ERCP对胆总管疾病的诊疗价值

目的:探讨经内镜逆行胆胰管造影(ERCP)对胆总管疾病的诊疗价值。方法:回顾性分析108例胆总管疾病行胆胰管造影的影像学资料。全部病例行超声波、MRCP检查,52例行多层螺旋CT检查。结果:ERCP术能较好的显示胆总管及其病变,且能对胆总管结石、慢性炎症狭窄等疾病进行微创治疗。结论:ERCP对胆总管病变的检查优于CT、MRCP,特别对十二指肠壁壶腹区的占位病变具有明显的优越性和诊疗价值。

特异性结合幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA)核酸适配子的筛选及鉴定

目的通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性。方法构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选出能够与HpaA具有高特异性、高亲和力结合的核酸适配子。随后利用筛选所得HpaA适配子通过体外实验验证与H.pylori菌体的结合以及对临床胃黏膜切片中H.pylori的检测效能。结果本研究培养并提取ATCC26695菌株基因组,通过PCR扩增HpaA部分基因长度约699 bp,并成功克隆构建了原核表达质粒pET28a/HpaA。经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化获得纯度约98%的重组HpaA蛋白作为筛选靶标。利用SELEX技术通过10轮正向筛选和5轮的负向筛选,获得6条与HpaA高亲和力的适配子分别命名为HA1~HA6。其中适配子HA6具有较高的亲和力和特异性,且适配子HA6核心序列在体外仍表现出与H.pylori菌体较高的结合力;利用羟基荧光素(FAM)标记的HA6适配子对166例H.pylori感染的患者胃黏膜中H.pylori进行检测,检出率为94.58%,高于同批次快速脲酶检测法的检出率(87.95%)。结论本研究筛选出的特异性结合H.pylori菌体表面HpaA的适配子,可能作为一种新的方法应用于胃黏膜组织中H.pylori的检测。

静脉麻醉在结肠镜诊治中的应用

目的观察咪唑安定、异丙酚静脉麻醉在结肠镜诊治中的效果和安全性。方法镇静组、对照组各40例,观察两组检查前、中、后血压、心率和氧饱和度变化,比较结肠镜操作效果及不良反应。结果镇静组40例患者均4级睡眠状态下完成操作,到达回盲部成功率为100%,到达回盲部时间为8.0±2.7分钟,对照组达回盲部时间为12.6±4.0分(P<0.05),镇静组25例患者无需变动体位即到达回盲部,而对照组仅2例(P<0.05)。镇静组检查前、中、后血压、心率、氧饱和度比较均无明显变化(P>0.05);对照组均有不同程度的疼痛,评分>6分的15例。检查中与检查前后比较,血压升高、心率变快(P<0.05),氧饱和度比较无差异(P>0.05)。结论咪唑安定和异丙酚联合静脉麻醉下的结肠镜诊治,安全有效,操作便利,时间缩短,不良反应低。

幽门螺杆菌黏附素A(HpaA)诱导T细胞高表达IL-21促进胃黏膜损伤

目的研究幽门螺杆菌黏附素A(HpaA)是否能通过诱导T细胞分泌白细胞介素21(IL-21)加剧幽门螺杆菌(H.pylori)感染后的炎症反应及黏膜损伤。方法收集H.pylori感染确诊患者临床内窥镜取得的胃黏膜,以及经根治后再次通过内窥镜取得胃黏膜,通过反转录PCR和Western blot法检测胃黏膜IL-21、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的mRNA水平及蛋白水平;同时克隆构建表达并纯化HpaA,并取健康未感染成年人外周血单个核细胞(PBMC),磁珠分选获得CD3^+T细胞。使用重组HpaA刺激分选获得的细胞,ELISA检测其上清中IL-21的水平;培养胃黏膜AGS细胞系并使用抗IL-21抗体中和培养液中的IL-2124 h,Western blot法检测AGS细胞中MMP2及MMP9的蛋白水平。结果H.pylori感染的胃黏膜中IL-21、MMP2和MMP9蛋白水平显著高于根治后的胃黏膜。重组HpaA蛋白能显著诱导CD3^+T细胞分泌高水平的IL-21,IL-21处理增加AGS细胞MMP2及MMP9的表达水平;使用抗体阻断IL-21后,MMP2及MMP9的蛋白水平显著降低。结论HpaA通过诱导T细胞产生IL-21促进H.pylori感染导致的胃黏膜损伤。

幽门螺杆菌通过诱导上调B细胞特异性Moloney小鼠白血病病毒整合位点1(Bmi-1)表达促进人胃癌细胞的侵袭

目的验证幽门螺杆菌(H.pylori)能够通过诱导B细胞特异性Moloney小鼠白血病病毒整合位点1(Bmi-1)高表达促进胃癌细胞的转移。方法收集82名胃癌患者手术标本,实时定量PCR和免疫组织化学染色检测胃腺癌组织Bmi-1的表达,并回顾性分析Bmi-1表达与胃癌病理特征及预后的相关性;采用pLPCX-Bmi-1质粒转染和H.pylori感染GES-1细胞,在过表达Bmi-1后,TranswellTM实验检测细胞的侵袭能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果胃癌组织中Bmi-1的mRNA及蛋白表达均高于癌旁组织,且高表达Bmi-1与肿瘤浸润程度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移及H.pylori感染相关;转染及H.pylori感染所致的Bmi-1表达上调后,GES-1细胞具有更高的侵袭能力和较低的凋亡比率。结论H.pylori感染能上调Bmi-1表达,抑制胃癌细胞的凋亡并促进其侵袭。

幽门螺杆菌粘附素HpaA诱导T细胞高表达IL-21促进AGS细胞迁徙的研究

目的验证幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Up)粘附素HpaA通过诱导T细胞分泌IL-21加剧其感染后促进胃粘膜损伤及胃癌转移的作用。方法收集56例确诊Hp感染患者临床内窥镜取得的胃粘膜,以及经根治后再次通过内窥镜取得胃粘膜,通过RT-PCR和Western blot比较其IL-21、MMP-2、MMP-9及其基因在Hp感染前后胃粘膜中的表达水平,并克隆构达、纯化粘附素HpaA。取健康未感染成年人外周血PBMC,磁珠分选获得CD3+T细胞。使用重组HpaA刺激分选获得的细胞,采用ELISA试剂盒检测其上清中IL-21的水平。培养胃粘膜AGS细胞系并使用不同手段干预培养环境中的IL-21水平,采用Western blot检测AGS细胞MMP-2及MMP-9的表达。并通过Transwell实验验证IL-21对AGS细胞迁徙的影响。结果Western blot检测Hp感染患者的胃粘膜中IL-21.MMP-2和MMP-9表达水平显著高于根治后的胃粘膜(PV0.05)。成功构建PET-28a/HpaA重组质粒,表达并纯化的粘附素HpaA能诱导CD3+T细胞分泌高水平的IL-21。AGS细胞试验显示-IL-21诱导AGS细胞MMP-2及MMP-9的表达水平显著升高;使用抗体阻断IL-21以及使用适配子HA6(之前报道的能够特异性结合HpaA的配基)阻断HpaA后MMP-2及MMP-9的表达水平显著下降,且AGS细胞迁徙水平降低。结论粘附素HpaA通过诱导T细胞产生IL-21,继而通过MMP对促进胃粘膜损伤及胃癌转移有重要意义。