对药“远志-石菖蒲”中LDH抑制成分的虚拟筛选及其治疗癫痫作用研究

目的该文对“远志-石菖蒲”中潜在作用于乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)靶点的活性物质进行研究,阐明其药效物质基础。方法该文采用以药效团为基础的虚拟筛选手段,通过收集已出版文献中报道的具有抑制LDH活性的化合物信息,建立基于LDH配体的HipHop药效团模型,收集文献中报道的“远志-石菖蒲”中的成分并建立化合物库,对“远志-石菖蒲”中的成分与药效团进行匹配,随后使用分子模拟对接手段对匹配到的8种小分子化合物与LDH靶点(PDB ID:4ZVV)进行对接。采用戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)点燃模型对活性单体细叶远志苷A(36)调节癫痫动物体内LDH的作用进行评价。结果通过文献检索建立包含“远志-石菖蒲”中所包含化学成分132种的化合物库,随后通过测试集验证选出优选药效团06用于对“远志-石菖蒲”化合物库的虚拟筛选,经过匹配后得到8种“远志-石菖蒲”中潜在的LDH抑制成分。通过分子模拟对接分析了8种化合物与LDH的作用情况,对得分最高的化合物细叶远志苷A(36)癫痫相关靶标的调控作用进行研究发现,该化合物能够下调海马区PTZ诱导的LDH表达升高,进而对LDH/HSP90轴产生调控作用起到治疗癫痫效果。结论通过虚拟筛选手段得出的“远志-石菖蒲”中的细叶远志苷A(36)能够对LDH/HSP90轴产生调控作用起到治疗癫痫效果。

针刺“新胃俞”穴治疗慢性胃炎的临床疗效及对患者胃镜检查积分的影响

目的观察针刺"新胃俞"穴治疗慢性胃炎的临床疗效及对患者胃镜检查积分的影响。方法将90例慢性胃炎患者随机分为2组。治疗组45例予针刺"新胃俞"治疗,对照组45例予针刺胃俞穴治疗。2组均治疗15 d后统计临床疗效,并观察2组治疗前后胃镜检查积分情况。结果治疗组总有效率86.7%,对照组总有效率75.6%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组疗效优于对照组。2组治疗后胃镜检查积分均降低,且治疗组降低优于对照组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论针刺"新胃俞"治疗慢性胃炎的临床疗效较针刺胃俞穴更为明显。

雷射针刺治疗血管性痴呆的临床疗效及对血清抗凋亡因子的影响

目的:观察雷射针刺治疗血管性痴呆(VD)的临床疗效及对VD患者血清抗凋亡因子(Livin)的影响。方法:192名VD患者随机分为雷射针刺治疗组、普通体针对照组和药物对照组三组,每组分别64例,共治疗3个疗程,对长谷川痴呆修改量表(HDS)、社会活动能力调查表(FAQ)评分以及血清Livin的水平分别于治疗前后进行对比。结果:总有效率雷射针刺治疗组为71. 88%,普通体针对照组为70. 31%,药物对照组为56. 25%,三组疗效相比,雷射针刺治疗组与药物对照组两组差异有统计学意义(P<0. 05);三组患者治疗前后比较,治疗后HDS评分上升,FAQ评分降低,Livin水平上升,具有显著性差异(P<0. 05);三组间治疗后比较,雷射针刺治疗组的HDS、FAQ评分以及血清Livin水平的改善较药物组更为显著(P<0. 05),与普通体针对照组相当(P>0. 05)。结论:雷射针刺治疗VD患者疗效显著,其作用机制与改善VD患者血清Livin水平相关。

探讨“头项寻列缺”的中医理论渊源

为了追溯"头项寻列缺"的理论渊源,明确"列缺穴"治疗头项部疾病的中医理论基础。查阅大量文献,通过分析列缺穴的由来和定义、定位及主治配伍、脏腑别通等角度深入阐释其理论机制;从偏正头痛、颈项强痛等头项部疾患探索列缺穴与头项部疾病的关系,以及列缺穴治疗头项部疾病的中医理论基础和机理。针刺列缺穴能够有效缓解患者头项部强直疼痛,明确了列缺穴治疗头项部疾病的中医理论基础。列缺穴与头项部疾病之间密切相关,且为四总穴中调治头项的要穴,其对于治疗偏正头痛、颈项强痛等头项部疾病具有重要的意义。

定痫丸中抗癫痫药对的再开发研究

目的为从中药经方中发现抗癫痫临床候选药物提供理论依据。方法根据中医“君臣佐使,七情和合”的配伍理论,课题组前期对定痫丸进行了拆方研究,定痫丸为中医治疗痫证的重要方剂,载于清代《医学心悟》,用于治疗癫痫的突然发作,拆方后得到了对癫痫具有治疗作用的“远志-天麻”,“远志-石菖蒲”等药对。方中远志养心安神,天麻熄风止痉,石菖蒲开窍化痰。课题组结合网络药理学、虚拟筛选、亲和超滤、结构修饰、整体动物(MES,PTZ,3-MP)、分子病理(WB,HE,IP)及电生理等手段对上述药对治疗癫痫的机理进行了探讨。结果①物质基础:采用液质联用手段对“远志-天麻”提取物进行成分鉴定,结合文献报道建立“远志-天麻”成分化合物库。在此基础上构建“成分-靶点-通路”网络模型,预测远志与天麻治疗癫痫的有效成分及潜在作用机制。②虚拟筛选:通过文献报道的GABA-AT抑制剂为训练集提取其化学特征信息构建了基于配体的HipHop药效团,筛选“远志-天麻”中与药效团匹配的成分,采用分子对接及分子动力学模拟等手段对满足GABA-AT药效团要求的成分与靶标蛋白作用进行了评估,结果表明远志中的细叶远志皂苷A及西伯利亚远志糖A5与天麻中的天麻素等成分可能具有较好的GABA-AT抑制作用。③结构修饰:我们先后对远志活性成分TMCA衍生物,石菖蒲活性成分细辛醚衍生物及远志不同部位提取物抗癫痫活性进行系统评价。以对药“远志-天麻”的代谢效应成分TMCA及香兰醇为先导物进行结构修饰,合成TMCA-天麻苷元酯、TMCA-香兰酯、TMCA-乙酰天麻素酯等衍生物衍生物并进行了抗癫痫活性测定,结果表明多种衍生物的保护指数远高于阳性药物卡马西平,其中代表性化合物TMCA-乙酰天麻素酯(ED50:19.5 mg·kg^(-1))具有进一步开发的潜在价值。④分子病理及电生理:初步研究结果表明“远志-天麻”提取物能够对癫痫状态下的焦虑抑郁样行为起到一定治疗作用,调控脑内海马区GABA-AT/GAT-1/GAD 65/GABRA1轴蛋白的表达水平,减少神经元脱失,降低CA1区及CA3区GAT-1,GABA-AT 及 GABRA1 免疫阳性细胞数,而“远志-石菖蒲”活性成分则能够作为乳酸脱氢酶/GABAAR双靶标活性化合 物,显著促进氯离子内流,形成神经细胞膜超极化状态。结论 基于中药经方定痫丸的药对的再开发研究能够为中药新要的 发现及癫痫的中西医结合治疗提供科学依据。

琥珀酰亚胺衍生物抗癫痫活性的研究进展

目的对琥珀酰亚胺衍生物的抗癫痫活性进行总结。方法通过收集已发表文献中报道的琥珀酰亚胺衍生物的相关信息,对琥珀酰亚胺衍生物的抗癫痫活性及构效关系进行综述。结果按照时间顺序,对文献报道的25种琥珀酰亚胺类衍生物的抗癫痫活性进行了系统性的总结。结论通过对琥珀酰亚胺衍生物活性及构效关系的总结,为进一步开发以琥珀酰亚胺为母核的新型抗癫痫药物提供依据。

耳迷走神经刺激改善妊娠高血压大鼠胎盘滋养层细胞线粒体功能障碍的作用机制研究

目的阐明耳迷走神经刺激改善妊娠高血压大鼠胎盘滋养层细胞线粒体功能的机制。方法成年雌性SD大鼠怀孕第14天通过银质夹子钳夹髂分叉上方和双侧卵巢动脉周围腹主动脉制作妊娠高血压模型,在双侧耳甲腔刺入针灸针0.5~1 mm,并连接用韩氏电针仪,2/15 Hz疏密波,2 m A,刺激30 min,第14~20天,每天1次。分别于第14、17、20天测平均动脉压,第20天测完平均动脉压后收集胎盘组织。采用ELISA、胎盘组织病理、透射电子显微镜、LC-MS等方法分别观察炎性因子表达、胎盘病理变化、细胞超微结构、胎盘组织上清、胎盘氧化、HSP70、乙酰胆碱受体表达等变化。结果耳迷走神经刺激可有效改善妊娠高血压大鼠的血压,降低炎性因子表达及胎盘形态,上调胎盘中的乙酰胆碱浓度及M3受体表达,抑制子宫灌注压下降导致的ROS升高及线粒体依赖性凋亡信号,敲除M3受体可明显破坏耳迷走刺激的上述作用,NAC能显著抑制mt ROS表达、修复线粒体结构改变,抑制缺氧导致的HSP70和LONP1增加,乙酰胆碱可以抑制Co Cl2诱导的细胞凋亡和mt ROS水平,改善线粒体形态及功能、及线粒体依赖的凋亡信号,敲除M3受体可阻断乙酰胆碱的上述作用。结论耳迷走神经刺激可以促进乙酰胆碱的释放,抑制mt ROS的形成,保护线粒体超微结构和功能的完整性,阻断缺氧导致的线粒体依赖性的细胞凋亡。乙酰胆碱的上述作用是通过M3受体实现的。

3,4,5-三甲氧基肉桂酸酯类衍生物的活性研究进展

目的对3,4,5-三甲氧基肉桂酸(3,4,5-trimethoxy cinnamic acid,TMCA)酯类衍生物的生物活性进行总结。方法查阅相关文献,对TMCA衍生物的活性及构效关系进行综述。结果根据文献报道总结天然产物的TMCA酯类衍生物活性的来源,并且从抗肿瘤、抗病毒、神经系统等方面阐述了合成TMCA酯类化合物的活性。结论通过对TMCA酯类衍生物活性及构效关系进行总结,可为该类药物的深入开发提供依据。

马钱子碱通过钾离子通道调节外周镇痛

目的马钱子是传统的镇痛中药之一,马钱子碱(又名布鲁生)是马钱子镇痛的有效成分,但外周镇痛机制研究较少,本文通过痛行为检测和单纤维自发放电手段,观察马钱子碱在外周损伤区中的镇痛作用机制。方法 建立慢性压迫损伤模型 (CCI),利用机械缩足反射阈值(PWT)和热缩足潜伏期(PWL)检测大鼠的疼痛行为学变化;记录起步点单纤维自发放电检测 马钱子碱对放电频率的影响。结果 与溶剂组相比,外周损伤区局部注射马钱子碱后 PWT 和 PWL 显著增加(P<0.01),预先 注射非特异性钾通道阻断剂四乙基铵(TEA)/大电导钙激活钾离子通道(BKca)阻断了马钱子碱的镇痛作用;马钱子碱使起步 点自发放电频率显著降低(P<0.01),而灌流 TEA 后抑制了它的作用,进一步灌流钙依赖钾离子的特异性阻断剂阻断 BKca、中 电导钙激活钾离子通道和小电导钙激活钾离子通道,发现仅阻断 BKca 通道可抑制马钱子碱对起步点自发放电频率的抑制作 用。结论 马钱子碱在外周具有镇痛作用,并且 BKca 能够阻断其作用,表明 BKca 参与马钱子碱在外周的镇痛作用。

早期电针干预对帕金森病小鼠离子钙接头蛋白-1及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:观察早期电针干预对帕金森病(PD)小鼠离子钙接头蛋白-1(Iba-1)、络氨酸羟化酶(TH)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,从神经炎性反应角度探讨电针治疗PD的作用机制。方法:9周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、电针组,每组8只。采用长期低剂量皮下注射鱼藤酮制备PD小鼠模型。电针组造模同时予“神庭”“天枢”“曲池”“上巨虚”电针干预,15 min/次,1次/d,连续8周。采用转棒实验、步长实验评估小鼠运动障碍程度;Western blot法和免疫组织化学法检测小鼠中脑黑质区Iba-1、TH蛋白表达水平;Western blot法和免疫荧光染色法检测小鼠结肠组织TNF-α蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组造模4、6、8周掉落潜伏期缩短(P<0.01),造模5、7周后肢步长减小(P<0.01);与模型组比较,电针组造模6、8周掉落潜伏期延长(P<0.01),造模5、7周后肢步长增大(P<0.01)。与空白组比较,模型组中脑黑质区Iba-1、结肠组织中TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.01),中脑黑质区TH蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,电针组中脑黑质区Iba-1、结肠组织中TNF-α蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),中脑黑质区TH蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论:早期电针干预延缓了鱼藤酮诱发PD小鼠运动障碍发生的时间,减轻了黑质多巴胺能神经元丢失,对PD的退行性改变发挥了良好的神经保护作用,其机制可能与针刺改善肠道炎性反应,抑制小胶质细胞活化,进而减轻神经炎性反应的发生有关。

基于加权基因共表达网络分析的动脉粥样硬化中铁死亡核心基因及其与免疫浸润细胞的关系研究

目的 基于加权基因共表达网络分析(WGCNA)筛选动脉粥样硬化(AS)中铁死亡核心基因,并分析其与免疫浸润细胞的关系。方法 从基因表达综合(GEO)数据库下载AS转录组数据集GSE100927[筛选出颈动脉样本41个,包含12个健康对照者的颈动脉样本(对照组)和29个AS患者的颈动脉样本(AS组)]。从FerrDb数据库下载铁死亡相关基因(FRG),去除重复基因后,最终纳入了564个FRG。利用R软件(版本4.2.3)进行数据预处理、差异表达基因(DEG)筛选、WGCNA,通过在线String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI)分析及确定核心基因,比较GSE100927中对照组和AS组核心基因表达水平,并分析GSE20129和GSE226790中核心基因表达水平,同时进行单样本基因集富集分析(ssGSEA)及免疫浸润分析。结果 共筛选出了508个DEG。网络拓扑分析结果显示,软阈值为2。共识别到5个基因模块,其中绿松石色基因模块与AS相关性最强(r=-0.96,P<0.001),该基因模块共包含15 087个基因。将绿松石色基因模块中的基因、FRG、DEG取交集,共得到17个交集基因。PPI分析结果显示,构建出1个含有17个节点、60条边的PPI网络图;核心基因分别为IL1B、CTSB、HMOX1、CDKN2A、ALOX5。在GSE100927中,AS组IL1B、CTSB、HMOX1、CDKN2A、ALOX5表达水平高于对照组(P<0.05);在GSE20129中,AS组IL1B、HMOX1表达水平高于对照组(P<0.05);在GSE20129中,对照组与AS组CDKN2A、ALOX5表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);在GSE226790中,对照组与AS组CTSB表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ssGSEA结果显示,IL1B、CTSB、HMOX1、CDKN2A、ALOX5主要涉及铁死亡、脂肪消化吸收等机制。AS组静息CD4记忆T淋巴细胞、浆细胞表达水平低于对照组,活化肥大细胞、单核细胞、滤泡辅助性T淋巴细胞、记忆B细胞表达水平高于对照组(P<0.05)。相关性分析结果显示,IL1B表达水平与活化肥大细胞、中性粒细胞表达水平呈正相关,与滤泡辅助性T淋巴细胞、记忆B细胞、M0型巨噬细胞表达水平呈负相关(P<0.05);CTSB、HMOX1表达水平与22种免疫浸润细胞表达水平均无直线相关关系(P>0.05);CDKN2A表达水平与中性粒细胞表达水平呈负相关(P<0.05);ALOX5表达水平与活化CD_(4)记忆T淋巴细胞、活化树突状细胞、M2型巨噬细胞表达水平呈负相关,与活化肥大细胞、调节性T淋巴细胞、M1型巨噬细胞表达水平呈正相关(P<0.05)。结论 本研究基于WGCNA共筛选出5个AS中铁死亡核心基因,分别为IL1B、CTSB、HMOX1、CDKN2A、ALOX5,其中IL1B、CDKN2A、ALOX5表达水平与部分免疫浸润细胞表达水平有直线相关关系,而CTSB、HMOX1表达水平与22种免疫浸润细胞表达水平均无直线相关关系。

妇科相关疾病牵涉痛与穴位敏化的关系

目的观察妇科相关疾病牵涉痛分布区域与穴位敏化的关系,探讨局部区域穴位敏化的规律性分布。方法通过临床试验与动物实验相结合的方法,针对妇科常见病(原发性痛经、盆腔炎、卵巢囊肿等)引发的相应神经支配皮节区域牵涉痛进行探讨。临床研究部分通过自身对照,以触诊法对全身体表皮肤进行探查,观察并统计7所教学医院的934例妇科相关疾病患者体表压痛敏感、皮肤局部区域形态异常改变。动物实验部分,大鼠9只以子宫内注射芥子油作为模型组,另有大鼠6只注射生理盐水为对照组,比较两组大鼠尾静脉注射伊文思蓝后体表蓝色渗出点部位及个数。结果妇科相关疾病患者体表牵涉痛及皮肤局部组织结构异常表现多分布于下腹部(59. 04%)、双下肢内侧(52. 97%)、腰背部及骶部(49. 18%),与穴位重叠或临近。子宫炎模型大鼠体表渗出点亦集中于下腹部、双下肢、腰背部及骶部。结论妇科相关疾病的靶器官(子宫、卵巢)发生病变时,其相应节段(T10-S1)神经支配的体表区域出现规律性的敏化反应。

整合素α ν β3作用机制研究进展

整合素是一类细胞黏附受体家族蛋白,其在细胞识别、黏附、迁移及肿瘤细胞侵袭等方面发挥着重要作用。其中,整合素α ν β3是整合素家族重要成员之一,由αν和β3两种跨膜蛋白以非共价键相互作用而形成的异二聚体,在血管生成性疾病、炎症性疾病及肿瘤等疾病中高表达,可参与调控相关疾病的发生发展,已成为相关疾病诊疗的潜在标志物或靶点。基于整合素α ν β3在疾病诊断或治疗中的潜力,本文从整合素α ν β3的结构、作用机制角度进行综述,以期为整合素α ν β3的深入研究提供参考,为相关疾病的治疗提供新的靶点和策略。

基于生物信息学分析方法和机器学习算法探究铁死亡参与糖尿病心脏病的机制

目的 基于生物信息学分析方法和机器学习算法探究铁死亡参与糖尿病心脏病(DHD)的机制。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因表达综合(GEO)数据库下载数据集GSE4745(大鼠心肌细胞测序数据)和数据集GSE26887(人心肌细胞测序数据),通过铁死亡数据库获得铁死亡基因数据集。应用R软件(4.2.1版本)中的“Limma”包分析数据集GSE4745中DHD的差异表达基因;应用“WGCNA”包构建加权基因共表达网络以筛选DHD相关基因模块;应用“Venn”包取DHD差异表达基因、DHD相关基因模块及铁死亡基因数据集交集以获取DHD相关铁死亡基因。然后针对DHD相关铁死亡基因进行LASSO回归分析以筛选DHD相关铁死亡核心基因。最后通过数据集GSE26887、蛋白质组学原始数据及既往研究验证DHD相关铁死亡核心基因。结果 从数据集GSE4745中获得491个DHD差异表达基因,其中上调基因252个、下调基因239个。以软阈值为7将DHD差异表达基因构建邻接矩阵,最终选择品红色和蓝色模块为DHD相关基因模块,共1 092个基因。进一步分析获得28个DHD相关铁死亡基因。LASSO回归分析结果显示,从28个DHD相关铁死亡基因中获得6个DHD相关铁死亡核心基因,分别为H19、Nr4a1、Decr1、Gstm1、Slc3a2、Por。根据数据集GSE26887、蛋白质组学原始数据及既往研究结果最终确定H19、Nr4a1、Decr1、Por为DHD相关铁死亡的核心基因。结论 铁死亡参与DHD的机制可能与H19、Decr1、Por表达上调及Nr4a1表达下调有关,这为铁死亡参与DHD提供了新的证据。