线粒体融合素2在糖尿病大鼠心肌损伤中的变化

目的:探讨线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)在糖尿病大鼠心肌损伤中的变化。方法:腹腔注射55mg/kg链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,分为正常组、糖尿病4周组和糖尿病8周组。测定血流动力学指标、大鼠心系数;自动生化分析仪测定血浆肌酸激酶同工酶(creatine kinaseisozyme,CK-MB)水平。RT-PCR检测左室心尖部组织Mfn2的表达。结果:与正常大鼠相比,糖尿病4周、8周大鼠左室发展压、左室最大上升和下降速率、心率、左室做功均明显下降(P<0.05,P<0.01),心室舒张末压上升(P<0.01),心系数(HW/BW)明显增加(P<0.01),血浆CK-MB水平升高(P<0.05,P<0.01),Mfn2mRNA的表达降低(P<0.01);与糖尿病4周相比,糖尿病8周大鼠左室发展压、左室最大上升速率和下降速率、心率及左室做功进一步下降(P<0.05,P<0.01),心室舒张末压升高(P<0.01),HW/BW、CK-MB水平持续性升高(P<0.01),Mfn2mRNA的表达进一步降低(P<0.01)。结论:随着糖尿病病程的延长,糖尿病大鼠心室功能进一步下降,其机制可能与Mfn2的表达降低有关。

甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用

目的探讨甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮肾炎是否具有保护作用及其机制。方法 MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(20 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(40 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只。采用ELISA法检测各组小鼠血清中尿酸(UA)与肌酐(Cr)含量,各组小鼠血清及肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子水平;采用HE染色法检测肾脏病理改变;采用Western blot技术检测各组小鼠脾脏NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、NF-κB、p-IκBα、IκBα蛋白的表达。结果甘草酸能显著降低血清尿酸、肌酐含量;减少血清及肾脏IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子表达,改善肾脏病理改变;并能显著抑制NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、p-IκBα表达。结论甘草酸对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏起到保护作用。

芍药苷通过抑制NF-κB通路减轻MRL/lpr狼疮小鼠肝损伤

目的探讨芍药苷对MRL/lpr小鼠肝脏损伤的影响及其机制。方法MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr组、1.5 mg/kg地塞米松处理组、20 mg/kg芍药苷处理组、40 mg/kg芍药苷处理组,每组10只;正常对照组C57 BL/6小鼠10只。微板法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,ELISA检测各组小鼠血清及肝脏组织中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;HE染色检测肝组织病变情况,Western blot法检测各组小鼠肝脏受体相互作用蛋白140(RIP140)、Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)、核因子κBp65(NF-κBp65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、IκBα蛋白的表达水平。结果与正常对照小鼠相比,MRL/lpr狼疮小鼠血清中ALT与AST含量明显增加,MRL/lpr狼疮小鼠血清及肝脏组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量显著增加。肝组织中有炎症细胞浸润,MRL/lpr狼疮小鼠肝脏组织中RIP140、TLR4、NF-κB蛋白水平显著增加。芍药苷和地塞米松一样能显著降低MRL/lpr狼疮小鼠血清中ALT和AST含量,减少MRL/lpr狼疮小鼠血清及肝脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,减轻肝组织炎细胞浸润;并能显著降低MRL/lpr狼疮小鼠肝组织中RIP140、TLR4、p-NF-κBp65、NF-κBp65蛋白水平。结论芍药苷通过抑制NF-κB信号通路,从而对MRL/lpr狼疮小鼠肝脏损伤起到保护作用。

Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用

目的探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用机制。方法 MRL/lpr狼疮小鼠20只随机分为MRL/lpr对照组、5 mg/kg Y-27632处理组,每组10只;野生型对照组C57BL/6小鼠10只。采用ELISA检测各组小鼠血清、脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)相关炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)/硫氧还蛋白(Trx)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)相关蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK以及NF-κB的水平;Western blot法检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞Txnip、p38MAPK、NF-κB蛋白水平;ELISA检测T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果 Y-27632提高MRL/lpr狼疮小鼠血清及脾脏组织SOD水平;降低血清及脾脏组织MDA水平;降低血清、脾脏组织和脾脏T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平;抑制脾脏和脾脏T淋巴细胞Txnip、MAPK相关蛋白ERK、JNK和p38MAPK以及NF-κB表达,增加Trx含量。结论 Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠有保护作用。

褪黑素调控Nrf2/ARE信号通路延缓髓核间充质干细胞退变的实验研究

目的探讨褪黑素对氧化应激条件下的大鼠髓核间充质干细胞(NPMSCs)的影响及调节机制。方法使用差速贴壁法获取大鼠NPMSCs。显微镜下观察细胞状态,鉴定第三代细胞三系分化潜能和细胞表面免疫标志物;采用CCK-8法检测不同浓度过氧化氢和褪黑素诱导对大鼠NPMSCs活力的影响确定最佳浓度和实验分组;免疫荧光和流式细胞学技术检测NPMSCs活性氧水平;免疫印迹分析外基质标志蛋白(Ⅱ型胶原、糖胺聚糖)和通路核心蛋白(Nrf2、HO-1)表达情况。结果褪黑素在氧化应激下保护了NPMSCs的活性,且1μmol/L浓度保护效应最为明显(0.717±0.018,t=7.102,P<0.01)。褪黑素可抑制NPMSCs在H_(2)O_(2)诱导后的活性氧水平(阳性率70.0%vs.32.7%)。此外,褪黑素还能显著提高Nrf2/ARE信号通路中关键蛋白核因子E2相关因子(1.925±0.024,t=13.150,P<0.01)和血红素氧合酶-1(1.605±0.019,t=12.940,P<0.01)的活性,改善NPMSCs的功能。褪黑素治疗后,细胞基质蛋白Ⅱ型胶原(0.850±0.010,t=25.200,P<0.01)和糖胺聚糖(0.335±0.013,t=10.640,P<0.01)表达增加。结论褪黑素通过调控Nrf2/ARE信号通路可以影响NPMSCs退变的生物学特性。

芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤的保护作用

目的探讨芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤的影响。方法将系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5mg/kg)组,MRL/lpr+芍药苷(20mg/kg)组,MRL/lpr+芍药苷(40mg/kg)组,每组10只,给药7d;另取10只野生型C57BL/6小鼠作为正常对照组。第8天采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和血清炎症因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用HE染色检测肺部病理改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测各组小鼠肺组织中磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(P-PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(P-Akt)、磷酸化核因子κB p65(P-NF-κBp65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(P-IκBα)蛋白的表达。结果芍药苷能显著降低血清MDA含量;提高血清SOD、CAT、GSH-PX水平,减少血清炎症因子水平,改善肺组织病理改变,并能显著抑制P-PI3K、P-Akt、P-NF-κBp65、P-IκBα蛋白表达。结论芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤起到保护作用。

溃疡性结肠炎患者JAM-1蛋白与STAT3信号通路关系的研究

目的探讨溃疡性结肠炎对肠道紧密连接蛋白JAM-1表达的影响,并分析JAM-1蛋白与STAT3信号通路的关系。方法组织标本来自2017年1月—2018年1月之间在蚌埠医学院第一附属医院内镜室进行电子结肠镜检查,其肠镜标本表现和病理诊断为溃疡性结肠炎的患者,诊断标准参考《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012)》,收集40例标本作为实验组;同时收集手术室正常肠黏膜组织(胃肠外科肠道切除物边缘正常组织,以下所有正常肠黏膜组织为同一来源)20例作为对照组。采用组织病理学分级来评估溃疡性结肠炎的严重程度。采用免疫组织化学法(IHC)检测结肠组织中JAM-1、STAT3和pSTAT3的表达。结果组织病理学结果显示,实验组结肠黏膜JAM-1染色强度较对照组减弱,染色细胞数量减少,分布不规则;STAT3染色强度无明显变化;pSTAT3染色强度明显增强,染色细胞数增多。免疫组织化学结果显示,与对照组相比,实验组JAM-1蛋白表达下降,pSTAT3表达上升(P<0.05),差异有统计学意义,STAT3表达比较差异无统计学意义。结论溃疡性结肠炎患者肠紧密连接蛋白JAM-1的表达较正常人下降,pSTAT3表达较正常人上升,两者成负相关关系。

寡脱氧核苷酸MT01对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的探讨寡脱氧核苷酸(ODN)MT01对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)形态、增殖及成骨分化的影响。方法4周龄清洁级SD雄性大鼠5只,以全骨髓贴壁法培养SD大鼠BMSCs,通过观察不同代次的细胞形态、流式细胞仪检测表面相关标志物和成骨分化潜能,对所提取的干细胞进行鉴定。设立PBS组(对照组)和不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml)ODN MT01组进行对照研究,每组实验重复3次。通过DAPI和鬼笔环肽荧光染色观察各组BMSCs细胞核及骨架的形态变化;通过CCK-8法检测不同时间各组BMSCs的增殖活性;成骨诱导培养基培养7 d和21 d,分别行碱性磷酸酶染色及其活性检测和茜素红染色鉴定各组BMSCs的成骨分化程度。组间两两比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果随着代次增加,BMSCs纯度越来越高,第3代细胞整体呈鱼群样分布。流式细胞仪分析结果显示,细胞高表达CD29(99.8%)、CD44(96.1%),低表达CD11b(1.03%)、CD45(1.74%)。成骨诱导7 d后碱性磷酸酶染色及21 d后茜素红染色均为阳性。细胞核及骨架染色显示,ODN MT01浓度为4.0μg/ml时会导致BMSCs皱缩并降低伸展性。CCK-8结果显示,培养4 d时对照组吸光度值为0.446±0.018,1.0、2.0μg/ml ODN MT01组分别为0.505±0.019、0.528±0.014,与对照组比较差异有统计学意义(t=2.954、4.083,P=0.033、0.008),培养7 d时对照组吸光度值为0.514±0.027,1.0、2.0μg/ml ODN MT01组分别为0.607±0.007、0.636±0.023,与对照组比较差异有统计学意义(t=4.664、6.091,P=0.009、0.008),BMSCs增殖能力较对照组明显升高,而4.0μg/ml ODN MT01(0.427±0.013)对BMSCs增殖能力具有抑制作用(t=4.332,P=0.015);诱导BMSCs成骨分化过程中随着ODN MT01浓度的升高,蓝色团块和矿化结节均显著增加,培养7 d后的碱性磷酸酶活性升高趋势与ALP染色结果相类似,对照组碱性磷酸酶活性为1.207±0.023,0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml ODN MT01组分别为1.747±0.095、2.200±0.136、3.560±0.088、3.490±0.144,与对照组比较差异均有统计学意义(t=4.313、7.934、18.800、18.240,P=0.005、0.001、<0.001、<0.001),而2.0、4.0μg/ml组的诱导效果相比基本无差异(t=0.562,P=0.590)。结论在不影响BMSCs形态的情况下,浓度为2.0μg/ml的ODN MT01可显著促进BMSCs的增殖和成骨分化。

强脉冲光照射与弹力绷带压力治疗防治增生性瘢痕的疗效观察

目的比较强脉冲光(intense pulsed light,IPL)与弹力绷带压力治疗防治皮肤移植术后供皮区瘢痕增生的疗效和安全性。方法自2019年4月至2020年4月,蚌埠医学院第一附属医院整形外科,对植皮术后供皮区瘢痕治疗的12例患者临床资料进行分析,根据治疗方式将其分为IPL治疗组和弹力绷带组,治疗完成后观察随访,A组为IPL治疗组(5例),行IPL治疗3~5次,每次间隔4~5周;B组为弹力绷带组(7例),使用弹力绷带加压包扎6个月,18~24 h/d。治疗前后采用患者与观察者瘢痕评估量表对瘢痕情况进行评分,评估疗效。结果随访3~6个月,A组患者供区增生性瘢痕逐渐变平滑,色素沉着逐渐消退,瘙痒感减轻;B组患者供区出现增生性瘢痕和色素沉着,瘙痒感无明显减轻。两组患者与观察者瘢痕评估量表评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IPL治疗较弹力绷带压力治疗法改善增生性瘢痕较明显,尤其在瘢痕色泽、厚度及瘙痒感方面有较大改善。