角色互换在医学生物化学教学中的应用

在医学生物化学的本科教学中运用师生角色互换教学方法,区别于传统教学以教师为主讲、学生被动接受的教学方法,将学生推向讲台,为主体授课人,教师为客体进行点评、分析,最后师生互动讨论总结。通过角色互换教学方法的改革,极大地调动了学生学习的主动性和积极性,有效提高了教学效果。

融合性学习模式在医学生物化学教学中的应用

融合性学习模式是根据国外教育界倡导的“Blended learning”学习模式而提出的。指对可以得到的教材、技术、媒体等教学要素进行优化选择和组合．达到预期的教学目标。即将各种学习方法、学习媒体、学习内容、学习模式根据教学对象的具体情况“融合”使用，实现最佳教学效果。实施融合性学习是一个复杂的系统工程，涉及到教学的各个环节。本文将从教学内容及教学方法两大方面出发，就如何将融合性学习模式深入到生物化学教学中提高教学质量．作一个初步探讨。

适应国家考试的生物化学教学研究

生物化学是重要的医学基础课程之一,是涉及国家医学相关考试的主考科目。为了学生能适应国家医学考试,如何开展教学,值得研究。

遵义小钝吻鮠体表黏液抗菌肽的分离纯化

【目的】从遵义小钝吻鮠(Leioxassis microcrassirostris Zunyiensis Xiao sp.nov.)体表黏液中获取高质量的抗菌肽,为提高其先天免疫能力及病害防治效果奠定基础。【方法】采用物理方法收集遵义小钝吻鮠的体表黏液,以5%乙酸进行浸提,采用Sephadex G-50和Sephadex G-25两步凝胶层析技术对抗菌粗提物进行分离纯化,结合Tricine-SDS-PAGE电泳法进行分离鉴定,并运用牛津杯法和挖孔法进行抑菌试验。【结果】遵义小钝吻鮠体表黏液经乙酸法浸提处理并冷冻干燥,其粗提物呈白色粉末,稀释液蛋白质含量为1755μg/m L;经Sephadex G-50凝胶层析分离,其纯化产物抑菌活性峰主要在峰Ⅱ和峰Ⅲ,抑菌圈直径11.66 mm;再经Sephadex G-25凝胶层析分离纯化后出现单一活性峰,其产物为分子量小于4.1 k D的抗菌肽,抑菌圈直径12.85 mm。【结论】遵义小钝吻鮠无需诱导刺激,可直接采用物理方法收集其体表黏液,以5%乙酸浸提后经Sephadex G-50和Sephadex G-25两步凝胶层析便可分离出纯度较高的抗菌肽。

黔北一新鱼种遵义小钝吻鮠线粒体DNA的分离纯化

用差速离心法和改进的碱裂解法分离纯化遵义小钝吻鮠线粒体DNA,紫外检测其OD260/OD280在1.78～1.85,并计算出该鱼肝组织线粒体DNA的含量为0.613μg/g。纯化样品经紫外分析仪在200～290 nm波长范围内扫描,呈现典型的DNA吸收峰,其最大吸收峰在259～260 nm。以λDNA/HindⅢ的完全酶切片段作为相对分子量标准,利用电泳迁移率与分子量的对数的线性关系,由已知片段大小推算出遵义小钝吻鮠mtDNA分子大小为(15.44±0.16)kb。

在医学基础课教学过程中培养学生创新能力的体会

创新能力培养的培养,是现代教学的主要任务之一,是教师教学过程义不容辞的责任,如何在课堂教学中培养学生的创新理念值得总结和思考。

遵义市社区居民不同饮食习惯与高血压的相关性分析

目的探讨遵义市社区居民高血压患病与饮食习惯的相关性。方法采用按比例概率抽样法对遵义市红花岗区的3个社区居民进行饮食习惯的问卷调查和血压测量。结果调查人群的食盐摄入量较大的比例为41.8%;每天摄入果蔬的比例为31.2%;每天摄入甜食的比例为25.8%;每天摄入奶类及奶制品的比例为33.0%;男性酒精及胆固醇摄入比例较女性高(P<0.01);女性果蔬、甜食及奶制品摄入比例较男性高(P<0.01);但男女之间食盐摄入量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论食盐摄入量越大的居民,患高血压的可能性越大(P<0.01),应倡导城市居民低盐、低胆固醇的合理健康的饮食习惯,加强饮食管理是预防高血压的重要措施。

超声辐射下O,O'-二烷基-α-取代苯基-α-苯磺酰氧基甲基膦酸酯的合成与生物活性

结合药物设计原理,对前期研究的活性结构类型进行优化.在超声辐射下,以α-羟基膦酸酯、苯磺酰氯为原料设计合成系列新型O,O'-二烷基-α-取代苯基-α-苯磺酰氧基甲基膦酸酯衍生物,考察不同溶剂、反应温度、反应时间、反应功率对产率的影响,得到最佳反应条件.该方法简便可行、时间较短、产率较高.目标物结构经1H NMR,IR,MS及元素分析确认,并研究了质谱裂解规律.初步生物活性测试表明:部分目标物对肿瘤细胞A-549有较好的抑制作用.

金钗石斛多糖对髓系白血病细胞WT1基因表达的影响

目的探讨金钗石斛多糖对髓系白血病细胞WT1基因表达的影响。方法用CCK8方法检测金钗石斛多糖在3种白血病细胞中的IC50值;3种细胞各分两组,对照组和处理组,对照组细胞保持正常生长,处理组给予金钗石斛多糖刺激。Hoechst33258染色检测两组细胞凋亡情况,用RT-PCR检测WT1表达水平,Western blot检测WT1、P53和BAX蛋白表达。结果金钗石斛多糖在3种白血病细胞中具有相近的IC50值,HL-60、WEHI-3、K562细胞的IC50分别为(110.71±6.49)、(104±48.50)、(96.66±5.10)mg/mL,3种细胞的IC50值比较,差异无统计学意义(P>0.05);处理组凋亡率高于对照组(P<0.05);与对照组比较,处理组WT1基因、蛋白表达水平降低(P<0.05),P53和BAX蛋白表达增高。结论金钗石斛多糖能明显降低WT1蛋白表达水平,且对白血病细胞有一定杀伤作用。

人白介素-12植物表达载体的构建

目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过三亲杂交法将表达载体pBI121-hIL-12分别导入根癌农杆菌EHA105和GV3101,用PCR法进行鉴定.结果双酶切及DNA序列测定证实hIL-12已插入到表达载体pBI121中,PCR扩增表明构建的重组表达载体pBI121-hIL-12成功转入根癌农杆菌EHA105和GV3101中.结论成功构建了植物表达载体pBI121-hIL-12,为进一步利用转基因植物生产hIL-12奠定了实验基础.

绞股蓝总苷对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞表型的影响

研究绞股蓝总苷对高脂诱导的大鼠血管平滑肌细胞表型的影响及可能的分子机制。采用高脂饲料喂饲建立高脂大鼠模型,观察绞股蓝总苷对血脂各成分的影响,血管平滑肌细胞超微结构及血管表型标志物表达的影响。结果显示,绞股蓝总苷能降低大鼠血脂水平并抑制血管平滑肌细胞超微结构发生去分化表型改变;增加高脂大鼠动脉分化标志蛋白SM-actin的表达,降低细胞增殖蛋白PCNA的表达。说明绞股蓝总苷能有效抑制高脂诱导的大鼠平滑肌细胞去分化,机制可能与抑制MCPIP1的表达有关。

转基因辣椒离体子叶再生研究

探讨了不同浓度植物高活性制剂LCI、AA、GA3和NAA等对遵椒1号不定芽的诱导、伸长和生根各个阶段的影响。结果表明,最佳不定芽诱导分化培养基为：MS＋LC 1.0 mg/L＋IAA 0.1 mg/L＋ABA 0.3 mg/L＋Spm 100μmol/L＋AgNO35 mg/L＋PD 6 mL/L（pH 5.8-6.0）;最佳不定芽伸长培养基为：MS＋LC 0.1 mg/L＋IAA 0.2 mg/L＋GA31.0 mg/L＋Spm 100μmol/L＋AgNO35 mg/L＋PD 6 mL/L（pH 5.8~6.0）;最佳生根培养基为：1/2MS＋IAA 1.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L（pH 5.8-6.0）。

新型绿原酸酰胺衍生物的合成与生物活性评价

目的为了改善绿原酸的溶解性、脂水分配系数等性质,设计合成系列绿原酸酰胺衍生物进行生物活性评价。方法以绿原酸为原料,先对邻二醇结构保护,再与胺发生缩合反应,然后脱保护,最后得到目标化合物。分别采用MTT法与DPPH法对目标物进行体外抗肿瘤增殖活性与抗氧化活性评价。结果合成了8个绿原酸酰胺衍生物,通过IR、NMR进行了结构确定。活性测试表明,目标物有体外对肿瘤细胞抗增殖活性,部分化合物的活性略高于绿原酸;同时目标物抗氧化活性与绿原酸相当。结论修饰后的绿原酸酰胺衍生物仍有抗肿瘤与抗氧化活性。

天麻抗真菌蛋白基因转化辣椒的研究

为获取辣椒的抗真菌种质资源,运用RT-PCR技术扩增出GAFP的cDNA序列,通过基因工程技术构建植物表达载体pBI121-GAFP,并导入遵椒1号辣椒。转化后再生的植株经PCR检测,初步证实GAFP基因已经整合到辣椒基因组中,得到了GAFP基因转化遵椒1号辣椒植株。

正安野木瓜果实的抗菌活性成分分析

为分离正安野木瓜果实中的抗菌活性组分并鉴定其中所含的抗菌物质及研究其抗菌谱,采用活性跟踪法、萃取和硅胶柱层析技术对正安野木瓜果实60%乙醇提取物进行抗菌活性组分的分离纯化。从乙醚萃取物中分离筛选得到抗菌活性组分Ⅱ②-1后,采用气相-质谱联用技术(GC-MS)鉴定组分Ⅱ②-1中的化学成分,牛津杯法研究抗菌活性组分Ⅱ②-1的抗菌谱。结果表明:从正安野木瓜果实60%乙醇提取物中分离到具有最强抗菌活性组分Ⅱ②-1,其主要成分为邻苯二甲酸二异辛酯,相对含量为95.389%。组分Ⅱ②-1对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和阴沟杆菌有显著的抗菌活性。结论,正安野木瓜果实中含有抗菌谱较广的活性化合物邻苯二甲酸二异辛酯。

紫外线照射对SD大鼠晶状体上皮细胞p53、Bax、Bcl-2表达的影响

目的探讨p53、Bax、Bcl-2基因在紫外线诱导晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)凋亡中的作用。方法 6周龄SD大鼠40只随机分为对照组和实验组,对照组不做处理,实验组腹腔注射100 g·L-1水合氯醛(0.35 mL/100 g),以波长为300~320 nm的紫外线照射眼球15 min,分别于紫外线照射后1、3、5、7 d处死并取出晶状体。Hoechst33258染色法观察LEC的形态变化,实时定量PCR及免疫组织化学检测p53、Bax、Bcl-2mRNA和蛋白在LEC中表达水平。结果紫外线照射后晶状体发生混浊,其LEC发生凋亡,细胞排列不规则、大小不一。实时定量PCR检测结果显示,与对照组相比,紫外线照射后1 d Bax mRNA表达水平升高(P<0.05),照射后3、5、7 d Bax和p53 mRNA表达水平均升高(均为P<0.01);与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达水平在照射后1 d降低(P<0.01),而照射后5 d和7 d则升高(均为P<0.01)。紫外线照射后p53与Bax mRNA相对表达水平的变化呈正相关(r=0.952,P<0.01)。免疫组织化学结果显示,紫外线照射后LEC中p53和Bax蛋白表达逐渐增强,且由细胞质向细胞核转移;相反照射后1 d Bcl-2蛋白表达降低,而3、5、7 d则逐渐增高。结论紫外线诱导LEC凋亡与p53介导Bax/Bcl-2的表达调控有关。

贵州北部鮠属(鲇形目,鲿科)的1个新种

2010年7月6日在贵州北部洛安江下游采集到土著鱼类38尾,其中,17尾经鉴定为贵州省鲿科鱼类一新种,定名为遵义小钝吻鮠（Leioxassis microcrassirostris Zunyiensis Xiao sp.nov.）。其眼较大,稍凸出,下缘约占全眼1/3眼缘游离;后鼻孔间距略小于两眼内侧间距;前鼻孔四周有近褐色圆形斑状沉淀;在胸鳍基部后缘与背鳍基部前缘中部体两侧各有一暗色斑状沉淀,稍大于前鼻孔处褐色斑状沉淀;背鳍I-6-7,胸鳍I-7-8,腹鳍6,臀鳍16,尾鳍内凹形、上下2叶等长,外缘圆钝;全长93-124mm,体长为尾柄高的8.9-11.6倍;头长为吻长的2.56-3.65倍,为眼径的4.9-6.53倍,为眼间距的1.66-2.04倍;尾柄长为尾柄高的1.56-2.11倍。

基质细胞衍生因子1预处理抑制大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

背景:研究发现基质细胞衍生因子1除参与趋化干细胞定向迁移途径,还具有抗凋亡作用。目的:观察基质细胞衍生因子1预处理后对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法:以不同浓度H2O2诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,取最适宜浓度100μmol/L用于实验。不同质量浓度基质细胞衍生因子1干预100μmol/L H2O2诱导后的大鼠骨髓间充质干细胞,选择0.2mg/L最佳保护质量浓度用于实验。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞,随机分组:正常对照组不进行任何处理;损伤组在培养液中加入H2O2作用24h;基质细胞衍生因子1预处理组于H2O2损伤细胞前6h加入基质细胞衍生因子1;基质细胞衍生因子1+AMD3100(基质细胞衍生因子1受体CXCR4的阻断剂)组于H2O2细胞损伤前6h加入基质细胞衍生因子1与AMD3100共孵。结果与结论:H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导骨髓间充质干细胞凋亡,且作用呈剂量依赖性。与损伤组比较,加入基质细胞衍生因子1预处理后细胞凋亡明显减轻(P<0.01),细胞E2F6基因表达增强(P<0.05),E2F1基因表达减少(P<0.05),线粒体细胞色素C转位减少(P<0.05),Caspase-3活性降低(P<0.05),AMD3100可阻断基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的保护作用。提示基质细胞衍生因子1可能通过增强E2F6基因,负性调控E2F1基因抑制线粒体损伤导致的骨髓间充质干细胞凋亡。

基质细胞衍生因子-1α预处理对大鼠骨髓间充质干细胞体外存活及旁分泌的影响

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)预处理对过氧化氢(H2O2)导致的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)损伤的保护作用及对其旁分泌的影响。方法体外培养MSCs随机分为:正常对照组、H2O2损伤组、0.02及0.2 mg/L SDF-1α预处理损伤组。用MTT法,Hoechst染色,Western blot及ELISA方法分别检测预处理对细胞的增殖、凋亡、细胞因子蛋白表达及旁分泌的影响。结果 H2O2损伤组与正常对照组相比,细胞释放LDH及凋亡率明显增高,细胞增殖明显减少,血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维生长因子(bFGF)在细胞中的蛋白表达及活性明显降低。SDF-1α预处理MSCs后,能明显逆转H2O2对细胞的损伤,并增加VEGF及bFGF的蛋白表达及活性。结论 SDF-1α预处理能有效减轻MSCs的损伤及凋亡,促进细胞的存活并增强细胞的旁分泌效应。

shMRE11质粒转染对BEL7402/5-FU肝癌细胞耐药性的影响

目的研究减数分裂重组蛋白11(MRE11)基因沉默对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的肝癌细胞株Bel7402/5-FU的化疗敏感性及耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响,探讨MRE11与肝癌耐药性的关系。方法采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测沉默效率;MTT法检测转染后BEL7402/5-FU细胞对化疗药物顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、5-FU的敏感性,qRT-PCR及Western blot法分别检测转染后BEL7402/5-FU细胞中耐药相关蛋白MRP1 mRNA水平及蛋白水平的变化。结果 qRT-PCR及Western blot法检测显示MRE11mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%。MTT结果显示,shMRE11转染BEL7402/5-FU细胞后,shMRE11实验组对DDP、MMC、ADM、5-FU的IC50均低于对照组(P<0.05)。qRT-PCR及Western blot法检测结果显示shMRE11实验组MRP1mRNA及蛋白水平的表达与对照组相比均有所降低(P<0.05)。结论 shMRE11能够提高肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU对化疗药物的敏感性,降低耐药相关蛋白MRP1的表达。