基于LAMP技术检测纯芝麻酱中的多种植物源性成分

环介导恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种较为新型的恒温DNA扩增技术,有着灵敏度高、特异性好、方便快捷的优点。通过设计特异性引物,建立了一套利用LAMP技术检测芝麻酱中芝麻、花生、葵花籽源性成分的方法,该方法特异性好,能够在60min以内检测低至0.1%的农作物混合物中芝麻、花生、葵花籽源性成分,具有较高的灵敏度。应用试验建立的方法,结合大豆、玉米、水稻内源性基因检测试剂盒对市场流通环节41份标识为纯芝麻酱的样本进行检测分析,结果显示其中18份检出花生成分,2份检出大豆成分,1份检出葵花籽成分,所有样品均未检出水稻、玉米成分。

基于特征肽段的液相色谱质谱联用技术对核桃、杏仁露进行掺假鉴别

建立液相色谱串联质谱法测定核桃、杏仁、大豆和花生中的蛋白成分,并定量检测核桃露和杏仁露中常见外源成分大豆和花生的含量。样品经蛋白质提取,胰蛋白酶酶解后,采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(high performance liquid chromatography coupled with quadrupole-exactive mass spectrometry,HPLC-Q-Exactive-MS)检测,数据经Proteome Discoverer软件与Uniprot蛋白数据库对比分析,筛选出各物种的特征肽段,然后利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(high performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole tandem mass spectrometry,HPLC-QQQ-MS)对核桃、杏仁、大豆和花生的特征多肽进行验证和多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)定量测定。经验证,鉴别方法有良好的专属性和高灵敏度,核桃露和杏仁露中核桃、杏仁、大豆和花生的最低检出限分别为16.3、7.7、1.3和6.8 mg/kg。该方法准确、灵敏,可有效分析植物蛋白饮料中各类蛋白质的来源,对食品植物源性成分的鉴定具有重要意义。

基于重组酶介导扩增技术诊断鸭瘟方法的建立

以具有种属特异性的鸭瘟病毒gC基因为靶基因,设计引物和荧光标记探针,使用重组酶介导扩增方法(Recombinase aid amplification assay,RAA),39℃恒温扩增,建立了检测鸭瘟病毒的普通和荧光RAA方法。该方法具有良好特异性,仅对鸭瘟病毒检测结果为阳性,而与番鸭细小病毒、小鹅瘟病毒、禽传染性喉气管炎病毒、马立克氏病毒、鸭源沙门菌、鸭源大肠杆菌O157无交叉反应。普通和荧光RAA方法的灵敏度分别为100 copies/μL和10 copies/μL,对28份留存的鸭瘟阳性组织样本和84份疑似鸭瘟临床样品检测结果表明建立的方法与商业化PCR试剂盒的符合率为100%。结果表明,RAA方法实现常温扩增、操作简单、费用低廉、无需热循环过程,是一项具有广泛前景的方法。

粮食及其制品中真菌毒素检测技术与风险法分析

粮食是人类赖以生存的物质基础,是一个民族发展的根本,而真菌毒素在全球范围内广泛存在,严重危害人类健康和粮食安全。据联合国粮农组织调查,全球每年约有25%的粮食会受到真菌毒素的污染,特别是小麦、花生、玉米、大米等主要的粮食作物。长期食用被污染的粮食会严重危害人体健康,在当前全球粮食供应短缺的背景下,这无疑使世界粮食安全状况更加恶化。因此,对粮食及其制品中的真菌毒素尤其是那些具有致癌性、致畸性和致突变性的高毒性物质进行监控,是粮食安全管理部门的当务之急。

纺织品中致敏物质及其相关检验技术

介绍了纺织品中常见致敏物质的来源和致敏途径,包括致敏染料、助剂残留、花粉过敏和螨虫过敏,并对致敏物质国内外检测方法进行分析与比较,为生产企业和检验机构对纺织品中致敏物质的质量控制和检测提供参考。

节节麦对甲基二磺隆的抗性水平及其靶标基因突变分析

采用室内整株生物测定法测定了采自河南省不同地区的28个节节麦种群对甲基二磺隆的抗性水平,同时对高抗和敏感节节麦种群的靶标乙酰乳酸合成酶(ALS)基因已报道的突变位点进行对比分析,为节节麦的化学防除提供理论依据。结果表明,低抗、中抗、高抗甲基二磺隆的节节麦种群分别有15个[2≤RI(相对抗性倍数)<5]、7个(5≤RI≤10)、3个(RI>10)。其中,对甲基二磺隆抗性最高的种群是TXLZ(采自通许县厉庄乡),抑制中剂量(ED_(50))为126.11 g/hm^(2),RI为31.85。对3个高抗和1个敏感种群的靶标ALS基因已报道的突变位点进行对比分析,并未发现突变。综上,河南省大部分地区的节节麦种群对甲基二磺隆产生了抗性,节节麦产生抗性的原因并不是由靶标基因位点突变引起的,可能是由代谢作用等引起的非靶标抗性。

高效液相色谱法同时测定饲料中阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂和卡巴胂的含量

胂是砷化氢分子中的氢原子部分或全部被羟基取代而成的衍生物。有机胂类饲料添加剂可以刺激畜禽动物生长,改善畜禽肉质,且具有广谱的抗菌性[1-7]。有机胂类药物虽然比无机砷毒性小很多,但由于不合理的使用,在畜禽产品中的蓄积作用会间接对人类健康造成影响[8-12]。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定畜禽肉中5种砷形态的含量

提出了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定畜禽肉中三价砷[As(Ⅲ)]、五价砷[As(Ⅴ)]、二甲基砷(DMA)、一甲基砷(MMA)、砷甜菜碱(AsB)等5种砷形态含量的方法。取样品1.000 g,加入10 mL含1%(体积分数)硝酸的10%(体积分数)甲醇溶液(提取剂),于60℃超声提取2.0 h。冷却,离心,分取5 mL上清液,加入5 mL正己烷,振摇1 min,离心10 min,弃去上层正己烷相,再加入5 mL正己烷重复上述步骤1次。吸取下层清液,过0.45μm有机滤膜。以Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,以含5 mmol·L^(-1)己烷磺酸钠的20 mmol·L^(-1)柠檬酸溶液(pH 4.3)为流动相进行等度洗脱滤液中的目标物。结果表明:5种砷形态标准曲线的线性范围均为2~50μg·L^(-1),检出限(3S/N)为0.1~0.2μg·L^(-1);对实际样品进行3个浓度水平的加标回收试验,5种砷形态的回收率为81.5%~101%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.3%~3.6%。方法用于10份实际样品分析,其中As(Ⅲ)、DMA和AsB的检出率较高,肝脏、肾脏中的砷形态检出量高于肌肉中的,但均远低于GB 2762—2017对肉及肉制品中总砷的限量(0.5 mg·kg^(-1))要求。

烘烤对水酶法提取花生油品质及乳状液稳定性的影响

为提高水酶法提取花生油效率,对花生进行烘烤预处理,研究了烘烤预处理对水酶法提取的花生含油乳状层得率、花生油品质及乳状液稳定性的影响。结果表明:随着烘烤温度的升高,水酶法提取得到的花生含油乳状层得率呈先升高后下降的趋势,烘烤温度为90℃时,含油乳状层得率最高,达到48.15%;渣中残油率随着烘烤温度的升高呈先下降后上升的趋势,烘烤温度为90℃时,渣中残油率最低,为9.87%。90℃和60℃烘烤水酶法提取的花生油各项质量指标、脂肪酸组成及含量、各类VE含量均没有显著性差异。通过对乳状液粒径和Zeta电位测定及微观结构观察发现,90℃烘烤得到的含油乳状层较60℃烘烤预处理的更易于破乳。

花生致敏蛋白Ara h 1双抗体夹心ELISA法的建立

为建立用于花生致敏蛋白Ara h 1快速、灵敏、特异检测的双抗体夹心ELISA法,以Ara h 1鼠源单抗(mAb)为捕获抗体,以Ara h 1兔源多抗(pAb)为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度建立方法,并对方法的灵敏度、特异性、准确度、稳定性等检测特性进行鉴定。结果表明,双抗体夹心ELISA法的mAb和pAb最佳工作浓度分别为1∶10000稀释和1∶8000稀释;ELISA标准曲线线性范围为4~256 ng/mL,检测限为4.16 ng/mL;样品添加回收试验的平均回收率为85.9%~94.5%,且该方法与其他常见致敏蛋白无交叉反应;并能在4℃条件下避光密封保存90 d内保持检测结果稳定。说明所建立的双抗体夹心ELISA法灵敏特异、准确稳定,能够用于花生致敏蛋白Ara h 1的快速筛查。

非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及临床应用

为建立非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR方法,以非洲猪瘟病毒P72蛋白编码基因为靶基因设计引物和探针,利用正交试验方法优化反应体系及扩增程序,建立了非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR方法,并对其敏感性、特异性及稳定性进行评估。结果显示:建立的方法最低检出限为0.58 copies/μL,与荧光PCR方法相比更敏感;本方法与布鲁氏菌、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒无交叉反应;对10倍稀释的标准物质检测10次,变异系数为8.44%,重复性好。利用建立的方法对100份临床样品进行检测,结果均为阴性,与荧光PCR检测结果一致;对5份实验室间比对样品进行检测,检测出阳性样品4份,阴性样品1份,与实验室间比对给定的样品盘结果一致。结果表明,本研究建立的微滴式数字PCR方法的敏感性、特异性和稳定性符合要求,适于非洲猪瘟病毒临床检测。

河南地区新记录蝇种郭氏欧麻蝇形态和DNA条形码鉴定

目的:应用形态学分类和DNA条形码技术对采自新郑机场口岸区域的蝇类样本进行种属鉴定。方法:提取蝇类后足的基因组DNA,用通用引物LCO1490/HCO2198扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因片段,测序后与NCBI和BOLD中的序列进行分析比对,用Mega 7.0软件以邻接法、最大简约法、最大似然法和最小进化法构建系统发育树,并结合传统形态学方法鉴定该蝇类。结果:所获得DNA条形码序列与NCBI和BOLD中的郭氏欧麻蝇(Sarcophaga depressifrons)的序列相似度均为99.84%。结合形态学和分子生物学的鉴定结果,该蝇类标本为郭氏欧麻蝇,经查阅文献,确认为河南地区新记录蝇种;结论:郭氏欧麻蝇为河南地区新记录蝇种;应加强口岸检疫及监测力度,防止外来物种及传染病入侵。

超级微波消解-ICP-OES法测定婴幼儿配方食品中8种营养元素

建立了超级微波消解-ICP-OES法测定婴幼儿配方食品中8种营养元素的方法,并对前处理方法进行了优化,以5 m L硝酸、1 m L过氧化氢作为酸体系,采用超级微波消解法对婴幼儿配方食品进行前处理,采用ICP-OES法测定婴幼儿配方食品中8种营养元素,以有证标准物质考察方法的准确性。结果表明:8种元素在一定浓度范围内线性关系良好,相关系数在0.99991~0.99999之间,相对标准偏差(RSD)在0.6%~2.9%之间,8种营养元素的检测结果均在标准物质指定结果范围内,该方法准确、快速、方便,适用于婴幼儿配方食品中营养元素的测定。

致病菌快速检测管联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定即食食品中的大肠埃希氏菌O157:H

目的建立基于致病菌快速检测管技术联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速、高效、准确鉴定即时食品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7的方法。方法选取改良胰蛋白胨大豆肉汤(modified tryptone soya broth,mTSB)为初筛培养基,制作出针对即时食品中E.coli O157:H7的致病菌快速检测管,初筛阳性结果采用MALDI-TOF MS技术鉴定。结果5株常见E.coli O157:H7菌株均能特异检出,而其他非E.coli O157:H7均未检出,灵敏度可达51 CFU/mL;通过对人工污染样品和自然样品检测,鉴定结果和GB 4789.36—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》方法完全一致,且检测效率提高了30%。结论两种技术联合应用建立的鉴定即时食品中E.coli O157:H7的新方法,操作简便、成本低廉,适合推广,为快速、准确鉴定即时食品中E.coli O157:H7打开了新思路。

事业单位内部控制管理与财务风险的防范措施分析

一、前言随着我国市场经济的不断深化改革,事业单位内部控制管理面临着巨大的挑战。传统的财务管理模式属于粗放型管理模式,这与现代精细化和规范化管理的实际要求有着较大的差距,所以,为了保证事业单位较高水平地服务于社会,这就要求事业单位不断加强内部控制管理,努力提升内部控制管理水平,增强财务风险防范能力,保障事业单位持续、健康发展。

利用TaqMan微流控阵列同步检测多种动物源性成分

利用TaqMan微流控阵列(TaqMan■array microfluidic card)技术,将24种(类)动物物种的实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)的引物探针集合在同一个阵列上,以实现多物种高通量同步检测,并对该方法的重复性、特异性和灵敏度进行验证。用变异系数(coefficient of variation,CV)表示一块阵列板内,同一物种成分检测的重复性。结果显示:66个CV值中,11个低于1%,15个大于2%,其余40个介于1%~2%之间,没有一个物种成分的CV值高于3%。P值显示的是不同阵列板间同一成分检测的重复性,22个物种成分的P值只有1个小于0.05,显示为板间存在差异,其他21种成分的板间差异均未达到显著水平。因此,本研究对多数物种成分的检测,不论板内还是板间都有较好的重复性。特异性检测中未发现TaqMan微流控阵列中出现假阳性的结果,但有2种成分的检测出现了假阴性。TaqMan微流控阵列的检测灵敏度没有高于单重荧光定量PCR,在22个检测样品中,10个物种成分检测的灵敏度降为原来的10%,1个甚至降低为原来的1%,其余11个灵敏度和单重荧光保持一致。总体而言,TaqMan微流控阵列技术在重复性、特异性和灵敏度方面都能满足物种成分真伪鉴定的需求,为同步鉴定多种动物源性成分提供了一种新的方法。

数字PCR精准定量方法研究进展

数字PCR作为第3代PCR技术的代表,近年来在实验研究和临床检测的多个领域得到了广泛应用。与传统的核酸扩增技术相比,数字PCR不依赖扩增阈值(Ct值)和标准曲线,不需要内参基因,结果不受PCR扩增效率的影响,可实现核酸分子的绝对定量。文章对数字PCR技术的发展、应用及精准定量方法进行了总结,重点阐述其在动物源性成分精准定量检测中的计算方法,以及存在的问题,并就该技术的应用前景进行了展望。

食品中鸭源性成分的微滴数字PCR定量检测方法的建立

为准确定量食品中鸭源性成分的含量,根据一定范围内鸭肉质量与DNA含量、DNA含量与DNA拷贝数之间的线性关系,建立微滴数字PCR检测系统。运用方法对已知质量分数的鸭肉模拟样品检测结果显示,每种模拟肉样中测出的鸭源性成分的含量与真实含量基本一致。通过对市售样品的检测,在抽检的51份样品中,有10份牛、羊肉制品掺有鸭肉,掺有鸭肉的样品(掺假样品)所占的比例为19.61%,而且掺假样品中鸭肉的最大含量达到了89.23%,说明本试验建立的定量检测方法具有潜在的市场应用价值,为肉制品日常检测及是否掺假提供有力的科学依据。

碰撞池-电感耦合等离子体质谱法测定食品添加剂中的微量铝

目的建立碰撞池-电感耦合等离子体质谱法(inductively coupled plasma-mass spectrometry,ICP-MS)测定食品添加剂中微量铝含量的方法,了解市售面制食品添加剂中铝含量现状。方法采用泡打粉、酵母、小苏打等样品经过微波消解后,用氦气作为反应气,在线加入45Sc内标校正基体效应,ICP-MS测定样品中铝的含量,添加回收率来验证方法的准确性与可靠性。结果该方法的相关系数为0.9991,线性关系良好,检出限为0.08 mg/kg,回收率在86.8%~101.3%之间,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)≤6.62%(n=6)。结论本方法检出限低、准确度高,适用于食品添加剂中微量铝含量的测定和监控。通过对市售食品添加剂中铝的检测,部分产品存在安全隐患,相关部门需要加强这类食品添加剂的监管力度。

肉制品中鸭源性成分TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用

目的建立TaqMan探针实时荧光PCR法快速检测肉制品中鸭源性成分的分析方法。方法以鸭生长激素(growthhormone,GH)基因为靶基因,基于特异性保守序列设计引物和TaqMan探针,优化反应体系和反应条件,建立了鸭源性成分实时荧光PCR(real-timePCR)检测方法。结果所建立的real-timePCR方法特异性强,仅对鸭基因组DNA出现特异性扩增曲线,对牛、羊、猪等其他异源性动物基因组DNA均无扩增曲线;灵敏性高,以鸭基因组DNA为模板,检出限为1.0 pg;重复性好,不同浓度基因组DNA测定的Ct值变异系数小于4%。使用建立的real-time PCR方法对200份市售肉制品进行检测,在11份肉制品中检出鸭源性成分,同现行行业标准SN/T3731.5—2013检测结果一致。结论本研究所建立的real-timePCR方法检测具有特异性强、敏感性高、快速高效等特点,适用于肉制品中鸭源性成分快速检测。