稳恒磁场对两种不同构象状态的离体牛肝过氧化氢酶的生物学效应研究(英文)

通过活力测定 ,紫外差光谱、多维荧光光谱及差示扫描量热分析 ,研究了 0 .2 3～ 0 .6 1T稳恒磁场对两种不同构象状态的离体牛肝过氧化氢酶的生物学效应。被选择用于研究的酶的构象状态分别为 4℃的钝化状态和 2 5℃的活化状态 ,二者具有明显不同的构象。 4℃时 ,酶分子处于钝化状态 ,经 0 .2 3～ 0 .6 1T稳恒磁场处理不同的时间后 ,几乎不表现出任何磁生物学效应 ;2 5℃时 ,酶分子处于活化状态 ,经磁场处理后 ,表现出明显的磁生物学效应 :酶活力增加 ,同时构象发生变化。构象变化导致λ2 10～ 310nm紫外差光谱的出现、荧光偏振度的增加、在λ330nm荧光发射峰发射强度的改变及差示扫描量热曲线的产生。研究结果表明 :不同的初始构象状态可能是产生不同磁效应的根本原因。

提高生物化学课堂教学效率的探讨

教学工作是一项复杂细致的工作,提高课堂教学效率是提高教学质量的重要途径.如何提高生物化学的课堂教学效率是生物化学教学工作者不断努力探索的问题.从提高教师综合素质、调动学生的积极性、应用先进教学手段、注意重点难点、培养学生形成良好的学习习惯等方面对如何多方位提高生物化学课堂教学的效率谈几点体会.

卡氏肺孢子菌肺炎生物被膜的体内观察及其β-防御素的分布特征研究

目的研究鼠卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii,Pc)β-防御素的分布特征和观察卡氏肺孢子菌生物被膜。方法免疫抑制方法建立卡氏肺孢子菌肺炎动物模型,改良四胺银(GMS)染色和RT-PCR方法检测Pc病原体;银染色、过碘酸雪夫氏(PAS)染色和扫描电镜观察Pc的生物被膜;RT-PCR方法检测鼠肺、肾、脾、小肠、皮肤、肝脏、心以及血液8个组织的β1-防御素和β2-防御素的mRNA表达。结果免疫抑制诱导第5周PCR方法检测到Pc感染,第7周GMS染色观察到Pc包囊,第9周银染色、PAS染色和扫描电镜观察到明显的Pc生物被膜。RT-PCR方法在肺、肾、脾、小肠、皮肤、肝脏、心以及血液均检测到β1和β2防御素的mRNA表达,β1防御素在肾脏和皮肤表达最强,β2防御素在肺表达最强。结论 Pc在体内可以形成生物被膜,可以诱导宿主β防御素的产生;卡氏肺孢子菌肺炎肺部诱导的防御素以β2防御素为主。

血清γ-谷氨酰转肽酶活性测定法——附重庆地区健康成人111例正常参考值

γ-谷氨酰转肽酶（γ-GTP）广泛存在于人体各器官中，在细胞内该酶分别呈溶解与不溶解部分。只有可溶性部分可在体液中测得，即在血液与尿中存在。该酶可能参予调节组织中谷胱甘肽水平，氨基酸的吸收与排泄，以及肽链中自由氨基酸的酰化等作用。对人体中γ-GTP的测定，过去多用纸层析等方法，很不方便。1963年Orlwski等合成并采用γ-谷氨酰对硝基苯胺作基质测定γ-GTP的活力。本文采用γ-谷氨酰对硝基苯胺作基质，甘氨酰甘氨酸（即双甘肽）为γ-谷氨酰基的受体的方法测定，反应条件经酶反应动力学实验加以规范化和标准化，反应体系中加入吐温80，使γ-GTP活性测定方法重复性好、操作简便、快速。并通过测定111例健康成人血清，提供了本方法的正常参考范围，兹介绍如下：

重庆地区123例正常成人血清总蛋白及醋酸纤维薄膜蛋白电泳分析

自1957年Kohn,J使用醋酸纤维薄膜测定人血清蛋白以来，由于电泳分辨率高，时间短、染料吸附少等优点而被广泛采用。由于各研究者，在具体应用中方法不一，因此，对其他研究者，不便借鉴。本文对重庆地区正常成人123例，用Lowry，O.H和Kohn J的测定方法，对血清总蛋白和用醋酸纤维薄膜测定血清各蛋白组分进行了测试，将所得结果与其他实验报导进行了比较。认为本实验与测定方法结论稳定可靠，可供借鉴。

2型糖尿病合并高血压患者血清NO、NOS水平的研究

目的 通过对 2型糖尿病 (2 - DM)合并高血压 (EH)患者血清一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)的测定 ,探讨其在 2 - DM合并 EH发生发展中的意义。方法 设正常对照组、单纯 2 - DM组和 2 - DM合并 EH组 ,分别测定血糖、胰岛素、血脂、NO及 NOS。结果 2 - DM合并 EH组空腹胰岛素 (FINS)、舒张压 (DBP)和收缩压 (SBP)等均显著高于单纯 2 - DM组和正常对照组 ;胰岛素敏感指数 (ISI)和 NO均显著低于其他两组。相关分析显示 NO与 FINS和血压呈明显负相关 ,与 ISI呈显著正相关。结论 血清中 NO含量与胰岛素抵抗和血压密切相关 ,2 - DM患者血清 NO水平的降低可能参与了 2 - DM患者合并 EH的发病。

0.23T稳恒磁场对不同温度离体过氧化氢酶的磁效应研究

研究了 0 .2 3T稳恒磁场对不同温度下的离体牛肝过氧化氢酶 (CAT)构象及活力的影响 ,并从分子水平讨论了磁场对不同温度的过氧化氢酶产生不同生物学效应的可能机制。将不同温度的天然酶液置于磁感应强度为0 .2 3T的磁场中分别处理一定的时间 ,处理过程中保持环境温度与酶液温度一致 ,撤离磁场后立即在相同实验条件下对其进行光谱分析及量热分析 ,并用Beers&Sizers法 (改良型 )测定酶活力。结果表明 ,磁场使 2 5℃过氧化氢酶的构象发生明显变化 ,表现为荧光偏振度增加、出现明显的差示扫描量热曲线、产生λ2 10nm～ 310nm的紫外差光谱以及λ330nm荧光发射峰的荧光强度改变 (荧光发射峰的峰位未移动 ) ,构象变化的同时酶活力增加 ;15℃过氧化氢酶的构象及活力变化规律与 2 5℃过氧化氢酶类似 ,但强度均弱于 2 5℃酶 ;而 4℃过氧化氢酶的构象及活力没有发生变化 ,表现出未受磁场处理的影响。相同实验条件下 ,磁场对不同温度的酶分子影响不同 ,随温度的增加 ,影响效应趋于显著。由于不同温度的酶分子之间的差异在于构象状态的不同 ,这表明酶分子自身的构象状态对磁场处理效果有极其重要的影响。不同温度的过氧化氢酶磁效应差异显著可能是由磁致酶构象变化的特殊机制所引起。磁场对酶分子构象的影响可能是通?

在高于米氏常数的底物浓度下用积分法测定尿酸酶活性

目的 :以尿酸酶为模型 ,考察在底物浓度高于酶米氏常数 (Km)时用积分法测定酶活性 (Vm)的可靠性 .方法 :用 2 93nm光吸收记录尿酸酶反应曲线 .用以反应时间为自变量的积分速度方程 ,以尿酸酶Km 为常数而本底为非线性参数拟合尿酸酶反应曲线 ,搜寻对应最好拟合的Vm.结果 :此积分法测定Vm 主要受剩余底物浓度影响 ,本底基本没有干扰 .剩余底物低于 2 .5 μmol/L时用 1 0～ 70 μmol/L起始底物所得Vm 无差异 .用 2 5和 70 μmol/L起始底物浓度时初速度和Vm 都与酶量呈正比 .在此两种底物浓度下积分法的下限相同 ,且与初速度法下限无明显差异 .但用积分法测定酶活性的上限明显高于初速度法 ,而且起始底物浓度越低则差异越显著 .结论 :在积分法中使用以反应时间为自变量的积分速度方程拟合酶反应曲线 ,在高于Km

点样位置对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳行为的改变

血清蛋白室温下进行醋酸纤维薄膜电泳时,点样线靠近阳极端则有蛋白朝阴极运动,低温下移动方向相同而速度变慢。兰色葡聚糖和溴酚兰在对应条件下电泳表明,主要是薄膜表面溶剂蒸发,造成缓冲液由两端朝中部补充而流动,从而改变了部分低荷质比血清蛋白的电泳行为。此异常现象证实缓冲液流动可改变蛋白质电泳行为,可用于验证电泳影响因素的设计性实验教学。

侧脑室注射链脲佐菌素致大鼠脑内胰岛素通路障碍和认知水平降低

目的:本文旨在研究胰岛素信号通路在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病中的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:于实验第1 d和第3 d侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射链脲佐菌素(streptozo-tocin,STZ;3 mg/kg)建立大鼠模型。第1次注射后21 d采用Morris水迷宫检测大鼠的学习和记忆水平;采用West-ern blotting检测胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)、tau和磷酸化tau(p-tau)的表达;采用免疫组化检测淀粉样β蛋白(Aβ1-40和Aβ1-42)在大脑皮质的沉积;用real-time RT-PCR法检测胰岛素、胰岛素受体、tau、IDE mRNA的表达。结果:Morris水迷宫结果显示ICV-STZ明显降低大鼠的认知能力(P<0.05);Western blotting结果显示ICV-STZ能降低IDE的表达,增加GSK-3β的活性和tau的磷酸化水平(P<0.05);免疫组化结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑皮质Aβ1-40和Aβ1-42均明显增加;PCR结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑胰岛素和胰岛素受体的mRNA水平均降低,IDE mRNA的水平亦下降。结论:ICV-STZ通过影响脑内胰岛素通路导致大鼠出现AD样行为学及病理改变,表明胰岛素信号通路在AD发病中可能起到了一定的重要作用。

2型糖尿病肾病NO、NOS测定及其临床意义

目的 通过对一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)的配套测定 ,深入探讨其在 2型糖尿病肾病发生发展中的重要意义。方法 设糖尿病不伴蛋白尿组 (SDM)、糖尿病伴微量蛋白尿组 (IDN)、糖尿病伴大量蛋白尿组 (ODN)和对照组 (CON)四组 ,配套测定血清NO及NOS ,NO采用硝酸还原酶法 ,NOS采用分光光度法 ,尿白蛋白测定采用放射免疫法。结果 IDN组NOS显著高于CON及SDM组 ,ODN组NOS显著高于其它 3组。NO在IDN组较其它组高 ,而在ODN组较其它组低。SDM组及IDN组NO与NOS呈直线正相关 ;ODN组NO与NOS无直线相关关系 ;NO与病程及尿白蛋白排泄率均呈直线负相关。结论 (1 ) 2型糖尿病DN早期NO和NOS增加 ,参与DN的发生发展 ;(2 )DN晚期NO减少 ,与NOS的变化无关 ;(3)NO在

2880例染色体检查结果分析

目的 为探讨智力低下、闭经、不良生育史和性征异常的病因。方法 采用细胞遗传学的方法对 2 880例遗传咨询者进行了染色体检查。结果 检出异常核型 4 0 8例 ,检出率 14 .2 %。其中染色体数目异常 2 5 0例 ,占异常的 6 1.3% ,染色体结构异常 15 8例 ,占异常的 38.7%。此外 ,检出染色体多态变异 5 3例 ,其中大Y 4 9例 ,小Y 14例。并从细胞遗传学的角度 ,对患者发病的原因进行了探讨。结论 染色体异常是智力低下、闭经、不良生育史和性征异常的重要病因之一。染色体核型分析可为这类疾病的诊断和治疗提供有效的和重要的依据。

自然流产病例的绒毛与蜕膜细胞增殖和细胞凋亡的研究

目的 从细胞增殖与细胞凋亡的角度探讨自然流产的发生机制。方法 对 30例正常早孕吸宫流产病例和 30例自然流产病例的绒毛与蜕膜组织进行研究。常规光镜观察细胞形态学变化 ;免疫组织化学S P法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)在细胞中的表达 ;用DNA缺口原位未端标记技术 (TUNEL)检测细胞凋亡 ;免疫组化S P法检测bcl 2 bax基因蛋白表达率比值。结果 自然流产绒毛组织形态学结构均出现程度不同的退行性改变 ,绒毛的细胞滋养细胞及蜕膜中增殖指数 (PI)较正常早孕时明显减少 (P <0 0 1) ,而合体滋养细胞中从未发生过增殖 ,PI为 0 ;与此相反自然流产绒毛的细胞滋养细胞、合体滋养细胞及蜕膜中凋亡指数 (AI)较正常早孕时明显增多 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,同时 ,早孕流产的绒毛及蜕膜中促 /抑凋亡基因bcl 2 bax表达率的比值也较正常早孕时下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,结果与细胞凋亡的发生一致。结论 细胞增殖和凋亡可能在孕卵发育过程中起着重要作用 ,绒毛和蜕膜组织中大量的细胞凋亡是其形态学退变的根本 ,并进而阻碍了孕卵的发育。

强稳恒磁场对离体牛肝过氧化氢酶构象及活力的影响

目的:研究了强稳恒磁场对离体牛肝过氧化氢酶（CAT）构象及活力的影响。材料与方法:将天然酶液置于不同磁感应强度的磁场中处理不同的时间脱离磁场后立即对其进行光谱分析,并用Beers＆Sizers法（改良型）测定酶活力。结果:磁场使过氧化氢酶的构象发生变化,表现为λ=210～310nm的紫外差光谱以及λ=330nm荧光发射峰的荧光强度改变;构象变化的同时酶活力增加。结论:磁场对酶分子的影响可能是导致机体宏观磁效应产生的重要原因。

甲状腺乳头状癌microRNA差异表达谱分析

目的建立甲状腺乳头状癌(PTC)microRNA(miRNA)的差异表达谱,为进一步探讨miRNA在甲状腺乳头状癌发生机制的作用提供依据。方法收集12例PTC肿瘤组织和临近肿瘤未受侵袭的组织标本,临近肿瘤未受侵袭的组织标本作为正常对照,一半用于芯片检测,另一半用于荧光定量PCR检测。用Trizol法抽提组织标本总RNA,YM-100微离心滤器富集小RNA,含875个探针的miR Human_13.0_091250 miRNA芯片检测PTC肿瘤组织标本和临近肿瘤未受侵袭组织标本miRNA的差异表达谱。利用Taq Man(miRNA Assays定量PCR试剂盒,以U6 snRNA作为内标,对部分差异表达的miRNAs进行实时定量PCR检测。结果部分miRNAs在PTC肿瘤中表达异常,miR-433、miR-221和miR-21在PTC肿瘤高表达,miR-138、miR-26a和miR-709在PTC肿瘤低表达。结论部分miRNAs在PTC肿瘤和临近肿瘤未受侵袭组织中存在差异表达,可能参与了PTC发生的分子机制。

PCR-LIS-SSCP检测大肠癌PTEN基因的点突变

目的 探讨PTEN基因突变在大肠癌发病机理中的作用。方法 应用聚合酶链反应 -低离子强度 -单链构象多态性技术 ,对大肠癌及正常大肠石蜡包埋组织中PTEN的第 7、第 8个外显子进行点突变检测。结果 在 60例大肠癌组织中 ,第 7个外显子SSCP带型异常的有 2 8例 ,阳性率为 46.7% (χ2 =5 .0 81,P <0 .0 5 ) ,第 8个外显子未见阳性带。在 10例正常大肠组织中 ,2个外显子均未见异常SSCP带型。结论 大肠癌组织中PTEN的第 7个外显子点突变的发生率高 。

肌动蛋白的形态分布与细胞黏附性之间的关系

细胞内肌动蛋白的形态和分布与细胞的黏附之间有关联。细胞中肌动蛋白纤维含量减少时,细胞易从基质上脱落。癌细胞与静态培养的细胞中肌动蛋白纤维均分布于细胞边缘,目的是伸出伪足黏附在基底上,又可以收回伪足,使细胞从基底上脱黏附。细胞在受到外力作用下,于基底上黏附/脱附时,其骨架肌动蛋白的形态与分布发生改变。不同程度的外力作用于细胞,其骨架肌动蛋白的适应性变化不同。显然细胞在基底上的黏附/脱附机制与其肌动蛋白的形态分布间的关系尚需进一步研究。

对氧磷酸酯酶-1Glu-Arg192位多态性与冠心病关系的研究

目的 :探讨对氧磷酸酯酶 - 1(PON- 1)基因 Glu- Arg192位多态性、血清 PON- 1活性与冠心病的关系。 方法 :用多聚酶链限制片段多态性反应技术对 12 3例冠心病 (CHD)患者 (CHD组 )及 110例正常人 (正常对照组 )的PON- 1192位进行基因分型 ,用酚乙酸酯为底物测定血清 PON- 1活性。 结果 :重庆居民 PON- 1基因 192 A、B等位基因频率在正常对照组为 0 .43、0 .5 7,CHD组为 0 .40、0 .6 0。 CHD组的PON- 1AA、AB、BB基因型的构成比与正常对照组无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,正常对照组 3种基因型之间血脂无显著相关 (P>0 .0 5 ) ,CHD组的 PON- 1活性 (75 .6± 2 3.5 KU/ L )比正常对照组 (10 8.4± 18.3 KU/ L )显著下降 (P<0 .0 1)。 结论 :重庆居民 PON- 1192 B等位基因与 CHD无关 ,血清 PON- 1活性与 CHD有一定的关系。

用线性动力学方法考察黄嘌呤对尿酸酶的抑制作用

目的:以米氏常数相差较大的两种尿酸酶为模型,考察用两个底物浓度下标定比活性确定酶动力学参数和筛选抑制剂的可靠性.方法:用293nm吸收监测尿酸酶反应.通过两个底物浓度下标定比活性确定表观米氏常数(apparentmichaelismentenconstant,Kmapp)和表观最大反应速度(apparentmaximalreactionrate,Vmapp).据表观动力学参数随抑制剂浓度的变化确定抑制类型和抑制常数(inhibitionconstant,Ki).结果:只要所用尿酸浓度中较小者(thelowerconcentrationofuricacid,SL)大于待测Km的0.8倍且较大者(thehigherconcentrationofuricacid,SH)在SL的1.4倍以上,此线性动力学法能可靠测定Bacillusfastidiosus和Candidaspecies尿酸酶的米氏常数,且与双倒数法结果一致.如SL大于Km的3.8倍而SH为SL的3倍,此线性动力学法所得Candidaspecies尿酸酶Kmapp与抑制剂浓度成正比,Ki为(4.8±0.5)μmol/L,与双倒数法结果一致.Bacillusfastidiosus尿酸酶Km太高,底物浓度有限时不能用此方法筛选其抑制剂.结论:此线性动力学方法仅用高于Km的底物浓度也能可靠确定酶动力学参数,有利于用常规定量方法筛选对底物具有高亲合力特殊靶酶的抑制剂.