地方高校“3+1”顶岗实习生物技术专业实践教学体系的探索与实践

对应用型地方高校生物技术专业学生实行“3+1”顶岗实习的实施方案、质量保障体系及意义进行了阐述,并对该实践教学体系进行探索与研究。实践表明,绝大部分的学生认可“3+1”顶岗实习模式。“3+1”顶岗实习提升了学生的专业技能和综合素质,真实对接了人才的“培养和需求”,有利于学生走向社会提升就业能力,有利于实现学校转型发展和地方经济发展的双赢。

乳化植物甾醇对福建白兔生长性能、肠道形态及盲肠菌群与代谢物的影响

本试验旨在研究乳化植物甾醇对福建白兔生长性能、肠道形态及盲肠菌群与代谢物的影响。选取健康、体重相近的40日龄福建白兔150只,随机分为5组,每组30只(公母各占/1/2),单笼饲养。对照组饲喂基础饲粮,试验组A在基础饲粮中添加20 mg/kg的普通植物甾醇,试验组B、C、D在基础饲粮中分别添加10、20和40 mg/kg的乳化植物甾醇,试验期为60 d。饲养试验结束后采样,测定各组的生长性能和肠道形态、盲肠菌群组成与代谢物组成及相对含量。结果显示:1)与对照组和试验组A相比,试验组B、C、D福建白兔的腹泻率和死亡率明显下降,平均日采食量、平均日增重、料重比等各项生长性能指标均有一定程度的改善,其中试验组C的平均日增重、料重比与其他各组的差异达到显著水平(P<0.05)。2)与对照组相比,试验组C的十二指肠绒毛长度与试验组B、C的空肠绒毛长度显著提高(P<0.05),试验组A、B、C、D十二指肠的隐窝深度与试验组B、C、D空肠的隐窝深度显著降低(P<0.05),试验组A、B、C、D十二指肠和空肠的绒毛长度与隐窝深度比值(V/C值)与试验组B、C、D回肠的V/C值显著增加(P<0.05);试验组A空肠、回肠的V/C值显著低于试验组B、C、D(P<0.05);试验组C十二指肠的绒毛长度、试验组C、D十二指肠的V/C值显著高于其他各组(P<0.05)。3)试验组B、C、D盲肠菌群组成与对照组和试验组A相差较大,试验组B、C、D在门水平上以厚壁菌门(Firmi-cutes)、拟杆菌门(Bacteroidota)为主,厚壁菌门/拟杆菌门随着乳化植物甾醇添加剂量的增加呈现先增加后略微下降的趋势;在属水平上,Muribaculaceae、瘤胃球菌科NK4A214组(Ruminococ-caceae_NK4A214_group)、阿克曼氏菌属(Akkermansia)、梭菌纲UCG014(Clostridia_UCG-014)、梭菌纲vadinBB60组(Clostridia_vadinBB60_group)为各组优势菌属。4)添加植物甾醇的各试验组盲肠中糖和醇、有机酸、氨基酸等代谢物的相对含量比对照组增加,部分脂类和类脂类的相对含量下降,类激素物质的相对含量增加。Spearman相关性分析表明,这些代谢物与产粪甾醇真杆菌属(Eubacterium_coprostanoligenes)和瘤胃球菌科V9D2013组(Ruminococcaceae_V9D2013_group)密切相关。综上所述,饲粮中添加乳化植物甾醇可降低福建白兔的腹泻率和死亡率,提高平均日采食量和平均日增重,降低料重比,有利于改善肠道形态和盲肠菌群组成,增加盲肠中代谢物的相对含量,特别是短链脂肪酸;乳化植物甾醇添加剂量为20 mg/kg时对福建白兔生长性能和肠道黏膜形态完整性的改善效果最好,此剂量为福建白兔饲粮中的乳化植物甾醇的最佳添加剂量。

福建省猪伪狂犬病病毒新流行株gD、gE基因遗传变异分析

为了解福建地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律。本试验分离了2011-2013年福建省不同地区的11株PRV,并对其gD、gE基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区被检测的规模化猪场均存在野毒感染,病料接种PK-15细胞均能出现典型的细胞病变,分离的毒株接种家兔能出现典型的伪狂犬病症状。PRVgD、gE基因序列分析表明,自2011年福建地区PRV同源性较高且处于一个独立的分支,表明福建地区流行的PRV可能存在一定的抗原变异。

猫冠状病毒S蛋白生物信息学分析与原核表达

为了研发基于S蛋白的FCoV诊断试剂盒和疫苗,试验采用生物信息学分析方法分析表达FCoV S蛋白,确定含有抗原表位的蛋白可表达区域,并在大肠杆菌中原核表达重组蛋白,筛选重组蛋白表达条件,鉴定重组蛋白的免疫原性。结果表明:Ⅰ型FCoV S蛋白二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占25.82%、28.14%、4.23%和41.80%;有4个比较明显的亲水性区域与1个明显的疏水性区域;该蛋白质具有穿膜螺旋结构与信号肽,并存在3个可能性很高的N-糖基化位点与S蛋白表面存在46个氨基酸较为暴露的片段。以S蛋白1127~1400 aa片段作为体外表达目的片段,命名为S1127-1400aa;重组蛋白最佳诱导温度为37℃、IPTG最佳诱导浓度为0.1 mmol/L、最佳诱导时间为5 h;重组蛋白以包涵体形式表达;成功纯化重组蛋白S1127-1400aa;与FCoV阳性血清有良好的免疫原性。说明试验成功表达并纯化的FCoV S蛋白片段,该蛋白质具有良好的免疫原性。

肉鸡圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌混合感染的检测与分析

为查明福建省龙岩市某鸡场肉鸡消瘦、呼吸困难、病死率升高原因,对发病鸡进行细菌分离鉴定、16S rDNA鉴定、荚膜分型检测、药物敏感试验等分析;以及进行病毒核酸PCR检测、遗传进化分析。结果显示,从病鸡中分离的细菌在血平板上形成圆形、微突起、表面光滑、奶油状的菌落;分离菌16S rDNA核苷酸序列与GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌的同源性达到99.9%以上,菌株荚膜为A型;该菌对哌拉西林、头孢氨苄、庆大霉素等药物均表现为高度敏感;从病鸡中检测出圆圈病毒3型(GyV3)VP2基因,与GenBank(登录号MK089248)GyV3同源性最高(99.9%)。结果表明,该鸡场发生圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌引起的混合感染病例。

微生物发酵饲料对断奶仔猪生长性能的影响

[目的]研究微生物发酵饲料对仔猪生长性能的影响,为其推广和应用提供依据。[方法]选用60头体重约8～10 kg的杜×长×大三元杂交断奶仔猪,随机分为6栏,10头/栏。对照组饲喂无抗浓缩料和金霉素70 mg/kg,试验组为微生物发酵饲料添加组,饲喂无抗浓缩料和微生物发酵料。[结果]饲用微生物发酵饲料组比常规饲料组平均日增重提高了5.56%,而料重比降低了3.53%。此外,试验组粪便中有益菌群增多,pH值下降,与对照组结果差异显著(P<0.05)。[结论]微生物发酵饲料可代替抗生素添加饲料,并可起到促进仔猪健康生长的功效。

福建地区PRRSV分离株Nsp2基因新变异序列鉴定

为了解福建省2009年以来猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,本研究收集了福建省不同地区的14株PRRSV分离株,并对其Nsp2基因进行遗传变异分析。结果表明与参考病毒株VR-2332相比共有4种类型氨基酸的缺失和1种类型的氨基酸插入,3株分离株在472位～520位和533位～561位发生了不连续的78个氨基酸缺失;2株分离株472位～520位、533位～561位和593位～595位发生了不连续的81个氨基酸缺失;1株分离株在593位～595位发生了3个氨基酸的缺失;其余8个分离株的Nsp2蛋白存在第481位和533位～561位共30个氨基酸的不连续缺失,其中有1个分离株在599位～603位插入了5个氨基酸,同时又在481位和533位～561位发生了不连续的30个氨基酸的缺失,这是国内首次发现有氨基酸插入的病毒株。这些新的缺失和插入与PRRSV致病性及其与生物学特性的关系有待于进一步研究。

茶树精油纳米乳剂的制备及其质量评价

为了制备稳定性高的茶树精油(tea tree oil, TTO)纳米乳剂,并评价制备的TTO纳米乳剂的质量,试验采用高能剪切法制备TTO纳米乳剂,根据伪三元相图确定TTO纳米乳剂的最优配方。对采用最优配方制备的TTO纳米乳剂进行外观性状观察,采用染色法进行类型鉴定,使用pH计测定pH值,通过透射电子显微镜观察表面形貌,使用激光粒度仪测定粒径和电位,并考察其稳定性,利用二倍稀释法测定TTO纳米乳剂和TTO对巴氏杆菌和沙门氏菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:TTO纳米乳剂的最优配方为12.95%蓖麻油聚氧乙烯醚(EL-40)、6.5%聚乙二醇400(PEG-400)、8.33%TTO、72.22%纯化水。采用最优配方制备的TTO纳米乳剂为水包油(O/W)型乳剂,平均pH值为8.32,平均粒径为15.7 nm,表面电位为(-4.29±0.26)mV。将TTO纳米乳剂加水按1∶20~1∶120稀释,静置24 h后观察无分层或沉淀现象;4 000,6 000,8 000,10 000 r/min分别离心20 min后,纳米乳剂的外观性状无变化,也无沉淀、分层等现象产生。在不同温度(-20℃、4℃、25℃、40℃、60℃、80℃)下处理30 min后,其外观无明显变化,且60℃加热后其外观更透明,80℃加热后出现分层现象;在4℃下放置30 d后观察,无任何异常变化。用pH值为5,6,7,8,9的水溶液将TTO纳米乳剂分别按1∶100、1∶1 000、1∶10 000稀释后静置24 h观察,无沉淀或絮状物等产生。TTO纳米乳剂对巴氏杆菌和沙门氏菌的MIC值分别为39.65 mg/mL、29.74 mg/mL,优于未纳米乳化的TTO(对巴氏杆菌和沙门氏菌的MIC值均为49.57 mg/mL)。说明TTO纳米乳剂能够解决TTO易挥发、难溶于水等问题,制备的TTO纳米乳剂具有纳米级粒径且尺寸均一,稳定性强,易于储存,易溶于水,具有良好的抑菌性。

鬼针草提取物对PRRSV诱导炎症反应的抑制作用

为研究鬼针草提取物(BPE)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导炎症反应的抑制作用,以非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc-145)为研究对象,将其分为4个不同浓度(100、200、400和800μg/mL)BPE处理组、空白对照组和病毒对照组,通过观察细胞病变(CPE)和CCK-8法测定PRRSV感染后的细胞活力;实时荧光定量PCR(qPCR)检测BPE对PRRSV诱导Marc-145细胞IL-6、IL-8和TNF-α mRNA相对表达量的影响;将21日龄断奶仔猪分为空白组、病毒对照组、鬼针草高剂量组、中剂量组和低剂量组,空白组和病毒对照组饲喂基础日粮,给药组待仔猪出现临床症状后分别饲喂添加量为0.4%、0.8%和1.2%BPE的基础日粮,分别于第7、14、28天分离血清,使用ELISA试剂盒检测IL-6、IL-8和TNF-α含量,qPCR检测PRRSV载量,第28天剖检并采集肺脏进行组织病理学观察。结果显示,BPE可改善PRRSV诱导Marc-145细胞产生的病变,提高Marc-145细胞活力,有效降低PRRSV诱导的IL-6和TNF-α mRNA相对表达量;BPE能够降低攻毒仔猪血清中的炎症因子含量和PRRSV载量;肺脏组织病理学观察结果显示,病毒对照组仔猪的肺脏呈现典型的间质性肺炎,肺泡壁增厚,成纤维细胞增生,有大量炎性细胞浸润,肺中可见散在大小不一的出血灶,而各给药组仔猪肺脏的病理组织学变化有所改善。结果表明,BPE可通过抑制PRRSV诱导的炎症因子产生,降低PRRSV对仔猪肺脏的损伤。本试验结果可为鬼针草用于猪繁殖与呼吸综合征的临床治疗提供参考。

猪瘟病毒福建野毒分离株FJ-1E2基因序列分析

应用RT-PCR技术对福建省某一猪场采集的疑似猪瘟样品进行猪瘟病毒E2基因扩增,并对其核苷酸序列进行分析。结果表明,猪瘟野毒与标准参考毒株及国内分离株的同源性为81%～98.1%;遗传进化树分析表明流行野毒与中国C株存在很大差异;预测的抗原表位表明该野毒株与中国C株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示福建流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚待进一步的研究。

NLRP3炎症小体在PRRSV调控机体炎症中的作用

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害猪类养殖业的病毒,引起了广泛关注,炎症作为机体对PRRSV感染的主要反应之一,在病毒感染过程中发挥重要作用。NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体作为一种重要的细胞内炎症调节机制,在PRRSV感染中扮演着不可忽视的角色。本文重点综述NLRP3炎症小体对PRRSV感染机体炎症的调控作用,并探讨其在PRRSV防控中的潜在应用价值,为PRRSV感染的机制和治疗研究提供参考。

福建地区猪繁殖与呼吸综合征ORF7基因遗传变异分析

为了解福建地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的分子生物学特性与变异规律,收集了福建省不同地区的12株PRRSV,并对其ORF7基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区存在欧洲型PRRS和美洲型PRRS,10株为美洲型PRRSV,与VR-2332、JXA1等美洲型参考毒株的氨基酸的同源性为89.5%-100%,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为59.5%-63.6%。而FJ-11、FJ-12 2株分离株为欧洲型PRRSV,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为91.4%、92.2%,而与VR-2332、CH-1a等美洲参考毒株的氨基酸的同源性为60.3%-64.5%。美洲型PRRSV ORF7编码N蛋白氨基酸虽然发生了变异,但相对保守。

微生物发酵饲料工艺条件优化的研究

生产工艺条件影响着微生物发酵饲料的产量和质量,试验对一种微生物饲料发酵的淀粉原料组成与含量、物料含水量、发酵菌液pH、发酵温度和发酵时间等工艺条件进行了优化。结果表明,接种酿酒酵母（Sacharomyces cerevisiae）和乳酸菌（唾液链球菌嗜热亚种Streptococcus salivarius subsp.thermophilus）的最优发酵工艺条件为玉米淀粉250 kg、豆粕4 000 kg、淀粉酶0.85 kg、糖化酶0.30 kg、物料含水量34%~36%、发酵菌液pH 5.0、发酵温度30℃和发酵时间90 h。

一株鸡源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

从一例疑似沙门氏菌感染的发病鸡只中分离到一株细菌,对其进行培养特征、革兰氏染色、生化试验以及16S r DNA序列分析,并进一步对分离菌进行药敏试验。结果显示,该分离细菌在鲜血琼脂培养基中生长出灰白色、圆形、光滑、凸起的菌落,在SS琼脂培养基表现为中心黑色边缘半透明、圆形光滑菌落。革兰氏染色后可见革兰氏阴性短杆菌。生理生化试验结果符合沙门氏菌特征。PCR扩增出717 bp条带,经测序对比,与沙门氏菌基因同源性最高。药敏结果显示分离菌仅对头孢他啶表现敏感,对氨曲南表现中度敏感,对庆大霉素、新霉素等14种药物均表现为耐药。本研究为该地区沙门氏菌病的防治提供一定的参考。

地方本科院校动物生理学实验教学改革与实践初探

以培养高级应用型人才为目的,从教学方法、教学手段和实验教学评价体系等方面介绍了龙岩学院动物生理学实验课教学改革的探索与实践,即让学生自主准备实验、采用师生互助式教学手段、合理利用实验动物和建立完善的实验教学评价体系等多方面措施激发学生的学习兴趣,以培养学生的实际动手能力、独立解决问题的能力、科学的思维方法、严谨的科学态度和创新能力。

猪增生性肠炎诊断技术研究进展

猪增生性肠炎是由胞内劳森氏菌引起的一种肠道传染病,临床表现以慢性型及亚临床型为主。猪增生性肠炎易造成猪饲料转化率低,生长速度慢。猪增生性肠炎在全球猪场流行,其发病率呈上升趋势,造成了重大经济损失。目前,国内对该病的研究较薄弱,应引起足够的重视。作者综述了猪增生性肠炎的诊断技术研究进展。

动物科学专业《分子生物学》教学改革的探索

通过教学改革寻求适合专业特点的教学方法,提高教学质量,可为学生就业打好坚实专业基础。从教材选择、教学模式、实验教学及考核方式等方面对动物科学专业《分子生物学》教学改革进行了探讨。

新形势下《动物组织学与胚胎学》实验教学改革与实践

以提高实验教学效果、培养学生的创新能力为目的,从实验教学学风、教学方法和教学环境及考核评价体系等6个方面对新形势下《动物组织学与胚胎学》实验教学模式进行了改革与实践,以为培养适应社会需求的高素质的复合型、应用性人才和创新人才打下坚实基础。

副猪嗜血杆菌的不同血清型分析与药敏实验

对闽西地区12个猪场送检的疑似猪传染性副猪嗜血杆菌(HPS)病例,采用改良TSA培养基进行细菌的分离,并对其进行细菌的形态观察、培养特性、生化试验鉴定、血清分型鉴定、药物敏感性分析。结果表明在闽西地区12个送检的猪场中流行副猪嗜血杆菌主要为4型;真空冷冻干燥法可以作为HPS长期保存的方法;药物敏感性分析表明HPS对氨苄西林钠(金头孢)、氟苯尼考(嗜血康)、头孢噻呋钠、环丙沙星等药物极敏感。

厨余垃圾废液中解钾菌的筛选及液体菌肥制备

从厨余垃圾废液中筛选得到的一株高效解钾菌株LYBM04,解钾效率为65.67%,经16S rDNA确定其为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)。LYBM04菌株在LB培养基和解钾菌复筛培养基具有相似的生长曲线,但在解钾菌复筛培养基中整体速度稍慢。通过正交试验,确定了LYBM04菌株可与解磷菌、固氮菌以2∶2∶1(V/V)比例、接种量5%的最优条件下,接入到厨余废液中,30℃好氧发酵40 h制备出液体微生物菌肥,其总磷、氨氮、总氮、总钾等营养成分经过检测,比厨余垃圾废液含量更高,对盆栽玉米的株高、根长、根重均有显著的促生作用,在液态微生物菌肥的开发与应用方面具有一定的应用前景。