血栓动物模型的^(99)Tc^m-重组水蛭素显像研究

目的 探讨以凝血酶为靶，重组水蛭素（ｒＨ）为配基进行血栓显像的潜在价值。方法 氯胺Ｔ法制备１２５ＩｒＨ，采用体外放射配体结合法分析ｒＨ对凝血酶纤维蛋白复合物的亲和、定量关系和时间反应动力学。亚氨基噻吩盐酸盐修饰法制备９９ＴｃｍｒＨ，进行小鼠体内分布测定及犬动、静脉血栓模型显像。结果 ｒＨ 不能直接与纤维蛋白原结合，当凝血酶与纤维蛋白形成复合物后才能与其形成三元复合物，且这种结合呈高亲和、特异和可逆性。９９ＴｃｍｒＨ 在小鼠心、脑、肝、脾、肺摄取低，肾摄取高，１５ ｍｉｎ 达（６４－７２４±５－０４２） ％ＩＤ／ｏｒｇａｎ，血清除迅速。犬股动脉血栓于４５ ｍｉｎ 可清晰显影，靶／ 本底（Ｔ／Ｂ） 比值为１－４７。静脉血栓于注药后３０ ｍｉｎ 就出现浓聚，并随时间延长血栓显影更清晰，１ ｈ Ｔ／Ｂ比值为１－５３。结论 ９９ＴｃｍｒＨ 有望成为１

血栓调节素研究进展

血栓凋节素(Thrombomodulin, TM)是血管内皮细胞膜上的凝血酶受体.近年来,国外一些学者相继发现TM在调控血栓形成和溶解中起重要作用.本文介绍TM的结构、性质、分布和功能,内皮细胞TM表达的调控以及TM研究的临床意义和应用前景.血栓调节素的结构和性质1981年,Esmon和Owen观察到当血液在体外凝固时,凝血酶激活蛋白C的效率非常低。

Defibrotide预防和治疗血栓疾病的研究进展

Defibrotide(去纤维蛋白多聚脱氧核糖核苷酸,以下简称DEF)是国外研制的预防和治疗血栓疾病的新药。DEF不但具有抗血栓和促纤溶作用,而且还能保护和改善心肌梗塞后的心功能,且无毒性作用。近年来,国外已将DEF试用于临床预防和治疗各种血栓疾病,取得了可喜的苗头。

条带杂交mRNA定量分析及其在血栓调节蛋白基因表达研究中的应用

含血栓调节蛋白cDNA的质粒转染大肠杆菌,经扩增、酶切、凝胶电泳纯化,获得长度为3.7kb的血栓调节蛋白cDNA,后者用随机引物法标记^(32)P,制成血栓调节蛋白的基因探针。将该探针与血栓调节蛋白mRNA进行条带杂交后,分别用β-液闪仪和放射自显影及密度扫描仪作定量分析。用本法研究了血管内皮细胞中血栓调节蛋白基因表达及血小板血栓调节蛋白mRNA的含量。

人尿红细胞生成素和血栓调节素的纯化研究

目的从人尿中分离纯化红细胞生成素 (EPO)和血栓调节素 (TM )。方法用超滤浓缩、离子交换层析及亲和层析等方法从新鲜人尿中分别纯化EPO和TM。结果从 2 0 0 0kg新鲜人尿中分别纯化得到了 4.47mgEPO和 9.92mgTM ,得率分别为 31.9%和 2 5 .0 % ,分子量分别为 (38.6± 1.0 )kD和 (6 0± 1.4)kD ;等电点分别为3.6 0± 0 .0 2和 3 .70± 0 .0 2 ;TM富含Glu、Ala和Gly ,毛细管区带电泳分析高度均一 ,有关生化参数与文献报道基本一致。结论该工艺可获得纯度较高的EPO和TM。

^(99)Tc^m-重组水蛭素的制备及血栓动物模型显像研究

采用亚氨基噻吩盐酸盐修饰法制备９９ Ｔｃｍ 重组水蛭素（９９ Ｔｃｍ ｒ Ｈ），并进行小鼠体内分布及兔股动、静脉血栓模型显像分析。结果表明：９９ Ｔｃｍ ｒ Ｈ 的标记率为 ９０８％ ， Ｐ Ｄ１０ 过柱前后放化纯度分别为８８８％ 和９３９％ ，比活度为 ３２９２ Ｇ Ｂｑ／ｇ；，在小鼠心、脑、肝、脾、肺摄取低，肾浓聚高，１５ ｍ ｉｎ达到（６４７２±５．０４）％ Ｉ Ｄ，血清除迅速；兔股动、静脉血栓于 １ ｈ 可清晰显影， Ｔ／ Ｂ 分别为 ２２４ 和１９５。

兔肺血栓调节蛋白的分离纯化及其抗凝作用的初步研究

本文用凝血酶亲和层析,制备电泳分离纯化了兔肺血栓调节蛋白(TM)。并对兔肺TM抑制血凝和血小板聚集,以及激活蛋白C 等作用进行了初步研究。结果表明,兔肺TM 的抗凝作用主要是抑制了内源性凝血系统,而对外源性凝血系统影响很小;并可通过蛋白C 系统起抗凝和纤溶作用;能完全抑制由凝血酶和瑞斯托霉素诱导的血小板聚集。

急性脑梗塞患者血小板膜糖蛋白研究

利用同位素标记的抗人血小板单克隆抗体SZ-2、SZ-21及SZ-51经直接放免法评估22例急性脑梗塞患者体内血小板的活化程度。结果:1.血浆内血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)的分子数在脑梗塞急性期呈显著增高(P<0.01),缓解期可恢复正常;2.血小板膜糖蛋白Ib在质膜上分子数显著升高(P<O.05),血小板膜糖蛋白Ⅲa及血小板表面GMP一140的分子数未见显著改变;3.血浆内血栓烷B2(TxB_2)的浓度显著升高,Tab2与6-酮-PGF1α的比值显著增高;4.血小板数量未见明显改变。结果提示急性脑梗塞体内血小板的活化程度显著增高,血浆内GMP-140的测定可作为急性脑梗塞的体外特异性诊断新的指标之一。

^(99m)Tc-SZ-51在下肢血栓放射免疫显像中的初步应用

为评估放射免疫显像（ＲＩ）对下肢血栓的诊断价值，应用亚锡离子还原法进行９９ｍＴｃ标记抗人活化血小板单克隆抗体ＳＺ５１，对８例下肢血管性病变患者，静脉注射９９ｍＴｃＳＺ５１后２、４和６小时行平面显像，必要时加做断层显像，或采集２４小时后的延迟图像。结果：８例中７例属下肢血管血栓，１例为下肢静脉曲张伴皮肤溃疡。７例中３例新鲜血栓ＲＩＩ均为阳性，其中１例经溶栓治疗，ＲＩＩ复查转为阴性；另外４例系陈旧性血栓，ＲＩ阴性。结论：９９ｍＴｃＳＺ５１ＲＩＩ适用于下肢新鲜血栓的诊断，尚可有效地观察溶栓疗法的效果。

主动脉血栓的动物模型制备

本文报告经家兔股动脉插入聚乙烯管4小时后,制备了主动脉血栓形成的模型。病理观察可见血管内皮损伤,以及动脉管壁与导管周围的血小板-纤维蛋白血栓的形成;此外,发现血小板数减少、血浆5-羟色胺(5-HT)、血栓烷B_2(TXB_2)和6-酮-前列腺素F_1a(6-酮-PGF_1a)升高,反映了血小板的活化以及血管内皮细胞的损伤。但常用的凝血试验指标未见明显改变。

利凡诺去白蛋白人血浆再利用的实验研究Ⅰ.蛋白C和蛋白S的纯化与鉴定

目的综合再利用利凡诺去白蛋白人血浆进行抗凝血成分蛋白C(PC)和蛋白S(PS)的分离纯化。方法采用钡盐吸附、分段盐析、亲和层析和制备性等电聚焦等技术从利凡诺去白蛋白人血浆中分别纯化PC和PS。结果所得PC和PS的相对分子量分别为 (6 1± 0 .9)、(83± 0 .8)kD ;等电点分别为 4.70± 0 .0 3、5 .2 0± 0 .0 3;分别富含Glu、Leu、Gly和Asp、Glu、Leu ;毛细管区带电泳分析高度均一 ;与文献报道基本一致 ;得率分别为 2 8.3%和 12 .6 %。结论该纯化路线省时、经济 ,有助于利凡诺去白蛋白人血浆的综合再利用和抗凝血成分输血制剂的研制和开发。

人血栓调节素放射免疫分析

从健康人尿中纯化了血栓调节素，免疫家兔产生抗血清，125I-血栓调节素用联结标记法制备，采用平衡法建立RIA数据用三次函数数据程序处理。方法的批内和批间CV分别为5.10％和10．94％，平均回收率为105.22％，可测范围为8．1～560μg／L，ED50为12.58μg／L，与凝血酶、蛋白C、蛋白S和蛋白C抑制物没有交叉反应。40名健康男、女性血浆血栓调节素含量为58．3±10．41μg／L（x±2s），本方法可为血栓栓塞性疾病的诊疗和蛋白C系统的基础及临床应用研究提供一种有效的分析手段。

纤维蛋白原结构与血栓形成

纤维蛋白原(简称纤原)是最早发现的人体内与凝血有关的重要因子。在血栓形成过程中它在凝血酶作用下先转化为纤维蛋白单体,然后相互以非共价键形式聚合起来,并在第ⅩⅢ凝血因子的作用下交联,成为血栓的基质骨架。对纤原的结构和功能的研究不仅有助于了解它在血栓形成过程的作用,更重要的是可为血栓性疾病的防治提供理论依据。

von Willebrand因子的分子生物学研究

von Willebrand因子(vWF)是1个大分子血浆糖蛋白,在调节血小板粘附于受损血管壁的过程中起关键的作用。同时,vWF还是血浆因子Ⅷ的载体,具有稳定因子Ⅷ活性的功能。本文主要讨论vWF的分子结构、生物合成、生理功能及其病理状态——血管性假血友病(vWD)的基因缺陷。 vWF的分子结构 vWF的互补DNA(cDNA)基因于1985年分别在4个不同的实验室克隆成功,这一进展大大地推动了vWF分子及其基因结构的研究。现已知道,vWF基因位于第12位染色体短臂(12 p12 12pter),全长150-200个千碱基对(kb),其中至少包括36个外显子,转录的vWF m RNA长约9.0kb,翻译1条2813个氨基酸的多肽链。

血小板疾病的研究进展

对血管损伤的正常止血反应可分为2个阶段。初期止血为血小板粘附于暴露的血管内皮下纤维的立即反应,邻近的血小板活化形成聚集物以及血管收缩。

脑出血患者血浆11-去氢-血栓烷B_2含量测定及其意义

11-去氢-血栓烷(Tx)B_2(DH-TxB_2)是TxB_2的体内主要酶代谢产物。34例脑出血患者发病后一月内血浆DH-TxB_2及TxB_2浓度均显著高于23名健康对照(P<0.005),说明患者体内血小板活化。12例急性期患者血浆DH-TxB_2浓度(13～18pg/ml)均明显高于对照组最高值(9.3pg/ml),而TxB_2与对照组有50％重叠;10例动态观察病例经3周治疗后血浆DH-TxB_2浓度显著降低(P<0.05),而TxB_2无显著性改变。DH-TxB_2不在体外形成,其血浆浓度的测定不受体外血小板活化的影响,是真实反映脑出血患者体内血小板活化程度的定量指标。

人酸性铁蛋白血清正常参考值分布范围的研究

报道用人酸性铁蛋白放射免疫分析法检测719名正常人血清酸性铁蛋白含量,发现该含量男性0～9岁组最低,2o～29岁组最高,以后迟缓下降;女性除50岁以上组变化较大外,其他各年龄组变化不明显。男女性别间除0～9岁组无明显差异外,其他各组差别显著。建立0～9岁组正常参考值为<110ug/L(±1.64S),10岁以上男性为<150ug/L 和女性为<115ug/L。酸性铁蛋白正常参考值的建立对进一步评价其与疾病关系有较重要的价值。

一组抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的建株

用纯化人血栓调节蛋白(TM)免疫Balb/c 小鼠,经细胞融合获得6株抗人TM 单抗,分别命名为SZ—52、SZ—53、SZ—54、SZ—55、SZ—56、和SZ—57。这6株单抗都能与人TM 和内皮细胞结合,并能抑制人TM 活性,而与除TM 外的血浆蛋白无交叉反应。其中SZ—52、SZ—53和SZ—57与红细胞、白细胞和血小板呈阴性反应,为特异性抗人TM 单抗;其余3株单抗则与白细胞或血小板有不同程度的交叉反应。

6-酮-PGF1α含量推断损伤时间的实验研究

用酶联免疫法检测小白鼠切创创缘６－酮－ＰＧＦ１ａ含量。结果小白鼠生前切创检材中６－酮－ＰＧＦ１ａ含量随着伤后时间的延长而逐渐升高，至伤后３ｈ达最高点，３ｈ后逐渐下降。

利凡诺去白蛋白人血浆再利用的实验研究Ⅱ.抗凝血酶Ⅲ和蛋白C抑制物的纯化与鉴定

目的综合再利用利凡诺去白蛋白人血浆进行抗凝血成分抗凝血酶Ⅲ (AT Ⅲ )和蛋白C抑制物 (PCI)的分离纯化。方法以钡盐吸附上清为原料 ,采用铝盐吸附、有机沉淀、离子交换层析、分子筛层析、亲和层析和制备性等电聚焦等技术从利凡诺去白蛋白人血浆中分别纯化AT Ⅲ和PCI。结果从利凡诺去白蛋白人血浆 10L中得到了AT Ⅲ 16 0mg和PCI4.2mg ,得率分别为 12 .7%和 10 .5 % ,其相对分子量分别为 (5 7± 0 .8)和 (5 6± 0 .8)kD ;等电点分别为 4.81± 0 .0 2和 8.0 1± 0 .0 2 ;分别富含Glu、Asp、Leu和Glu、Leu、Asp ;毛细管区带电泳分析高度均一 ;与文献报道基本一致。结论该纯化路线经济、简便 。