙酸酯类除草剂的先导化合物继续优化。

枯草芽孢杆菌对小鼠炎症性肠病的保护作用及其机制研究

目的:观察枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,BS)对炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)的保护作用,探讨肠道菌群在BS拮抗IBD中的作用。方法:40只小鼠随机分为空白对照组、模型组、干预治疗组、干预对照组,其中模型组和干预治疗组通过3.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)饮水摄入诱导IBD模型,干预治疗组和干预对照组灌胃给予枯草芽孢杆菌菌液进行干预,观察小鼠体重、结肠长度、疾病活动指数(DAI)及结肠组织病理改变,ELISA测量血清中肿瘤细胞坏死作用因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的含量改变,Western blot检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达,16S rRNA系统测序技术监测肠道内微生物菌群水平的改变。结果:与对照组相比,模型组小鼠DAI评分明显升高,结肠长度明显缩短,结肠组织病理改变明显,炎症因子水平明显提高,紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达量下降;而与模型组相比BS干预能明显减低DAI评分,增长结肠长度,改善结肠组织病理改变明显,降低促炎细胞因子水平,恢复紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达。菌群分析结果表明,与模型组相比,干预治疗组的菌群α多样性、均匀度和区系种数显著增加;拟杆菌、大肠杆菌等数量降低,另支菌、乳酸杆菌等有益菌群的数量增多。结论:枯草芽孢杆菌对DSS诱导的IBD具有保护作用,能够降低其炎症反应,维持肠粘膜完整性,其发挥作用的机制可能与其改善肠道菌群有关。

Orsrio生物可降解聚合物支架与第2代耐用聚合物支架预防心肌梗死:Meta分析

目的 采用meta分析对比观察Orsiro生物可降解聚合物西罗莫司洗脱支架(Orsiro-SES)与第2代耐用聚合物支架(DPS)预防心肌梗死(MI)的效果。方法 检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国知网、万方医学网和维普数据库自建库至2022年9月关于Orsiro-SES和第2代DPS的随机对照研究;依据纳入及排除标准筛选文献,利用RevMan 5.3软件分析Orsiro-SES与第2代DPS预防MI效果。结果 纳入20篇文献,共13 247例接受Orsiro-SES(Orsiro-SES组,n=6 809)或第2代DPS(DPS组,n=6 438)植入术患者。支架植入后1、2、3、5年,组间MI发生率差异均无统计学意义(OR=0.86、0.85、0.82、0.91,P=0.17、0.18、0.10、0.37)。支架植入后1、2、5年组间靶血管MI发生率差异均无统计学意义(OR=0.83、0.84、0.94,P=0.12、0.21、0.64);支架植入后3年,Orsiro-SES组靶血管MI发生率低于DPS组(OR=0.76,P=0.04)。结论 Orsiro-SES与第2代DPS预防MI效果相当,前者或对预防靶血管MI具有一定优势。

瓦尼木层孔菌培养基优化及抗炎作用研究

瓦尼木层孔菌又名杨黄菌,是近年来发现的一种具有药用价值的真菌,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和增强免疫力等作用,特别是从杨黄菌中得到的提取物——杨黄多糖,对溃疡性结肠炎有一定的治疗作用。但杨黄菌多为野生,人工栽培所需时间长、获得杨黄的相关报道较少,也限制了对其培养条件的深入研究,特此对临清杨黄的培养基配方进行优化,通过研究培养基中碳源、氮源以及其他无机离子和生长因子对杨黄生长的影响改善杨黄菌的人工培养技术,提高其产量。

合成生物学在天然药物和微生物药物开发中的应用

目的概括了合成生物学的主要研究内容和核心技术,重点介绍了合成生物学在天然药物和微生物药物开发中的应用。方法首先介绍了合成生物学的概念、核心理念和技术,进一步从天然药物和微生物药物两个方面详细介绍了合成生物学在药物开发中的实例,特别是紫杉醇和青蒿素前体的生物合成研究大大促进了合成生物学在药物开发中的应用。结果合成生物学是21世纪生物学领域的新兴交叉学科,其在阐明生物合成基本规律的基础上,通过人工设计新的生物系统或改造旧的生物过程,从而实现新的功能或新物质合成。结论微生物来源药物是医药工业的重要分支,随着临床耐药菌的日益增多和新药研发难度的加大,微生物药物的开发面临着巨大挑战。伴随着合成生物学的兴起,利用合成生物学原理和方法发掘和改造微生物药物成为一条有效途径。

丹参根腐病生防芽孢杆菌2-1海藻菌剂的研制

以海藻渣为载体,菌种为丹参根腐病生防菌:枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis2-1(已保存CGMCC No.9256),研制成的海藻菌剂兼具营养及生物防治功能,同时菌剂的基本指标符合农用微生物菌剂产品的技术指标。用物理方法选择菌种发酵液与海藻渣混合的最佳配比,结合农用微生物菌剂产品质量检测方法对菌剂中有效活菌数、含水量、p H值及有效期进行测定,并进行大田试验,测试生防效果。菌剂有效活菌数为2.32×109/g,含水量为6.75%,p H值为6.7,常温下有效期约为11.6个月,均符合颗粒菌剂的技术指标,大田试验中根腐病的发病率比空白对照组降低37.6%,生防效果较为显著。

阿片类药物的防滥用综述

人们背离预防、医疗和保健目的,持续或间断地自行过度使用具有依赖性的药物,会对用药者的身心造成严重损害,同时严重危害社会。阿片类药物是最常见的滥用药物,滥用者通过处方药的过量口服或压碎药片,然后鼻吸,吸烟或注射新的改良剂型来获得欣快感。阿片类药物滥用风险的不断增加催生了能抵抗各种篡改和滥用的新型药物制剂的开发。本文讨论了已上市的阿片类药物以及正在开发的药物的防滥用机制。

卡拉胶植物淀粉复合膜制备及其相关性能研究

采用木薯醋酸酯淀粉、玉米淀粉和卡拉胶复配制备复合膜材料。在分别研究三种单一成分的浓度-粘度-温度关系、溶解度、膨胀率等性能基础上,选择了成膜性较好的三种配比5∶3∶2,2∶6∶2和1∶7∶2(醋酸酯淀粉:玉米淀粉:卡拉胶),进一步分析了三种膜的透光率、水蒸气透过率和吸湿率等性能。结果表明1号膜(5∶3∶2)醋酸酯淀粉含量高,膜的抗拉强度和断裂伸展率最大,分别为5.13 MPa和6.0%,当卡拉胶比例一定的条件下醋酸酯淀粉对膜的水蒸气透过性和吸湿性影响显著,而对透光率影响不大,醋酸酯淀粉含量高的1号膜的吸湿增重、水蒸气透过系数和透光率分别为40.16%,0.49 g·mm/m^2·h·k Pa和44.5%(450 nm),而3号膜则分别为21.39%,0.34 g·mm/m^2·h·k Pa和34.80%(450 nm)。综上,醋酸酯淀粉和卡拉胶是影响膜各项性能的关键成分。