中医药院校生物制药实验指导教材建设的研究

为培养生物制药专业学生尽快熟悉生物制药企业和生物医药分析机构的专业技能,本文以贵州中医药大学生物制药专业教学中存在的问题为论点探讨《生物制药实验指导》教材建设在生物制药中的意义。并以教学实验的方式贯穿到学生实践中,为学生毕业后能够在生物药品生产企业从事生物药品的生产及生物医药的分析与检验工作打下夯实基础。

Seminar教学法在中医学术型研究生培养中的运用

Seminar教学法就是小组教学会议,参与者在指导者的指导下进行相关问题的讨论。为培养中医学术型研究生科研能力与科研思维,课题组通过运用Seminar教学法于“医学科研思路与方法”教学中,通过课前准备、课堂实施、课程评价等方面进行探讨,学生的科研能力,创新意识,科研素养得到一定程度提高。在工作单位能够独自承担国家级、省部级课题的研究工作,获得用人单位的满意,同时达到教学相长的效果,培养具有较高科研能力和科研素养的中医药研究生。

中药分子鉴定技术在中药鉴定实验教学的实践与探索

如何使学生了解中药鉴定学前沿,系统掌握中药鉴定学实验操作技能,更好地理解和应用中药鉴定学理论,成为中药鉴定学教师关注的问题。本文总结国内中药鉴定学实验教学的开设方式,分析其特点,在此基础上,在贵州中医药大学科研实验中心将中药分子鉴定技术及自主设计实验引入中药鉴定实验培训中,结合平台的资源及成果优势,将科研反哺教学,取得良好的效果。这种方式不仅为相关院校中药鉴定学实验课程的开设提供借鉴,也为其他课程实验的优化提供参考。

全国教育大会背景下高等中医院校教育改革的历史新责任

本文就当前高等中医院校在人才培养对人文素质和职业素养要求不足的现状,立足习近平总书记在全国教育大会上强调的教育要培养什么样的人,为谁培养人的讲话,对高等中医院校培养中医传承人才提出了三点客观的教育改革建设,为高等中医院校制定中医药传承人才培养方案提供指导。

“精血同源”现代生物学本质理论探析

“精血同源”是中医基础理论的经典概念之一,中医认为肾藏精、精血互生。研究显示中医学肾本质可能与维生素D(Vitamin D)轴有关,Vitamin D可以通过与Vitamin D-成纤维生长因子23-Klotho蛋白(Vitamin D-FGF23-Klotho)轴与血液系统产生关联并相互干预,这一机制与中医“精血同源”理论中精与血之间关系有较多关联及相似之处。提出Vitamin D-FGF23-Klotho轴与血液系统之间相互影响、相互干预的关系可能是“精血同源”的现代生物学本质之一,为后续的相关实验研究提供理论依据,同时可进一步探索益精补血药物的潜在作用靶点。

天麻贮藏工艺研究

目的:考察蒸制断生、真空包装、低温贮藏、生物防腐剂(壳聚糖、连翘提取物)等技术手段对天麻外观质量、内在品质及贮藏期的影响,探究天麻的最佳贮藏工艺。方法:分别利用硬度计、色度计、称重法、HPLC、硫酸-苯酚法测定天麻的硬度、色度、可食率、失重率、天麻素及对羟基苯甲醇总量、天麻多糖含量,并对以上结果进行聚类分析。结果:天麻最佳的贮藏工艺为天麻经蒸制4 min后,通过热风干燥散失40%水分,涂抹2.00%壳聚糖,抽真空后4℃低温贮藏。在此工艺下贮藏6个月的天麻失重率降低为2.42%,硬度为16.47 kg/m^(3),可食率未见变化,天麻素与对羟基苯甲醇总含量为0.38%,多糖含量为15.45%,色度及滋味无明显改变。结论:鲜天麻经蒸制、热风干燥、涂刷壳聚糖、真空冷藏后能够有效保证天麻质量。

川续断根蛋白提取工艺的优化及分析

为开展川续断根的蛋白质组学研究,需对川续断根蛋白的提取工艺及SDS-PAGE凝胶电泳图谱进行分析。研究以川续断根为研究材料,用Tris-HCl法提取不同产地川续断根蛋白,用SDS-PAGE凝胶电泳技术对不同产地川续断根蛋白的差异条带进行分析,还对川续断根蛋白的提取工艺进行了响应面优化。结果表明:湖北川续断根中蛋白含量较高,贵州次之,云南较低;经凝胶电泳图灰度值分析,24 ku和34 ku处有两条蛋白条带在不同产地(云南、湖北、贵州)间显著差异表达(P<0.05);响应面优化法得到了川续断根蛋白最佳的提取工艺条件:提取温度16.84℃,提取时间0.84 h,pH值6.58,料液比1∶1.64。筛选的差异蛋白条带及优化的川续断根蛋白提取工艺,可为今后在蛋白质组层面进一步阐释不同产地川续断质量差异形成的分子机制提供基础资料。

冬虫夏草与维生素D轴存在潜在关系治疗卵巢早衰的研究进展

卵巢是女性的生殖腺,在中枢神经系统-下丘脑-垂体及卵巢自分泌、旁分泌的复杂调控下,完成排卵和激素分泌的功能。通过文献研究发现维生素D对生殖功能的影响发挥作用。冬虫夏草是我国的名贵中药材,具有补肾益精功效,含有氨基酸、核苷、多糖、甾醇及甘露醇等多种活性成分。冬虫夏草具有调节雌激素分泌作用。推测其调节雌激素分泌是通过维生素D受体作用。为此,探讨冬虫夏草对大鼠卵巢组织之间的关系,揭示补肾益精方剂通过调控维生素D轴,维持和重建自然衰老大鼠卵巢功能的分子机制。为藏象理论的应用性研究提供方法学范式,为创新补肾益精中药治疗临床相关女性疾病提供新的途径。

白芨胶对皮肤皲裂大鼠血清中白细胞介素表达影响

目的:初步探讨白芨胶对皮肤皲裂大鼠血清白介素表达的影响,为白芨的临床使用提供依据。方法:在大鼠背部涂抹5mol/l氢氧化钠建立皮肤皲裂模型,给予不同药物治疗;采用ELISA法检测大鼠血清中炎性因子白细胞介素IL-6,IL-10的表达;对所得数据进行单因素方差分析。结果:白芨胶在2.5%、5%、7.5%剂量时,能够有效降低皮肤皲裂大鼠血清中炎性因子白细胞介素IL-6,IL-10的含量。结论:白芨胶在2.5%、5%、7.5%剂量时,都够有效治疗皮肤皲裂病的症状,其中5%白芨胶的效果最好。

一株具有抑菌活性的平榛内生真菌的鉴定

[目的]本研究对平榛内生真菌zs-14进行形态学及分子鉴定,并筛选其对不同供试菌株的抑菌活性。[方法]活化斜面试管保藏的内生真菌菌株zs-14,液体发酵培养3~5 d,采用液氮研磨法提取菌株zs-14的基因组DNA,应用PCR方法对内生真菌zs-14的ITS序列扩增,扩增产物经测序分析,同时结合菌落形态及乳酸-棉兰染色法的显微观察,最终鉴定内生真菌zs-14的种属;采用纸片扩散法筛选zs-14菌株的抑菌活性。[结果]zs-14菌株产生的分生孢子呈球形状,其菌落为毡毛状,菌落薄,皱缩,菌丝较致密,菌落中心呈浅绿色,最外层为白色。系统进化树结果显示其与Phoma sp聚为一类,因此鉴定内生真菌zs-14为茎点霉菌;纸片扩散法结果显示zs-14菌株发酵后只对金黄色葡萄球菌有抑制活性。[结论]平榛内生真菌zs-14具有产生抑菌活性物质的能力,研究结果可为下一步深入研究其抑菌代谢产物的种类提供科学依据。

强筋祛湿液质量标准研究

目的制定强筋祛湿液质量标准,为该药质量控制提供保障。方法采用薄层色谱法对处方中防己、延胡索、独活、何首乌、丁香、川牛膝等6味药材进行鉴别;采用高效液相色谱法测定处方中药效物质粉防己碱含量。结果薄层色谱法鉴别中,阴性对照品无干扰,与杂质斑点分离较好。高效液相色谱法测定含量中,粉防己碱浓度在0.073 8~0.246 0μg·mL^-1(r=0.999 7)范围内与峰面积呈良好的线性关系。结论该实验所建立的薄层色谱法和高效液相色谱含量测定方法简便,重复性好,专属性强,可用于强筋祛湿液质量控制。

基于网络药理学和分子对接分析薤白治疗心肌缺血再灌注损伤的作用机制

目的:基于网络药理学方法探讨薤白治疗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法:在中药系统药理学分析平台(TCMSP)上检索和筛选薤白的活性成分、作用靶点;利用OMIM数据库和CTD数据库搜集疾病靶点;找出薤白作用靶点和疾病靶点共有交集靶点,分子对接软件SYBYL验证薤白活性成分与交集靶点结合活性。然后利用String数据库和Cytoscape软件绘制靶点蛋白互作网络,利用DAVID数据库对靶点进行信号通路富集分析,利用Cytoscape软件构建薤白活性成分-靶点-信号通路网络。结果:筛选获得薤白活性成分10个,治疗疾病作用靶点19个。蛋白互作分析结果显示,17个靶点蛋白存在相互作用关系,IL6、TNF、NOS3、CCL2、VEGFA、SOD1、CAT与10个及以上蛋白存在互作关系。信号通路富集结果显示,上述靶点主要与流体剪切应力与动脉粥样硬化、过氧化物酶体、HIF-1信号通路、松弛素信号通路、细胞因子-细胞因子-受体相互作用、IL-17信号通路以及肿瘤坏死因子信号通路等23条信号通路有关。结论:薤白通过多成分、多靶点、多途径治疗心肌缺血再灌注损伤,其作用机制主要通过调控流体剪切应力、氧化应激及炎性反应来发挥作用。

淫羊藿苷对H295R细胞维生素D系统相关蛋白表达及孕酮、孕烯醇酮分泌的影响

目的:探讨淫羊藿苷对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及孕酮、孕烯醇酮相关基因表达的影响。方法:MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷和维生素D对H295R细胞增殖率的影响。ELISA法检测孕酮、孕烯醇酮分泌水平。RT-qPCR检测VDR、CYP27B、CYP24A、CYP17A1、CYP21 mRNA表达。Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:淫羊藿苷10-8 mol/L浓度,维生素D在0.25×10-11 mol/L和0.5×10-11 mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。而淫羊藿苷10-4 mol/L,维生素D在2×10-11 mol/L和4×10-11 mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与对照组比较,维生素D组与淫羊藿苷10-5 mol/L、10-6 mol/L组的VDR、CYP27B mRNA与蛋白表达明显上调,维生素D组与淫羊藿苷10-6 mol/L、10-7 mol/L组的CYP24A mRNA与蛋白表达则明显下调,维生素D组与淫羊藿苷各剂量组孕酮、孕烯醇酮分泌水平均明显下降,维生素D组与淫羊藿苷10-6 mol/L组CYP17A1、CYP21 mRNA表达均明显上调。结论:淫羊藿苷可能通过调节H295R细胞维生素D系统对孕酮、孕烯醇酮合成分泌产生影响。

黄芪多糖对LPS诱导H295R细胞损伤的维生素D系统关键酶表达及皮质酮分泌的影响

目的研究黄芪多糖对脂多糖(LPS)诱导H295R细胞损伤的维生素D系统关键酶(CYP27B、CYP24A)及皮质酮表达的影响。方法用LPS溶液建立H295R细胞损伤模型。MTT法检测不同浓度的黄芪多糖对H295R细胞增值率的影响。分组:对照组,模型组,模型+黄芪多糖低、中、高剂量组,模型+维生素D组。ELISA法检测各组皮质酮分泌水平。RT-qPCR检测各组CYP27B、CYP24A、CYP11B1 mRNA表达。Western blot法检测各组CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果黄芪多糖12.5μg/mL浓度对H295R细胞增值无显著影响,200μg/mL浓度时对H295R细胞增值存在一定抑制作用。与对照组比较,模型组皮质酮水平、CYP11B1 mRNA表达均显著上调(P<0.05),CYP27B mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05),CYP24A mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05);与模型组比较,黄芪多糖100μg/mL组和维生素D组皮质酮水平、CYP11B1 mRNA表达均显著下降(P<0.05),CYP27B mRNA和蛋白显著下调(P<0.05),CYP24A mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论黄芪多糖可改善受损H295R细胞皮质酮分泌失调,可能与调节维生素D系统关键酶CYP24A、CYP27B表达有关。

淫羊藿苷对H295R细胞睾酮分泌及VDR、CYP19A1 mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)睾酮分泌及相关基因表达的影响。方法将H295R细胞随机分为5组,即对照组,淫羊藿苷低(10-7mol/L)、中(10-6mol/L)、高(10-5mol/L)剂量组,维生素D组(10-11 mol/L)。ELISA法检测睾酮分泌水平;RT-qPCR检测VDR、CYP19A1 mRNA表达。结果与对照组比较,维生素D组与淫羊藿苷低、中、高组睾酮分泌水平均较低(P<0.05);与对照组比较,维生素D组与淫羊藿苷高、中剂量组VDR mRNA表达上调(P<0.05)。维生素D组与淫羊藿苷高剂量组CYP19A1 mRNA表达均上调(P<0.05)。结论淫羊藿苷可能通过调节H295R细胞VDR mRNA的表达对睾酮分泌产生影响。

黄芪多糖离体条件下对H295R细胞维生素D系统相关蛋白表达及睾酮分泌的影响

目的:探讨黄芪多糖对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及睾酮表达的影响。方法:随机分为空白对照组、维生素D组、黄芪多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL组,四唑盐(MTT)法检测不同浓度的黄芪多糖和维生素D对H295R细胞增殖率的影响,ELISA法检测睾酮分泌水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测维生素D受体(VDR)、25-羟基维生素D3-1α-羟化酶(CYP27B)、维生素D3-24-羟化酶(CYP24A)、17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)、19α-羟化酶(CYP19A1)mRNA表达,Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:黄芪多糖12.5μg/mL浓度,维生素D在0.25×10^-11 mol/L和0.5×10^-11 mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。黄芪多糖200μg/mL,维生素D在2×10^-11 mol/L和4×10^-11 mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与空白对照组比较,维生素D组与黄芪多糖100μg/mL组睾酮分泌水平显著升高,VDR、CYP24A、17β-HSD mRNA表达显著上调,CYP27B蛋白及mRNA、CYP19A1 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:离体条件下,黄芪多糖可能通过调节H295R细胞维生素D系统促进睾酮合成分泌。