解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科进修医师继续教育的研究和探讨

目的 分析解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科进修医师的基本现状,为个性化教学和提高解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科的继续教育水平提供理论依据。方法 对2009年2月-2012年12月在解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科进修的学员进行问卷调查,问卷包括学员的年龄、性别、工作年限、学历、职称、原单位的基本情况、来进修学习的目的等,并对收回的101份问卷进行分析。结果 分析结果显示,5年以来,解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科进修医师56.4%为男性,43.6%为女性;进修时平均年龄33.5岁,平均工作年限9.6年,原单位距北京1000公里以上的57.4%,大专5人,本科及以上106人,主治医师75%,副主任医师以上18.8%。进修医师来自三甲医院者占79.2%,其中教学医院占78%,自愿来进修学习的比例78.2%。结论 解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科进修医师以三甲医院的主治医师为主要人群,具有较好的前期教育基础和临床工作经验,亚专科进修目的明确,为开展个性化教学提供了良好的基础。

耳鼻咽喉头颈外科住院总医师在进修生继续教育中的作用

耳鼻咽喉头颈外科的专科特点决定了进修生继续教育的必要性,而耳鼻咽喉头颈外科住院总医师的职责又决定了其在进修生继续教育中的桥梁和纽带作用,主要表现在住院总医师可以更合理的为进修生安排科内讲座;更大程度的激发进修生的学习主动性;更全面的为进修生分配床位、安排一线值班;更好地规范进修生的病历书写;更多的使用手术室数字化多媒体提高进修生的学习效率。实践证明,重视住院总医师在耳鼻咽喉头颈外科进修生继续教育中的作用,对科室的教学和临床工作具有一定的作用,值得推广借鉴。

免疫、变态反应与耳鼻咽喉疾病

过敏性鼻、鼻窦炎和诸多耳鼻咽喉慢性炎症疾病,都是机体免疫机制对入侵异己成份的应答表征。免疫学的研究与运用在耳鼻咽喉头颈外科领域内,必然受到日益增多的关注,并将更多地体现在临床诊疗活动中。

免疫、变态反应与耳鼻咽喉疾病

人们最早的免疫学（Immunology）知识，从牛痘天花开始。上世纪60年代以后现代免疫学研究获得突破性进展。有文史记载的千百年来，大量屠杀人类的多种烈性传染病，像天花、霍乱、鼠疫、脑炎、脊髓灰白质炎等，使用疫苗接种预防，已获得了严格的控制，并趋于消灭。对新发现的传染病，如AIDS、非典、禽流感等，科学家们正忙于研制特异性疫苗。如上种种，说明免疫反应或称应答（Immune Response）是机体有效地抵御病原体入侵，保持自身稳定的重要机制。姜泗长院士在顾之燕教授编著的《耳鼻咽喉科变态反应性和免疫性疾病》一书的序言中指出：从整体上来分析，慢性炎症反应是体液和细胞介导的免疫机制的表达，极其深刻地揭示了机体抗病毒和修复现象的本质。

西北地区非综合征型耳聋患者GJB2、SLC26A4基因突变的分子流行病学研究

目的探讨GJB2、SLC26A4基因突变在中国西北地区非综合征型耳聋(nonsydromic hearing impair-ment,NSHI)患者中的突变频率及主要的突变方式。方法采集中国西北地区801例非综合征型耳聋患者血样,应用PCR技术扩增GJB2基因的编码区和SLC26A4基因第7、19外显子,PCR产物进行直接测序,运用DNAS-tar5.0或BioEdit软件进行测序结果分析。结果801例NSHI患者中共检测到125例发生GJB2基因突变,突变率为15.61%(125/801),其中双等位基因(纯合或复合杂合)突变率为8.99%(72/801),235delC约占所有突变的78.79%(156/198)。101人发生SLC26A4基因(P7、P19)IVS7-2A>G、H723R和T721M突变,突变率为12.61%(101/801),其中双等位基因突变率为5.12%(41/801)。结论在中国西北地区NSHI患者中,235delC是GJB2基因最常见的突变方式,IVS7-2A>G和H723R是SLC26A4基因主要的突变方式。

新一代测序技术在遗传性耳聋基因研究及诊断中的应用

超过50%的耳聋由遗传基因缺陷所致,伴随着基因组学技术的发展,耳聋分子遗传学研究逐渐成为耳科学研究的前沿领域。新一代高通量测序技术的出现,提供了以数据为导向的新的遗传性疾病研究模式,革新了人们对遗传性疾病的认识过程,使得对遗传性疾病的研究策略也发生了重大转变。近年来新一代测序技术(Next generation sequencing,NGS)在耳聋研究中的应用,大大加快了耳聋基因发现的速度,并逐渐向临床应用方向转化。文章总结了遗传性耳聋的特点和研究现状,以及新一代测序技术在耳聋研究中的应用和前景,以及基于NGS技术的耳聋基因研究和临床耳聋基因诊断的发展方向。

噪声引起小型猪耳蜗炎症复合体的激活及蛋白质组学研究

目的通过研究炎症复合体及相关通路在猪耳蜗中的激活,探讨噪声介导炎症复合体激活的关键分子机制,为噪声性耳聋的预防和治疗提供新靶点。方法采用小型猪为研究对象,建立噪声性耳聋模型,测试噪声暴露前后动物的ABR阈值,应用蛋白质组学iTRAQ、生物信息学、western blot、荧光实时定量PCR等技术,研究噪声刺激引起耳蜗炎症复合体的激活以及作用机制。结果正常小型猪ABR阈值为35.4±2.6 dB SPL,噪声后一天ABR阈值平均提高到72.1±4.1dB SPL,在4k Hz处听力损失最严重,高频听力损失较低频严重;噪声后七天平均ABR阈值恢复至52.8±4.7dB SPL,4k Hz以上听力恢复较低频稍差。iTRAQ实验共鉴定到蛋白质2158种,噪声暴露后较正常组具有显著差异表达的蛋白质共227个,富集在免疫过程的差异表达蛋白包括:ASC, caspase-1, IL-1 beta,CD59等。富集的KEGG pathway包括:阿尔兹海默病信号通路,帕金森病信号通路,MAPK信号通路,,氧化磷酸化通路等。结论噪声暴露后可能激活耳蜗内NLRP3受体介导的炎症复合体,通过caspase-1活化IL-1β、IL-18,并间接促进TNF-α等炎症因子上调,加剧耳蜗内炎症反应,导致耳蜗内重要结构的损伤,这一机制可能是噪声引起听力损失的重要原因。

大鼠耳蜗毛细胞前体细胞与耳蜗间质细胞共培养的实验研究

目的探讨耳蜗间质细胞对耳蜗毛细胞前体细胞——大上皮嵴(greater epithelial ridge,GER)细胞的诱导分化作用。方法取出生后第1天大鼠20只,随机分为2组,每组各10只,利用酶消化和机械分离相结合的方法分别分离出纯耳蜗GER细胞和耳蜗间质细胞,并进行体外混合培养及形态学的观测,对共培养10天的标本行抗Calretinin(标记幼稚毛细胞)及抗p27抗体(标记支持细胞)的免疫细胞组织化学染色鉴定。结果混合培养的耳蜗GER细胞和间质细胞易形成片状细胞岛,共培养10天后,有部分细胞表达Calretinin,亦有少数细胞表达p27,但无Calretinin及p27双标记者。结论GER细胞与耳蜗间质细胞共培养,可以诱导GER细胞分化为毛细胞及支持细胞表型。

碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及其在内耳基因治疗中的实验研究

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)双顺反子真核表达载体在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对毛细胞的保护作用。方法 利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖体进入位点 (internalribosomeentrysite,IRES) ,构建人bFGF与增强型绿色荧光蛋白 (enhancegreenfluorescenceprotein ,EGFP)基因真核表达载体pIRES bFGF EGFP。采用硬脂胺 (stearylamine ,SA)脂质体介导bFGF基因转染豚鼠内耳 ,噪声暴露即刻通过圆窗向豚鼠耳蜗注入含有bFGF基因作为治疗基因的真核表达载体 ;或在噪声暴露前 7d ,作为保护因子转导转染豚鼠耳蜗。结果 构建的pIRES bFGF EGFP在转染 2 4h后开始表达 ,48h达到最高 ,表达时间可持续 1个月。治疗组在噪声后听性脑干反应平均阈值均低于噪声组 ,在保护组 :pIRES bFGF EGFP对耳蜗毛细胞有明显的保护作用。结论本研究成功地构建了pIRES bFGF EGFP真核共表达载体 ,具有bFGF、EGFP的双重活性 。

成年与老年大鼠耳蜗核胆碱乙酰化酶免疫组织化学研究

采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法，对成年（２～３月龄）和老年（２０～３６月龄）Ｗｉｓｔａｒ大鼠耳蜗核组织进行ＣｈＡＴ免疫组织化学显色，并利用计算机图像分析系统对免疫反应阳性细胞进行计数。观察老年大鼠耳蜗核组织胆碱乙酰化酶（ＣｈＡＴ）免疫反应的变化，研究其与老年性聋的发病关系。结果发现ＣｈＡＴ免疫反应阳性神经元主要散在分布于背侧核（ＤＣＮ）的梭型细胞层，老年大鼠耳蜗背侧核ＣｈＡＴ阳性细胞数目少于成年组（Ｐ＜０．００１）。实验结果提示，耳蜗核ＣｈＡＴ阳性细胞数目的减少可能与老年性聋的发病有关。

SA脂质体介导报告基因转染耳蜗的实验研究

目的 探索直接注射质粒及SA脂质体与质粒复合物在豚鼠耳蜗内表达的情况。方法 以构建的含绿色荧光蛋白基因pEGFP cDNA的重组真核表达质粒为外源基因,与SA脂质体一起转染内耳耳蜗毛细胞;通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果 使用阳离子脂质体SA的脂质体质粒复合物组转染耳蜗,表达效率高于单纯质粒组,于转染后48h表达出的蛋白量最大。结论 应用脂质体及直接注射法是使外源基因在豚鼠耳蜗内表达的简便、有效途径。

常染色体显性遗传非综合征型耳聋致病基因定位研究

耳聋具有高度的遗传异质性,迄今已定位了51个常染色体显性遗传非综合征型耳聋(autosomaldominantnon-syndromicsensorineuralhearingloss,DFNA)基因位点,20个DFNA相关基因被克隆。文章收集了一个DFNA巨大家系,家系中有血缘关系的家族成员共170人,对73名家族成员进行了详细的病史调查、全身检查和耳科学检查,提示39人有不同程度的迟发性感音神经性听力下降,未见前庭及其他系统的异常。应用ABI公司382个常染色体微卫星多态标记进行全基因组扫描连锁分析,将该家系致聋基因定位于14q12-13处D14S1021-D14S70之间约7.6cM(3.18Mb)的区域,最大LOD值为6.69(D14S1040),与已知DFNA9位点有4.7cM(2.57Mb)的重叠区,DFNA9致病基因COCH位于重叠区域内。下一步拟进行COCH基因的突变筛查,以揭示该家系耳聋的分子致病机制。

CDH23基因部分外显子与爆震性耳聋易感性的关联性研究

目的探讨耳钙粘蛋白基因(CDH23)多态性与军事噪声性听力损失之间的关系。方法调查对象来自解放军某部参加过军事演习训练的官兵,其中耳聋易感组39人、不易感组33人。所有受检对象均采集外周血并提取DNA,进行CDH23基因部分外显子序列测定。结果在耳聋易感组与不易感组之间CDH23基因的3个外显子(7、8、42)未发现差异,其中rs7087735位点的基因型分布及其等位基因频率在两组间差异无显著性,与已发表资料相比差异也无显著性。结论耳钙粘蛋白基因多态性可能在噪声性听力损失的发病过程中起重要作用,但外显子7、8、42上未见与此有关联的改变。

骨参舒耳片治疗感音神经性耳聋耳鸣Ⅱ期临床研究

目的对中药新药骨参舒耳片治疗感音神经性耳聋耳鸣的疗效进行Ⅱ期临床研究。方法 120例感音神经性耳聋耳鸣病人,随机分为双盲治疗组、对照组和开放治疗组,每组患者各40例,分别给予骨参舒耳片和对照药进行治疗。用药前后分别检测血、尿常规和肝肾功能以评价其安全性,观察比较中医临床症状、纯音听阈和耳鸣疗效以评价其有效性。结果治疗组耳聋总有效率42.2%,愈显率4.6%;对照组总有效率18.7%,愈显率0%;开放治疗组耳聋总有效率58.7%,愈显率6.3%;治疗组耳鸣总有效率89.2%,愈显率59.5%;对照组耳鸣总有效率30.8%,愈显率5.1%;开放治疗组耳鸣总有效率74.3%,愈显率57.1%。统计学分析结果显示,治疗组与对照组疾病疗效及中医症候疗效差异均具有统计学意义。用药过程中无不良反应出现。结论骨参舒耳片治疗感音神经性耳聋耳鸣的疗效及安全性均较好。

内镜下经鼻入路暴露岩尖的解剖研究

目的通过影像学、内镜手术两种方法对内镜下经鼻入路暴露岩尖这一手术入路进行研究,为临床应用提供依据。方法选取24具国人成人尸头标本,进行轴位、冠状位及矢状位高分辨率CT扫描,观察与内镜下经鼻入路暴露岩尖的相关解剖标志,并测量其距离。选择5例10%甲醛固定、动脉灌注染料的尸头标本,模拟内镜下经鼻入路暴露岩尖(10侧)。记录内镜下解剖图像,描述其相关解剖关系。结果通过影像学资料可了解蝶窦发育情况并测量一系列颅底骨性解剖标志的距离,蝶骨嵴至两侧视神经管眶口直线距离相比较无显著性差异(P>0.05)。所有标本通过内镜经鼻入路均从颈内动脉内侧到达岩尖,翼管及翼管动脉可作为寻找颈内动脉的重要解剖标志。结论影像学资料应作为内镜下经鼻入路暴露岩尖手术的术前常规参考;蝶骨嵴位于两侧视神经管眶口的中点,为术中可靠的解剖标志。从解剖学角度内镜下经鼻入路暴露岩尖具有可行性,该入路径路短,副损伤小,可作为临床治疗岩尖病变的重要术式之一。

强声暴露后豚鼠耳蜗外毛细胞电反应特性的在体研究

目的 探讨强声暴露后豚鼠耳蜗毛细胞感受器电位 (receptorpotential,RP)变化和复合神经动作电位(compoundactionpotential,CAP)的关系。方法 在成功建立豚鼠耳蜗毛细胞电反应记录方法后 ,将同一强度、不同频率的强声施加于受试耳 ,观察外毛细胞频率响应和RP及圆窗CAP的变化。结果 外毛细胞在不同频率强声暴露后 ,特征频率 (characteristicfrequency ,CF)的RP反应幅度减小 ,刺激声强度与RP的I-O曲线线性增加 ,CF的频率选择性下降。频率低于CF的强声较高于CF的强声更易引起CF的RP下降。重复暴露有累加效应。同步记录的圆窗CAP未见阈移。结论 低频强声引起耳蜗外毛细胞RP损伤也遵循半倍频程漂移规律。

耳鸣客观诊断研究现状及展望

耳鸣一直是临床难题之一 ,也是耳科学最前沿研究课题。耳鸣的发生机理仍不清楚 ,耳鸣的客观诊断尤其困难。以往 ,耳鸣的诊断主要依靠患者主诉和主观测听结果 (耳鸣匹配等 ) ,常规听力学检查方法未能为耳鸣提供客观证据。近来 ,现代脑功能成像技术 (如 MEG、PET、MRI)为耳鸣客观检测带来了新的希望。本文综述耳鸣客观诊断研究现状 。