医学生物化学教学的几点体会

生物化学是高等医学院校一门重要的医学基础课,其发展速度快,知识信息广,授课难度较大,也是学生普遍反应,难学好的一门课程[1].它主要研究生物体分子结构与功能,物质代谢与调节,以及遗传信息传递的分子基础与调控规律,从分子水平探讨生命现象的本质[2].同时,它又是生命科学中进展迅速的基础学科,其理论和技术渗透至基础医学与临床医学的各个领域[2].校园中就流传着"生化生化,深而难化"的俗语.如何在有限的学时里让学生掌握足够深度和广度的生化知识,提高学生对这门课程的兴趣及认知水平,是需要我们生化教师仔细总结和探讨的.为此,笔者就教学中的一些体会进行了讨论,恳请同行指正.……

医学生物化学教学的几点体会

生物化学是高等医科院校必修的基础课之一，知识点多不易记忆，学生历来反映难学，着重探讨如何加强医学生化课的教学，在丰富教学手段的同时，采取一定措施提高学生对生化课的兴趣和重视程度，在理解的同时增强学生记忆以及灵活运用所学知识的能力。

遵义朝天椒成分分析

[目的]分析遵义朝天椒部分成分,初步寻找其优势指标。[方法]采用经典的BCA法测定蛋白质含量,菲咯啉显色法测定维生素C含量,C-ELISA法测定辣椒素含量,有机溶剂法(GB10783-1996)测定红色素含量,高效气相色谱法测定农药残留(有机磷、有机氯、拟除虫菊酯),钼蓝比色法测定磷含量,原子荧光光度计法测定铅、硒含量,原子吸收光谱法测定锌、铁、钙含量。[结果]遵椒2号的蛋白质、维生素C、铁含量最高(P<0.05)。遵椒(1、2、3号)的锌含量均高于韩国椒(理想单生、朝天王)(P<0.05)。遵椒(1、2、3号)的辣椒素含量均低于韩国椒(理想单生、朝天王)(P<0.05)。样品农药残留均符合国标要求。[结论]遵椒2号是极具营养优势的品种;富含锌是遵义朝天椒(1、2、3号)的优势。

一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法

目的：建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离和培养的方法．方法：采用胰蛋白彰胶原酶（1：1）混合酶液消化法培养人脐静脉内皮细胞，简化完全培养液组分（不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子），当原代培养细胞80％以上汇合后用胰蛋白酶消化传代；用形态学、免疫细胞化学法进行鉴定．结果：种植在培养瓶中的内皮细胞4h贴壁生长，48～96h生长最快，7—10d汇合．内皮细胞呈单层铺路石样外观，Ⅷ因子相关抗原（Ⅷ：Ag）和内皮细胞生长因子受体2（KDR）鉴定内皮细胞纯度达95％以上．结论：用混合酶液灌注脐静脉消化内皮细胞是获取内皮细胞的一种好方法，可靠性大，成功率高，可以构建体外研究血管内皮细胞的模型．

橙皮苷与芦丁体外抗高密度脂蛋白氧化修饰的作用

目的 :探讨橙皮苷、芦丁体外抗高密度脂蛋白 (highdensitylipoprotein ,HDL)氧化的作用。方法 :采用一次性密度梯度超速离心方法分离血清HDL ,Cu2 + 诱导HDL氧化 ,检测反应体系中的丙二醛 (malondialdehyde ,MDA) ,观察橙皮苷、芦丁对HDL氧化的抑制作用。结果 :橙皮苷、芦丁对Cu2 + 诱导的HDL氧化有明显的抑制作用 ,且呈剂量依赖关系。结论 :橙皮苷、芦丁体外抗HDL的氧化作用是它们抗动脉粥样硬化的机制之一。

绞股蓝总甙对高脂诱导动脉粥样硬化大鼠炎性分子表达的影响

目的研究绞股蓝总甙(gyrenosides,GP)对高脂诱导动脉粥样硬化(AS)大鼠病变部位炎性因子表达的影响及可能机制。方法采用高脂饲料喂饲和腹腔注射维生素D3建立大鼠AS模型。60只雄性健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、GP 3个剂量组、辛伐他汀组。7周后处死大鼠,光镜下观察胸主动脉病理学改变;免疫组织化学染色法检测主动脉壁细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和核因子κB p65(NF-κB p65)的表达;ELISA法测定血清氧化型低密度脂蛋白水平(ox-LDL);比色法测定血清总抗氧化能力、硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛(MDA)水平。结果与模型组比较,GP各剂量组可减轻AS病变;下调主动脉壁ICAM-1、MCP-1和NF-κBp65的表达(P<0.01);降低血清MDA、ox-LDL水平(P<0.01),升高血清总抗氧化水平(P<0.01)。结论GP可下调ICAM-1及MCP-1的表达、抑制实验性大鼠AS病变的形成,其机制可能与其抗氧化进而抑制NF-κB的激活有关。

壬基酚对仔代脑组织AchE和ChAT活性的影响

目的:研究母体暴露壬基酚对仔鼠学习记忆及脑组织AchE和ChAT活性的影响。方法:母鼠孕9～15d灌胃壬基酚(0、50、100、200mg/kg),用Morris水迷宫法观察壬基酚对仔鼠学习记忆的影响;检测F1仔鼠垂体和海马组织乙酰胆碱脂酶(AchE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性。结果:与阴性对照组比较,NP200mg/kg组仔鼠水迷宫中逃避潜伏期延长,脑组织ChAT活性明显下降、AchE活性上升(P<0.05)。结论:壬基酚可透过胎盘屏障影响仔鼠学习记忆功能,机理可能与影响胆碱能神经系统功能有关。

黄酮类化合物抗肺癌机制的研究进展

肺癌是我国乃至世界发病率最高的恶性肿瘤,已成为人类癌症主要死亡原因之一。大多数化疗药物,无论单独还是联合,对肺癌疗效均不佳。因此,研究肺癌的机制,寻求新的化疗药物备受关注。从植物中开发抗肿瘤药物,是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。现代医学研究发现黄酮类化合物具有较强的抗肿瘤生物活性,体内外实验研究均表明黄酮类化合物对肺癌不同阶段都具有明显的抑制作用。本文综述黄酮类化合物拮抗肺癌的研究进展,并探讨黄酮类化合物抗肺癌药物发展的趋势。

野木瓜果实总皂苷体外抗肿瘤作用研究

目的研究野木瓜果实总皂苷对人肺癌细胞A549、人肝癌细胞BEL-7402和人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法将生长状态良好的A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞分为7组:阴性对照组,野木瓜果实总皂苷组(40、80、160、320、640 mg·L^(-1))组和丝裂霉素组(10 mg·L^(-1)),药物作用12、24、48 h后,MTT法测定细胞增殖抑制率。结果野木瓜果实总皂苷能显著抑制A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞的增殖,呈一定剂量和时间依赖关系,作用A549细胞12、24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为492.38、293.43、141.84 mg·L^(-1);作用BEL-7402细胞12、24、48 h的IC50分别为427.74、243.91、101.79 mg·L^(-1);作用SGC-7901细胞12、24、48 h的IC50分别为463.35、256.77、113.22 mg·L^(-1)。结论野木瓜果实总皂苷有明显抑制A549细胞、BEL-7402细胞和SGC-7901细胞体外增殖的作用,其中BEL-7402细胞对野木瓜果实总皂苷最为敏感。

金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导人脐静脉内皮细胞(hUVECs)凋亡的影响及可能机制。方法:培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;用不同浓度金雀异黄素(0.1μmol、1μmol、10μmol、50μmol)和终浓度为10μg/L的MCP-1作用24h;先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞技术检测细胞DNA含量及细胞周期,观察其对hUVECs生长的影响,流式细胞技术及Western印迹法检测凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2、Bax的表达,探讨金雀异黄素对MCP-1诱导hUVECs凋亡干预的可能机制。结果:金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,抑制效应随剂量增加而增强(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。MTT值明显增高;凋亡细胞明显少于对照组(10μg/LMCP-1),Bcl-2表达明显高于对照组,Fas、Bax表达明显低于对照组。结论:金雀异黄素能抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞的凋亡,抑制作用有量效相关性,抑制机制可能与下调Fas、Bax蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达有关。

沉默DNA依赖蛋白激酶亚基对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu DNA损伤修复功能的影响

目的探讨DNA依赖蛋白激酶亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu DNA损伤修复功能的影响。方法采用阳离子脂质体法将sh DNA-PKcs干扰质粒转染Bel-7402/5-Fu细胞,根据荧光细胞数计算转染率,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot检测DNA-PKcs的沉默效率;Western blot检测TopoⅡ、γ-H2AX蛋白表达;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法检测细胞DNA合成。结果质粒的转染效率为67%;q RT-PCR及Western blot检测结果显示,DNA-PKcs m RNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6%和71.8%;Western blot结果显示,实验组TopoⅡ蛋白表达水平比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05),γ-H2AX蛋白表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法结果显示,实验组DNA合成率比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 sh DNA-PKcs干扰质粒能下调Bel-7402/5-Fu细胞中DNA-PKcs、TopoⅡ蛋白的表达,抑制Bel-7402/5-Fu细胞DNA合成。

牛磺酸对大鼠半乳糖性白内障抗氧化作用的探讨

目的观察牛磺酸对半乳糖性白内障大鼠晶状体抗氧化能力的影响。方法将 36只大鼠分成 3组 :对照组、白内障组、牛磺酸组 ,采用d—半乳糖诱发白内障 ,牛磺酸组诱发当天开始球后注射 1 5 %牛磺酸。实验第 30天取晶状体测定谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)、总抗氧化能力 (T -AOC)、维生素E(VE)和超氧阴离子自由基。结果白内障组与对照组相比 ,GSH -Px活性、T -AOC及VE含量明显降低 ,超氧阴离子自由基水平明显升高 ,而牛磺酸组上述指标有不同程度改善。结论牛磺酸可保护晶状体免受氧化损伤 。

c-myc反义寡核苷酸抑制半乳糖性白内障晶状体上皮细胞凋亡的机制

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对半乳糖性白内障晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响。方法将Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、半乳糖组和半乳糖+c-myc ASODN组,每组36只。半乳糖组及半乳糖+c-myc ASODN组每日球后注射0.2mL20%半乳糖,制作大鼠半乳糖性白内障模型,半乳糖+c-mycASODN组球后注射半乳糖4h后加注Lipo-c-myc ASODN复合液0.2mL,隔日1次。分别于给药后7、14、24d处死动物,取出晶状体,检测LECs的凋亡情况,采用TUNEL法检测c-myc ASODN对半乳糖诱导LECs凋亡的影响,透射电镜下观察LECs超微结构的改变。结果各组在7、14、24d的LECs凋亡率比较,差异均有统计学意义(F7days=3418.495,P<0.01;F14days=1137.555,P<0.01;F24days=2198.871,P<0.01);24d时半乳糖组LECs的凋亡率为56.57±3.20,生理盐水组为0.37±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);半乳糖+c-myc ASODN组细胞凋亡率为29.35±1.63,较半乳糖组明显降低(P<0.05)。透射电镜下观察发现,半乳糖组可见LECs呈凋亡细胞的早期改变;随着高糖诱导时间的延长,凋亡细胞逐渐增多;生理盐水组几乎未见到凋亡细胞;半乳糖+c-myc ASODN组凋亡细胞数量较同期半乳糖组少。结论在白内障形成过程中半乳糖能诱导LECs凋亡,c-myc ASODN能够抑制半乳糖诱导的LECs凋亡。

MRE11沉默对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU增殖和凋亡的影响

目的:观察shMRE11对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU细胞增殖和凋亡的影响,初步探索MRE11与肝癌发生发展的关系。方法:采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;MTT法检测转染前后BEL7402/5-FU细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染法检测MRE11基因沉默对BEL7402/5-FU细胞凋亡的影响。结果:Real-time PCR及Western blot检测结果显示MRE11 mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%。MTT结果显示,shMRE11转染BEL7402/5-FU细胞后,shMRE11实验组与对照组相比细胞增殖速度减慢(P<0.05)。AnnexinV-FITC/PI双染法检测结果显示shMRE11实验组的细胞凋亡指数增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:shMRE11干扰质粒能够抑制BEL7402/5-FU细胞增殖,促进细胞凋亡。

金钗石斛对糖尿病肾病大鼠肾组织NF-κB、IL-6表达的影响

目的观察金钗石斛(DNL)水提物对糖尿病大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。方法采用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分为健康对照组、糖尿病组、金钗石斛干预1组(DNL1组)、金钗石斛干预2组(DNL2组),灌胃给药12周。分别测定血糖、血尿素氮、血肌酐、尿肌酐、24h尿蛋白,并计算肌酐清除率,蛋白质印迹法检测NF-κB、IL-6蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测IL-6mRNA的表达水平。结果与健康对照组比较,12周末糖尿病组大鼠血糖、尿素氮、24小时尿蛋白显著增高(P<0.01),肌酐清除率显著降低(P<0.01),NF-κB、IL-6蛋白表达水平与IL-6mRNA水平明显增高(P<0.05);与糖尿病组比较,DNL1组、DNL2组大鼠血糖、尿素氮、24h蛋白尿明显降低(P<0.05),肌酐清除率明显增加(P<0.05),NF-κB、IL-6蛋白表达水平与IL-6mRNA水平明显降低(P<0.05)。结论 DNL能抑制糖尿病大鼠肾组织中NF-κB的活化,进而降低IL-6的表达,对糖尿病组大鼠肾脏起到保护作用。

敲低DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)抑制Bel7402/5-Fu耐药肝癌细胞的细胞周期及机制

目的研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对Bel7402/5-氟尿嘧啶(5-Fu)肝癌耐药细胞的细胞周期及机制的影响,探讨DNA-PKcs影响化疗敏感性的相关机制。方法采用MTT法检测Bel7402/5-Fu细胞转染siDNA-PKcs后,对5-Fu、阿霉素(ADM)的敏感性;采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs寡核苷酸片段转染Bel7402/5-Fu细胞;流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测细胞P21、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞分裂周期蛋白2(CDC2)的蛋白表达情况;实时定量PCR检测细胞毛细血管扩张共济失调突变基因(ATM)、p53的mRNA水平,Western blot法检测细胞ATM、P53蛋白水平。结果敲低细胞DNA-PKcs水平后,siDNA-PKcs组5-Fu、ADM的半数抑制浓度(IC50)明显降低,S期细胞减少、G2/M期细胞增多,细胞周期抑制因子P21蛋白水平增加,cyclin B1、CDC2蛋白水平降低,ATM、p53的mRNA及蛋白水平增加。结论敲低DNA-PKcs水平,增加P21蛋白水平,同时抑制cyclin B1、CDC2蛋白水平,诱导Bel7402/5-Fu细胞G2/M期阻滞,其机制可能与ATM-p53信号途径有关。

脑瘫髋内收痉挛性内收肌组织化学和超微结构研究

目的 研究小儿脑性瘫痪痉挛性髋内收肌肌纤维分型和肌细胞超微结构损害。方法 对 16例脑性瘫痪痉挛性髋内收患儿的内收大肌用肌球蛋白 ATP酶染色方法 ,对肌纤维进行分型和超微结构观察。结果 痉挛组内收大肌 型肌纤维 (慢缩纤维 )比例70 .92 % ,比对照组 (5 7.43% )明显增高 ,并可见同型肌纤维聚集。超微结构显示肌纤维内线粒体和肌纤维结构受到损害。结论 提示 型肌纤维增多和肌纤维的超微结构损害是脑瘫痉挛性髋内收手术治疗效果不佳的原因之一 ,引起肌纤维型改变的确切原因尚需进一步研究。

均匀设计法优化水杉总黄酮提取工艺

[目的]优化水杉总黄酮的提取工艺。[方法]采用均匀设计方法,利用紫外分光光度法测定水杉中总黄酮的含量。[结果]以80%的乙醇浓度7、0℃、15倍量,每次提取15 min为最佳提取条件。[结论]试验结果可为水杉总黄酮的提取工艺的确定提供科学依据。

shRNA沉默MRE11表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FUDNA损伤修复的影响

目的:观察shMRE11沉默MRE11基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU DNA损伤修复功能的影响.方法:采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;Western blot检测细胞-H2AX蛋白表达;EdU法检测细胞DNA合成;MTT法检测细胞增殖情况.结果:Real-time PCR及Western blot检测结果显示MRE11 mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%;Western blot检测-H2AX表达结果显示shMRE11实验组(1.04±0.056)较对照组(0.847±0.025)增加(P<0.05,t=10.78);EdU检测结果显示shMRE11实验组DNA合成率(38.819%±2.607%)较对照组(49.814%±1.227%)降低(P<0.05,t=-8.87);MTT细胞增殖检测结果显示转染72 h后shMRE11实验组(0.58±0.08)与对照组(0.87±0.09)相比细胞增殖速度减慢(P<0.05,t=-50.2).结论:shMRE11干扰质粒能够有效抑制B E L7402/5-F U细胞中M R E11表达,使细胞DNA损伤修复能力减弱、抑制细胞增殖.