口腔粘膜上皮癌前及癌变中PCNA和P53的表达

目的：检测口腔粘膜上皮癌前及癌变组织中ＰＣＮＡ和ｐ５３的表达，探讨口腔癌变的机理。方法：采用免疫组化的方法检测８０例口腔粘膜病变组织中ＰＣＮＡ和ｐ５３的表达。结果：正常口腔粘膜基底层有少数ＰＣＮＡ阳性细胞，随着粘膜异常增生程度的加重到鳞癌，ＰＣＡＮ表达的阳性分级升高，ＰＣＮＡ的相对含量也升高。Ｐ５３的阳性表达仅见于重度异常增生及鳞癌组织中。结论：对ＰＣＮＡ和ｐ５３的研究有助于探讨口腔粘膜癌变多阶段发生过程的机理，并可为监测癌变提供生物学指标。

人牙周膜干细胞的体外分离、纯化及初步鉴定

目的:体外分离纯化人牙周膜干细胞,研究其生物学特性及表型特点并进行初步鉴定。方法:采用胶原酶和D ispase酶联合消化法培养人牙周膜干细胞,有限稀释法分离纯化,将克隆形成的细胞通过透射电镜观察其超微结构、流式细胞仪细胞周期分析及免疫组织化学染色技术检测抗波形丝蛋白(V im en-tin)、STRO-1、骨粘素(ON)、骨涎蛋白(BSP)的表达。结果:获得纯化人牙周膜干细胞,在透射电镜下,这种细胞核质比例大,核大,细胞器少;流式细胞仪细胞周期分析大多数细胞处于G0/G1期,为慢周期性;该细胞抗波形丝蛋白、STRO-1表达阳性、骨粘连素、骨桥蛋白弱阳性表达。结论:提供了比较有效的分离纯化牙周膜干细胞的方法。该方法分离的人牙周膜干细胞具有干细胞的超微结构、细胞周期及表型特点。

CD147和MMP-2、VEGF在腺样囊性癌侵袭转移中的作用

目的:研究CD147和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)在腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)组织中的表达和意义。方法:采用免疫组化EnvisionTM法检测72例ACC组织中CD147和MMP-2、VEGF的表达情况,结合临床病理资料进行统计分析。结果:CD147和MMP-2、VEGF在ACC组织中高表达,阳性表达率分别为62.5%、65.3%、73.6%;三者的表达均与肿瘤病理分型和临床分期有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄无明显关联(P>0.05);神经侵袭组的CD147和MMP-2表达明显强于无神经侵袭组(P<0.05),VEGF在有无神经侵袭组间的表达无统计学差异(P>0.05);血管侵袭组和肿瘤发生转移组的CD147和MMP-2、VEGF的表达均明显强于对应组(P<0.05);CD147的表达与MMP-2和VEGF的表达具有显著相关性(P<0.001)。结论:CD147和MMP-2、VEGF的表达与ACC的侵袭转移密切相关,检测三者的表达有助于对ACC进行临床病理研究及转移潜势预测。

脱细胞真皮组织工程鼓膜在豚鼠鼓膜修补术中的应用

目的观察脱细胞真皮组织工程鼓膜在鼓膜修补术动物实验中的效果。方法建立豚鼠慢性鼓膜穿孔模型30只,同时构建复合成纤维细胞的脱细胞真皮组织工程鼓膜。将每只豚鼠左耳作为手术耳,施行内植法植入组织工程鼓膜,右耳作为空白对照。每周观察鼓膜愈合情况、听阈变化,同时观察组织学结构改变。结果鼓膜修补手术30耳中,2耳因感染而未愈合,愈合率为93.3%;对照耳仅4耳愈合,愈合率为(13.3%);愈合鼓膜外观与正常鼓膜相似,听性脑干反应测试示术耳听力恢复正常。苏木精-伊红染色结果表明采用组织工程鼓膜修复的的鼓膜有着正常鼓膜的三层结构,即鳞状上皮层、中间纤维层及粘膜层,而空白对照耳自行修复的鼓膜中缺少纤维层结构。结论组织工程鼓膜可以作为良好的鼓膜移植材料。

三种组织工程鼓膜的构建

目的构建3种不同材料的组织工程鼓膜,并对其进行生物学特性检测。方法体重30kg健康雄性小白猪1只,制备脱细胞硬脑膜及脱细胞真皮,并从牛皮中提取液态胶原,将第3代豚鼠鼓膜成纤维细胞1×106个/mL,各0.2mL种于3种材料表面进行培养,倒置相差显微镜下观察成纤维细胞的生长状态。培养1周后,将3种材料分别进行扫描电镜及HE染色观察,测定材料厚度及其张力。结果成纤维细胞在3种材料表面生长良好,呈束状平行排列,其中以胶原与脱细胞真皮表面成纤维细胞生长情况较佳。HE染色及扫描电镜下可见成纤维细胞呈单层于3种材料表面连续生长。胶原膜、脱细胞真皮及脱细胞硬脑膜的平均厚度分别为9.4、10.0及10.4μm。张力强度测定,复合成纤维细胞的胶原组织工程鼓膜张力(1.417±0.030)N/mm2,复合成纤维细胞的脱细胞真皮张力为(24.500±2.040)N/mm2,复合成纤维细胞的脱细胞硬脑膜张力为(53.300±2.600)N/mm2;复合成纤维细胞的脱细胞真皮张力与正常豚鼠鼓膜张力26.700N/mm2最接近。结论脱细胞猪真皮为支架复合成纤维细胞构建的组织工程鼓膜,其张力与厚度均与正常豚鼠鼓膜相接近,是构建组织工程鼓膜的理想材料。

ras p21癌蛋白在颊粘膜上皮癌前及癌变中表达的定量分析

通过建立图像分析系统对免疫组化染色结果进行定量，观察了ｒａｓｐ２１在口腔颊粘膜上皮由正常、炎症、癌旁上皮到鳞癌的变化过程的表达并进行分析。结果显示，ｐ２１由癌旁上皮开始表达水平明显提高，到高分化鳞癌达到最大值，而在中等及稍差分化的鳞癌、发生转移的鳞癌表达水平下降。组织学也显示了在趋于分化成熟及高分化的上皮细胞中ｐ２１表达水平高。提示了ｐ２１的高表达与上皮细胞的增殖及转移与否关系不大，而与上皮细胞的分化状态有关。此外，结果还显示了所采用的综合了阳性反应程度及细胞阳性率两方面含义的定量指标—阳性指数（ＰＩ）的可靠性和精确性。

ras P21癌蛋白在颊粘膜上皮癌前及癌变中表达的定量分析

ｒａｓＰ２１癌蛋白在颊粘膜上皮癌前及癌变中表达的定量分析通过建立图像分析系统对免疫组化染色结果进行定量，观察了ｒａｓＰ２１在口腔颊粘膜上皮由正常、炎症、癌旁上皮到鳞癌的变化过程的表达并进行分析。结果显示，Ｐ２１由癌旁上皮开始表达水平明显提高，到高分化...