荧光定量RT-PCR检测类风湿关节炎患者葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA表达水平的研究

目的通过比较分析葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)mRNA在类风湿关节炎(RA)、其他自身免疫性疾病及健康人群之间的表达差异,探讨其在RA中的致病机制。方法建立实时定量RT-PCR方法,并利用该法检测128例RA患者(RA组)、32例其他自身免疫性疾病患者(疾病对照组)、100例健康体检者(健康对照组)G6PI基因的表达水平。结果经GAPDH校正后G6PI基因表达水平在RA组为2.72±2.09,其中活动组和缓解组分别为3.12±2.40和2.13±1.34,疾病对照组为2.14±1.43,健康对照组为1.25±0.73。RA组显著高于健康对照组(P<0.01),RA活动组基因表达水平显著高于缓解组(P<0.01),也显著高于疾病对照组(P<0.01)。结论 G6PI在RA患者中表达的显著增加表明G6PI可能参与了RA的发病过程,并与疾病的活动性相关,可作为RA的辅助性诊断指标及早期筛查指标。

质控血清的不同保存方法对测定结果的影响

目的 评价进口质控血清溶解后的不同保存方法对测定结果的影响。方法 将溶解后的进口质控血清用两种不同方法进行保存 ,用DimendionRxL全自动生化分析仪对两种血清分别进行平行测定 2 0项生化指标。结果 分装后冰冻保存的血清稳定性明显好于不分装组 ,除了TG外 ,CV均小于 5 % ,而不分装组CV有近 1 / 3的测试项目结果高于 5 %。结论 质控血清溶解后分装冰冻 ,使用时再复融是一种较好的保存方法。

葡萄糖-6-磷酸异构酶免疫复合物检测方法的建立及其在类风湿关节炎诊断中的应用

目的建立葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)免疫复合物测定方法,初步探讨其与类风湿关节炎(RA)发病机制的关系及其对RA辅助诊断、病情监测的作用。方法建立C1q抗体捕获ELISA方法,并对311例血清标本(RA患者176例、其他免疫疾病患者35例和健康体检者100例)和44例关节液标本(RA患者33例、非RA关节疾病患者11例)中的G6PI/G6PI抗体/C1q免疫复合物水平进行检测。结果以波长450 nm吸光度值(A_(450nm))表示复合物含量,176例RA患者血清中G6PI免疫复合物为0.918±0.507,显著高于其他免疫疾病对照组(0.746±0.399)和健康对照组(0.696±0.362),P<0.01;而两对照组间差异无统计学意义。RA活动组为1.045±0.529,显著高于非活动组(0.764±0.436),P<0.01。以健康对照组A_(450nm)值建立正常参考区间,结果G6PI免疫复合物对RA诊断的敏感性和特异性分别为60.2%和67.4%,活动期RA的阳性率为74%,显著高于非活动期(43.7%)。33例RA患者、11例其他关节疾病患者关节液中G6PI免疫复合物A_(450nm)分别为0.835±0.497和0.596±0.132,RA患者组显著高于其他关节病组,P<0.05。结论 RA患者血清和关节液G6PI免疫复合物含量增高,且增高程度与RA病情活动相关;G6PI免疫复合物可能在RA发病中起重要作用,且与疾病的活动性密切相关。

葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原、抗体测定在类风湿关节炎诊断中的作用

目的探讨血清和关节液中葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)抗原和抗体含量变化与类风湿关节炎(RA)病情活动状态的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定RA患者176例、其他免疫疾病患者35例、健康体检者100例的血清标本及RA患者33例、其他免疫疾病患者11例的关节液标本中G6PI抗原和抗体水平。结果 G6PI抗原在诊断RA中的敏感度和特异度分别为75.0%和93.3%;176例RA患者血清G6PI含量为(4.37±8.65)μg/mL,显著高于疾病对照组(0.07±0.07)μg/mL(P<0.01)和健康对照组(0.34±1.30)μg/mL(P<0.01);在RA组中,活动期患者血清G6PI含量为(7.61±10.69)μg/mL,显著高于缓解组(0.47±0.47)μg/mL(P<0.01);关节液G6PI表达量也显著高于疾病对照组,分别为(1.39±0.58)μg/mL和(0.16±0.17)μg/mL(P<0.05)。以波长450 nm吸光度值(A_(450nm))表示抗体含量,G6PI抗体的含量在RA组、疾病对照组以及健康对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),在RA活动组与非活动组之间差异无统计学意义(P>0.05);关节液中G6PI抗体含量RA患者与疾病对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 G6PI抗原在RA患者中高表达,并且与疾病活动性有密切关系。因此G6PI抗原可以作为敏感度、特异性俱佳的RA辅助诊断指标,尤其对病情判断有重要作用。而G6PI抗体在RA的诊断中价值不大,与病情活动亦无关。

HLA-B27阳性强直性脊柱炎患者淋巴细胞含量、DKK1和BMP-2因子表达研究

目的研究HLA-B27阳性强直性脊柱炎(AS)患者淋巴细胞含量、DKK1和骨形成蛋白-2(BMP-2)因子表达特点及临床意义。方法采用流式细胞术分别检测患者及健康者CD4+T、CD8+T、B及NK细胞百分率,并分析CD4+T/CD8+T比值,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)分别检测患者及健康者DKK1和BMP-2因子的表达。结果与对照组相比,HLA-B27阳性AS患者总T细胞含量百分比显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);B细胞含量百分比显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),DKK1和BMP-2的表达均显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫系统及DKK1和BMP-2异常可能是HLA-B27阳性AS发病机制之一,值得进一步深入研究。

类风湿关节炎患者白介素1水平的测定

目的探讨这些细胞因子白细胞介素1在类风湿性关节炎的发病机制中的作用。方法收集类风湿性关节炎患者100例为RA组,并以60名健康体检者为正常对照组。2组均采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清IL-1α、IL-1β、IL-1Ra的水平。结果经检测2组TNF-α、IL-1β、IL-6RA有显着的差异(P<0.01),RA组明显高于正常对照组。结论IL-1α、IL-1β、IL-1Ra在类风湿性关节炎患者的发病、发展中起着重要作用,定期检测其水平并采取对应治疗,对降低RA患者软骨破坏,提高疗效有着重要意义。

二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌感染的临床比较

目的:二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌(HP)感染的临床诊断价值,用以向临床日常实践中推荐使用。方法:117例胃炎、胃溃疡和胃癌患者胃黏膜活组织标本采用HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR进行HP检测,并比较二种检测方法的特异性、灵敏度等。同时以组织学染色和细菌培养二种"金标准"法作为比较。结果:二种"金标准"法诊断了HP感染的阳性66例,阴性51例;66例"金标准"检测法诊断HP阳性的标本中,其中有62例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阳性,60例实时荧光定量PCR检测阳性;51例"金标准"检测法诊断HP阴性的标本中,其中有49例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阴性,50例实时荧光定量PCR检测阴性,据此HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测HP的诊断敏感性为93.9%(62/66),特异性为96.1%(49/51);实时荧光定量PCR检测HP的诊断敏感性为90.9%(60/66),特异性为98.0%(50/51)。结论:HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR检测技术相当,但HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测不需要昂贵的仪器设备,结果便于阅读,操作方法简单,适宜于作为HP感染筛查的基础。

抗角蛋白抗体检测在类风湿关节炎诊断中的临床意义

目的探讨抗角蛋白抗体(AKA)检测对类风湿关节炎(RA)的诊断及病情评估的临床意义。方法检测180例RA患者及60例健康者血清中类风湿因子(RF)及AKA,其中RF采用速率散射比浊法检测,AKA采用间接免疫荧光法检测,比较两者单独诊断和联合诊断对RA的价值。结果 RF、AKA在RA中的阳性率均显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RF在RA中的敏感性和特异性为79%和67%;AKA为50%和93%。两者联合诊断,敏感性有所降低,但特异性为100%。AKA、C反应蛋白(CRP)和类风湿皮下结节是RA关节侵蚀的危险因素,从高到低依次为:类风湿结节、CRP、AKA。结论 AKA与RF联合诊断能提高RA的诊断率,AKA与RA患者的关节侵蚀密切相关。

血清胆红素的改良化学氧化法测定

目的 对改良化学氧化法和钒酸盐氧化法测定血清总胆红素和直接胆红素进行方法学评价.方法 采用改良化学氧化法测定血清总胆红素及直接胆红素值,与钒酸盐氧化法进行比较,并对改良化学氧化法的重复性试验、线性试验、干扰试验、回收试验进行评价.结果 改良化学氧化法和钒酸盐氧化法有很好的相关性 测定总胆红素的线性可达706.0 μmol/L,直接胆红素可达412.0 μmol/L 总胆红素、直接胆红素日内重复性变异均＜3.0%,日间重复性变异均小于4.0% 总胆红素及直接胆红素的回收率平均分别为99.5%和99.75% 溶血、脂血、低浓度维生素C（＜0.3 g/L）对测定无明显干扰.结论