胎儿末端染色体非平衡易位遗传方式的CNV-seq联合G显带核型分析

目的:通过拷贝数变异检测(CNV-seq)联合G显带核型分析对产前诊断和流产的胎儿末端染色体非平衡易位发生频率以及遗传方式进行分析。方法:选取2018年6月至2021年12月在郑州大学第一附属医院经CNV-Seq判定为末端染色体非平衡易位的病例,采用外周血G显带核型分析或FISH检测对胎儿父母进行溯源分析。结果:17248例产前诊断和流产病例中,88例检出末端染色体非平衡易位,检出率为0.51%。其中59例行父母G显带核型分析或FISH检测,32例(54.24%)是由于父母为平衡易位导致,27例(45.76%)为新发变异。结论:诊断为末端染色体非平衡易位的病例,父母行G显带核型分析或FISH检测可提高染色体平衡易位携带者的检出率。

两个JAG1基因突变相关的双侧多囊性发育不良肾胎儿家系的遗传学分析

目的:探讨两个双侧多囊性发育不良肾(MCDK)家系的遗传学病因,为两个家系的遗传咨询及再次妊娠指导提供依据。方法:对两个16+周和18+周胎儿行详细超声检查,发现其双侧肾脏呈多囊性发育不良改变,经遗传咨询后胎儿父母决定终止妊娠。取胎儿皮肤进行全外显子组测序,并取父母外周血,采用PCR和Sanger测序验证基因突变位点。结果:全外显子组测序提示家系1胎儿携带JAG1基因c.2078_2079delGT(p.Cys693fs)杂合突变,该突变来自母亲;家系2胎儿携带c.3548_3552delAGAAG(p.Glu1183fs)杂合突变,该突变来源于母亲。结合超声表现及家族史等,这两个双侧MCDK家系的病因为JAG1基因突变相关的Alagille综合征。结论:两个双侧MCDK家系最终确诊为Alagille综合征。

遗传性耳聋家系的产前诊断及遗传咨询

目的对有明确耳聋致病基因的常染色体隐性耳聋家庭再次生育时行产前诊断,并给予相应的临床咨询,降低生育风险。方法在知情同意的原则下,通过超声引导下行介入性穿刺,对获取的胎儿标本DNA应用STR位点检测以排除母体基因组的污染,并采用Taqman探针法结合Sanger测序进行相关耳聋基因检测。结果对59个家系胎儿进行相关基因(GJB2、SLC26A4)检测,16个家系的胎儿为与先证者一致的患儿,25个家系的胎儿为携带父母一方致病突变的携带者,18个家系的胎儿为无致病突变携带的正常胎儿。出生后听力评估、基因诊断结果与产前诊断结果相符。结论本研究中GJB2基因最常见的致病突变为c.235delC,其次为c.299-300delAT。SLC26A4基因最常见致病突变为IVS7-2A>G,其次为c.2168A>G(p.H723R)。应用一代测序技术进行耳聋基因产前诊断,能准确诊断胎儿耳聋基因型,有效降低遗传性耳聋患儿的出生率。

无创产前检测技术在胎儿脉络丛囊肿筛查染色体异常的应用

目的探讨无创产前检测技术(NIPT)应用于胎儿脉络丛囊肿(CPC)筛查染色体异常的临床价值。方法回顾性分析因胎儿CPC或CPC合并其他超声软指标异常孕妇选择NIPT的临床资料,总结NIPT的检出率、阳性预测值等指标。结果608例胎儿CPC或CPC合并其他超声软指标异常孕妇中,16例胎儿为高风险,检出率为2.6%(16/608),9例为染色体非整倍体,7例为染色体拷贝数变异(CNV)。15例孕妇选择了浸入性产前诊断,确诊8例,阳性预测值(PPV)为53.3%(8/15)。≥35岁和<35岁的胎儿CPC检出率差异无统计学意义(χ^(2)=0.000,P=1.000)。iCPC和cCPC的检出率差异有统计学意义(χ^(2)=8.988,P=0.003)。双侧、左侧和右侧胎儿CPC的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论CPC与胎儿染色体异常存在相关性。NIPT可应用于超声提示胎儿CPC孕妇的可选筛查技术,且筛查准确性较高,避免侵入性检查,有助于提高产前诊断的检出率,降低产前诊断压力。

1例伴局灶节段性肾小球硬化的MELAS综合征家系的遗传学分析

目的 对1例伴局性节段性肾小球硬化(FSGS)的线粒体脑肌病、乳酸酸中毒和卒中样发作(MELAS)综合征家系进行遗传学病因分析。方法 先证者,女,36岁,表现为典型的MELAS综合征伴FSGS。先证者女儿表现为癫痫发作,经临床分析考虑线粒体病的可能。应用高通量测序技术对先证者进行致病基因变异检测,利用Sanger测序对先证者及其家系成员进行验证。结果 先证者线粒体DNA检测到m.3243A>G突变,其女儿携带同样突变,但先证者母亲未检测到该突变。结论 本研究认为m.3243A>G突变是先证者MELAS表现及FSGS的分子病因,也是其女儿癫痫发作的病因。

河南省育龄人群中4种常见遗传代谢病孕前携带者筛查

目的:探讨河南省育龄人群中4种常见遗传代谢病(高苯丙氨酸血症、肝豆状核变性、甲基丙二酸血症、眼皮肤白化病)携带者筛查的价值。方法:采集2022年7月至12月参加河南省孕前优生健康检查项目的612对(1224人)育龄夫妇的外周血,采用高通量测序技术检测7个基因(PAH、PTPS、MUT、MMACHC、ATP7B、TYR、OCA2)外显子区及剪切区系列变异。结果:致病基因总体携带率为8.74%(107/1224),PAH、PTPS、ATP7B、MMACHC、MUT、TYR及OCA2基因携带率分别为2.53%、0.33%、2.04%、1.72%、0.74%、1.63%和0.16%;河南省北方地区总携带率(3.35%)最高。PAH基因致病变异检出19种,其中c.721C>T携带率(0.41%)最高。PTPS基因致病变异检出2种,携带率均为0.16%。ATP7B基因致病变异检出9种,其中c.2333G>T携带率(0.49%)最高。MMACHC基因致病变异检出10种,其中c.609G>A携带率(0.41%)最高。MUT致病变异检出6种,其中c.1663G>A携带率(0.33%)最高。TYR基因致病变异检出9种,其中c.929_930insC携带率(0.57%)最高。OCA2基因仅检出1种变异,c.1182+1G>A,携带率为0.16%。根据Hardy-Weinberg定律计算,河南省育龄夫妇该4种遗传代谢病总体患病率约为1/2018。结论:初步明确了4种遗传代谢病在河南省育龄人群中的携带率及患病率,为出生缺陷防控的一级预防提供了参考。

HPRT1基因变异致Lesch-Nyhan综合征的产前诊断及遗传咨询

目的:通过对HPRT1基因的点突变研究,对1个Lesch-Nyhan综合征家系进行产前诊断和遗传咨询。方法:患者已生育的大儿为HPRT1基因(NM_000194)c.289_290delGT(p.V97Rfs*10)半合子变异导致的Lesch-Nyhan综合征(先证者),生育的小儿症状与大儿相似,已夭折(未行HPRT1基因检测)。第3次自然妊娠前未做孕前遗传咨询,在知情同意的原则下,应用聚合酶链反应结合Sanger测序的方法进行家系HPRT1基因点突变研究,并提供遗传咨询意见。结果:先证者检测到HPRT1基因(NM_000194)c.289_290delGT(p.V97Rfs*10)半合子变异。患者检测到HPRT1基因(NM_000194)c.289_290delGT(p.V97Rfs*10)杂合变异。胎儿未检测到HPRT1基因(NM_000194)c.289_290delGT(p.V97Rfs*10)变异,建议患者继续妊娠,最终产下健康女婴且1岁时体检正常。结论:先证者HPRT1基因变异位点遗传自母亲,临床应重视先证者家系成员的基因检测和产前诊断,并给予完善的遗传咨询意见,避免Lesch-Nyhan综合征等罕见遗传性疾病患儿的出生。

超声诊断联合扩展性无创产前检测在孕期胎儿染色体疾病筛查中的应用

目的探讨超声诊断联合扩展性无创产前检测(expanded noninvasive prenatal testing,NIPTplus)在孕期胎儿染色体疾病筛查中的应用。方法回顾性分析2018年9月至2019年10月因超声提示胎儿结构及软指标异常于我中心行NIPT-plus的1 487例孕妇的筛查结果、产前诊断结果以及妊娠结局。结果 NIPT-plus筛查的1 487例孕妇中,85例孕妇的结果为高风险(5.72%,85/1 487)。73例高风险孕妇行侵入性产前诊断,确诊36例(49.32%,36/73)。NIPT-plus对21、18和13-三体综合征的PPVs分别为95%、100%和100%,DGS、SCA、MMS和罕见单体/三体的NIPT-plus PPVs分别为40.00%、33.33%、23.81%和0%。NIPT-plus对不同超声结构异常或软指标阳性的PPVs存在差异,其中鼻异常、囊性肿瘤、NT增厚、肠管回声增强和心脏发育等其他异常的PPVs高。结论 NIPT-plus对不同染色体疾病的PPVs存在差异。NIPTplus对不同超声结构异常或软指标阳性筛查的检出率和PPVs也存在差异,NIPT-plus可以作为胎儿超声异常孕妇的产前筛查备选技术。

血管紧张素转化酶基因突变相关的羊水过少胎儿一例遗传学分析

目的:明确一例羊水过少胎儿的遗传学病因。方法:妊娠22^(+2)周对胎儿行超声检查发现羊水指数30 mm并双肾回声稍增,予以低分子量肝素和羊膜腔灌注4周余,胎儿羊水指数未改善。妊娠26^(+6)周超声检查示羊水指数43 mm并双肾回声增强,胎儿父母要求终止妊娠。取引产后的胎儿皮肤及父母外周血行全外显子组测序。结果:全外显子组测序和Sanger测序显示父母携带ACE基因c.1028G>A(p.Trp343X)杂合突变。胎儿携带血管紧张素转化酶(ACE)基因c.1028G>A(p.Trp343X)纯合突变,该突变来源于正常表型的父母。结论:特发性羊水过少可能与ACE基因突变相关的肾小管发育不良有关。

低深度全基因组拷贝数变异测序产前诊断发现DMD基因变异胎儿的遗传学分析

目的探讨低深度全基因组拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq)在产前诊断中发现的无遗传病家族史胎儿DMD基因变异及家系检测结果,探索CNV-seq在DMD基因变异检测中的意义和结果解读。方法回顾性收集2019年12月至2023年8月就诊于郑州大学第一附属医院经低深度全基因组CNV-seq检测出的16例胎儿DMD基因缺失或重复的病例资料。16例抽取羊水或绒毛样本及家系成员外周血,提取基因组DNA。在应用CNV-seq技术检测胎儿染色体拷贝数变异情况同时通过多重连接探针扩增(multiplex ligation dependent probe amplification,MLPA)技术验证DMD基因缺失或重复情况,并经家系验证追溯变异来源。参考在线人类孟德尔遗传数据库等数据库以及家系验证结果分析DMD基因缺失或重复片段的致病性。结果16例均否认单基因遗传病家族史,CNV-seq产前诊断指征分别为唐氏综合征筛查高风险9例、高龄2例、胎儿超声检查异常3例、无创DNA产前检测提示X染色体异常2例。CNV-seq结果提示9例胎儿为DMD基因重复变异,7例为DMD基因缺失变异;通过MLPA方法验证,结果与CNV-seq结果一致。经家系分析,其中3例为新发变异,12例遗传自母亲,1例母亲外周血检测正常,但有一携带相同变异的姐姐,推测母亲为生殖腺嵌合体的可能性大。7例缺失变异为致病性变异的可能性大;9例为重复变异,其中4例变异位于DMD基因内部,可能导致DMD基因被打断,从而导致疾病的发生,另5例变异位于DMD基因5’端非编码区或3’端非编码区,为良性变异。结论低深度全基因组CNV-seq可检测出无DMD家族史胎儿DMD基因大片段缺失重复变异,避免新发变异患儿的出生。但对于检测出DMD基因大片段重复变异的胎儿应根据家系验证结果评估其致病性;重复区域包含DMD基因5’端非编码区或3’端非编码区时,为多态性变异的可能性大。

单亲二体相关印记疾病的产前诊断与遗传咨询专家共识

单亲二体(UPD)相关印记疾病是一组由于UPD发生在基因组印记区域,造成印记基因表达紊乱所引起的疾病,可能导致严重的出生缺陷。随着遗传学诊断技术在产前诊断领域的广泛应用,许多机构已开展了UPD相关印记疾病的产前诊断,但由于疾病发生机制复杂,临床医师对于相关疾病的产前表现与临床处理缺乏了解,对其遗传咨询缺乏标准和规范。鉴于此,本学组会同国内产前诊断和医学遗传学专家,参考国内外相关指南与共识,查阅最新的研究进展,就UPD相关印记疾病的产前诊断与遗传咨询达成以下共识,供临床参考使用。

SNP array在颈项透明层增厚胎儿产前诊断中的应用

目的探讨单核苷酸多态性微阵列技术(SNP array)在颈项透明层(NT)增厚胎儿产前诊断中的应用。方法选取孕11~13+6周NT厚度超过2.5 mm并全部接受SNP array与多重定量荧光聚合酶链反应(QFPCR)检测的胎儿433例。根据NT厚度分为4个组(A组2.5~3.4 mm、B组3.5~4.4 mm、C组4.5~5.5 mm、D组≥5.5 mm),根据是否合并其他超声异常进一步分为单纯性NT增厚组和合并其他超声异常组。结果 QFPCR共检出染色体数目异常49例(11.32%),除1例嵌合体外,检出了SNParray检出的所有数目异常。SNP array染色体数目异常检出率为11.55%,A^D组分别为4.64%、11.36%、26.42%、22.2%;致病性拷贝数变异(pCNV)异常检出率为3.46%(15/433),A^D组分别为1.0%、4.5%、3.8%、9.3%。单纯性NT增厚组染色体数目异常率、pCNV异常率分别为9.91%、2.14%,合并其他超声异常组分别为21.67%和11.67%。存在pCNV与仅有非pCNV孕妇无年龄差别。结论 NT厚度及是否合并其他超声异常对染色体数目异常及pCNV均有影响,宜采用NT厚度3.5 mm为截断值。应联合多重QF-PCR与SNP array对孕早期NT增厚胎儿进行快速、准确的产前诊断。

高通量测序背景下的单基因遗传病分子诊断进展

单基因遗传病(monogenic disease)指由单个或单对等位基因突变导致的疾病,一般遵循孟德尔遗传规律,传统的单基因遗传病诊断通常依赖于系谱分析、生化、影像等手段。近年来,分子诊断技术特别是高通量测序技术已经成为单基因遗传病的主要诊断手段,对单基因遗传病的明确诊断、预防和指导治疗发挥着越来越重要的作用。本文对40多年来单基因遗传病分子诊断技术的发展进行回顾,介绍其最新进展,并展望其在单基因遗传病未来的研究进展。

三引物PCR技术在强直性肌营养不良1型患者基因检测及产前诊断中的应用

目的探讨三引物PCR(TP-PCR)技术在强直性肌营养不良症1型(DM1)患者分子检测和产前诊断中的应用价值。方法选取2018年5月至2022年10月在郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心接受基因检测的48个DM1家系共60人作为研究对象。应用TP-PCR结合毛细管电泳的方法对受试者进行DMPK基因CTG重复数的检测,并对4个确诊家系进行产前诊断。本研究通过郑州大学第一附属医院医学伦理委员会的审查(伦理号:KS-2018-KY-36)。结果共检出52例DM1患者,多以肌无力、肌萎缩和肌强直为首发症状,并伴有肌强直样放电;部分患者合并有其他系统的异常。患者的DMPK基因CTG异常扩增数>50次,正常等位基因CTG重复数范围为5~18次,检出率最高的等位基因重复次数为6次(30.77%,16/52)。接受产前诊断的4个DM1家系中,1例胎儿未见异常,3例胎儿检测到CTG异常扩增(>50次),并被诊断为DM1患者。结论TP-PCR可快速准确诊断DM1患者,但当CTG异常扩增数高于50次时,该方法无法准确检出重复次数。

全孕期心理管理对伴异常情绪的不良孕产史孕妇心理状况及妊娠结局的影响

目的分析全孕期心理管理对伴异常情绪的不良孕产史孕妇心理状况及妊娠结局的影响。方法选取2020年1月至2023年1月郑州大学第一附属医院收治的100例不良孕产史孕妇,随机分为试验组和参照组,各50例。参照组接受常规干预,试验组在参照组基础上接受全孕期心理管理。对比两组心理状态[抑郁自评量表(SDS)、焦虑自评量表(SAS)]、一般自我效能感量表(GSES)、生活质量指数量表(QLI)评分、胎儿不良结局、孕妇不良结局。结果干预后,试验组SDS评分、SAS评分较参照组低,GSES、QLI评分评分较参照组高(P<0.05);胎儿、孕妇不良结局发生率较参照组低(P<0.05)。结论对异常情绪的不良孕产史孕妇实施全孕期心理管理可减轻负性情绪,提高自我效能,减少不良妊娠。

1例肾脏发育不全或缺如3型胎儿产前超声表型及遗传学分析

目的分析1例GREB1L基因突变所致肾脏发育不全或缺如(RHDA)3型胎儿的产前超声表型和遗传学特征。方法2023年2月6日郑州大学第一附属医院诊治1例因产前超声异常行妊娠期遗传咨询的25岁孕妇,收集引产胎儿皮肤组织及夫妇双方外周静脉血,进行全外显子组测序,应用HGMD、ClinVar、ExAC、1000Genomes和gnomAD等数据库对基因突变位点进行检索;参照《遗传变异分类标准与指南》及美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)指南进行突变致病性评级;应用Uniprot数据库预测该基因编码蛋白质结构。收集夫妇双方及胎儿临床资料,分析胎儿产前超声表型和遗传学特征。结果孕妇经遗传咨询后引产1男胎。产前超声提示胎儿颈背部皱褶厚度增厚,双肾缺如,无膀胱和羊水,胃泡体积小和少量心包积液。胎儿携带GREB1L基因c.5429_5442dupGGCC(p.Ile1815fs)移码突变,父母均未携带该突变,属于新发突变,该突变未见文献报道,HGMD和ClinVar数据库未见收录。该突变导致氨基酸编码异常,引起蛋白质功能改变(PVS1);在ExAC、1000Genomes和gnomAD数据库均未发现(PM2_Supporting);为经双亲验证的新发突变(PS2);初步判定为致病性突变(PVS1+PM2_Supporting+PS2)。结论GREB1L基因c.5429_5442dupGGCC移码突变为新发突变,是导致该家系胎儿RHDA3型的遗传学病因,产前超声主要表现为双肾缺如。

不同注射条件下AAV9载体对小鼠肌肉的短期转导效果

目的观察不同注射方式和注射剂量下腺相关病毒9型(AAV9)载体对小鼠肌肉的短期转导效果,初步寻找治疗杜氏肌营养不良症(DMD)安全有效的基因转导方式。方法使用AAV9包装携带荧光素酶报告基因的质粒构建AAV9-Luc病毒载体,经尾静脉注射和肌肉注射两种方式,分别向雌性BALB/c小鼠体内注射不同剂量的AAV9-Luc,3 d后于生物荧光成像仪下观察小鼠体内荧光表达情况,进而分析病毒在小鼠体内的分布情况。结果经尾静脉注射时,病毒在小鼠体内分布较为均匀广泛;而经肌肉注射时,除在注射部位有表达外,其他肌肉组织也有少量表达,但注射部位表达强度最高。此外,病毒在体内的分布随剂量增高而愈广泛,表达也随剂量增高而愈强烈。当肌肉注射剂量为1.26×10^(13)μg/kg时,病毒仅在注射部位附近及四肢、膈肌等肌肉组织中有表达,其他脏器表达不明显。结论在AAV9载体介导基因治疗DMD的技术中,低剂量(1.70×10^(11)μg/只,1.26×10^(13)μg/kg)肌肉注射是较为合适的转导方式。

染色体微阵列分析在无创产前筛查非整倍体高风险中的应用价值

目的:探讨染色体微阵列分析(CMA)技术在无创产前筛查(NIPT)提示非整倍体高风险胎儿的产前诊断中的应用价值。方法:241例NIPT提示胎儿染色体非整倍体高风险的孕妇,经羊膜腔或绒毛穿刺获取胎儿细胞,进行CMA分析。对于NIPT提示21-三体和性染色体非整倍体高风险的孕妇根据筛查原因(高龄筛查组、唐筛异常或超声软指标异常组、非高龄筛查组)进行组间NIPT阳性预测值的比较,并对CMA检测提示有染色体拷贝数变异(CNV)的病例进行致病性分析。结果:NIPT对于染色体非整倍体总的阳性预测值为76.3%。NIPT对于21-三体、18-三体、13-三体和性染色体非整倍体的阳性预测值分别为95.0%、88.8%、75.0%和53.3%。经CMA分析确认,在101例NIPT提示21-三体高风险病例中,以高龄筛查组阳性预测值最高(100.0%),3组间比较,差异有统计学意义(P=0.001)。在90例NIPT提示性染色体非整倍体高风险病例中,仍以高龄筛查组阳性预测值最高(61.9%),3组间比较,差异有统计学意义(P=0.002)。12例NIPT提示染色体非整倍体高风险经CMA检测存在CNV。结论:对于21-三体和性染色体非整倍体,不同人群中高龄组的NIPT阳性预测值最为显著,临床上对于此类人群,更要引起足够的重视,做好跟踪随访。CMA较传统的染色体核型分析能额外检出CNV,更能提高染色体结构异常的检出率。

PAH基因深度内含子杂合突变致苯丙酮尿症2家系基因检测和产前诊断

目的 对2个携带单一杂合致病突变的苯丙酮尿症(PKU)家系进行全外显子组测序,探讨PAH基因突变情况,并进行产前诊断。方法 2023年3月郑州大学第一附属医院行基因检测与产前诊断的2个PKU家系。家系1先证者,男,7岁,出生后发育迟缓,新生儿期严重黄疸,脑部CT检查示脑白质脱髓鞘,血清苯丙氨酸水平增高,外院基因检测发现PAH基因c.1068C>A(p.Y356X)单杂合突变。家系2先证者,女,8岁,出生后新生儿筛查为PKU,外院基因检测发现PAH基因c.611A>G(p.Y204C)单杂合突变。采集2个家系先证者及其父母外周静脉血,母亲再次妊娠后于18周行羊膜腔穿刺术抽取羊水,提取DNA行全外显子组测序。在PubMed数据库检索相关文献,将新发现的致病突变位点区域纳入目标区域,采用叠瓦式多层探针设计方案进行探针设计和捕获测序。选择人类基因组参考序列GRCh37,对全外显子组测序结果注释分析,筛选得到候选致病突变位点。利用dbSNP数据库检索候选位点突变的数据库收录和致病性,通过基因组整合数据库gnomAD查询该突变的人群频率。依据美国医学遗传学与基因组学学会遗传突变分类标准与指南,对突变进行致病性分级和判定。采用PCR扩增和Sanger测序方法验证先证者父母候选突变位点携带情况,并对胎儿进行产前诊断。结果 (1)家系1先证者为PAH基因c.1068C>A(p.Y356X)和c.1065+241C>A复合杂合突变,家系2先证者为PAH基因c.611A>G(p.Y204C)和c.1065+241C>A复合杂合突变。(2)PAH基因c.611A>G(p.Y204C)和c.1068C>A(p.Y356X)均是PKU的致病热点突变。PAH基因c.1065+241C>A位点在dbSNP数据库中无记录,不属于多态性位点,人群发生频率极低,gnomAD数据库未查询到该突变在人群中的发生频率。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传突变分类标准与指南,PAH基因c.1065+241C>A判定为致病性突变(Pathogenic, PM3_Very Strong, PP4_Moderate, PM2_Supporting)。(3)2个家系先证者Sanger验证结果与全外显子组测序结果一致,其父母均为相关致病突变基因的携带者;家系1胎儿为PAH基因c.1065+241C>A杂合突变携带者,家系2胎儿为PAH基因c.611A>G(p.Y204C)杂合突变携带者。结论 针对目标区域进行多层探针设计,根据文献及时更新全外显子组测序的目的区域,有助于全外显子组测序检出PAH基因深度内含子区致病突变。

苯丙酮尿症43个家系的 PAH基因变异分析及产前诊断

目的:探讨43个苯丙酮尿症(PKU)家系苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因的变异特点及其产前诊断方法。方法:选择2019年至2021年郑州大学第一附属医院确诊的43个PKU家系作为研究对象,通过高通量测序对其先证者进行PAH基因的变异筛查,并用Sanger测序法对候选变异进行家系验证。对未明确变异的先证者用多重连接探针扩增(MLPA)技术检测PAH基因的大片段缺失或重复。对风险妊娠联合使用Sanger测序、MLPA和多态性连锁分析进行产前诊断。结果:43例先证者的86个等位基因经检测共发现了78个变异和3个大片段缺失,检出率分别为90.70%和3.49%。共检出21种错义变异、5种剪接变异、4种无义变异、2种微小缺失、1种插入和2种大片段缺失。常见的变异包括p.Arg243Gln(23.26%)、p.Arg111Ter(8.14%)、EX6-96A>G(6.98%)、p.Val399Val(5.81%)和p.Arg413Pro(4.65%)。变异热点包括第7、11、3、6和12外显子。产前诊断在43个家系中共确诊PKU受累胎儿9例(20.45%)、杂合变异携带者20例(45.45%)、未携带相同变异者15例(34.09%)。胎儿出生后随访至6个月,产前诊断的准确率为100%。结论:联合高通量测序、Sanger测序、MLPA和多态性连锁性分析可以提高PKU患者的诊断率,并准确进行产前诊断。