乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达

以α-aga基因为食品级选择标记构建了乳酸乳球菌食品级高效诱导细胞内和细胞壁锚定表达系统,并用这一表达系统表达了铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF/H。首先以pRAF800和pNZ8048构建了含有α-aga、PnisA-MCS-TpepN和θ复制子的乳酸乳球菌食品级细胞内诱导表达载体pRNA48,再以pRNA48和pVE5524为出发载体构建了含有α-aga、PnisA-SPUsp45-nucA-CWAM6-t1t2和θ复制子的乳酸乳球菌细胞壁锚定诱导表达载体pRNV48。然后以食品级载体pRNA48和pRNV48为基础,构建了不含抗生素抗性选择标记的铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因的表达质粒pRNA48-OprF/H和pRNV48-OprF/H。利用nisin进行重组乳酸乳球菌菌株的诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,检测到表达蛋白分别占细胞内可溶蛋白的9.6%和细胞壁锚定蛋白的9.8%,表达产物具有免疫原性,可与含OprF/H的乳球菌以及铜绿假单胞菌发生特异性的凝集反应。

棉籽蛋白提取工艺研究

以脱酚无毒棉籽粕为原料提取蛋白,研究了料液比(W/V)、pH、提取温度、提取时间对棉籽蛋白提取率的影响。在单因素实验分析基础上,进行了正交实验,对相关因素在不同水平上对结果的影响进行了分析。结合考虑实际操作的可行性,最终确定棉籽蛋白质最佳提取工艺条件为:料液比1∶25(W/V),提取液pH为11·5,50℃条件下浸提2h,蛋白质提取率达到83·40%,蛋白质纯度为94·91%。

PCR技术在食品动物源性检测中的应用

简述了PCR技术检测食品动物源性的基本原理和方法,并对近年来国内外专门用来检测食品动物源性的PCR技术作了简介,主要包括常规PCR、多重PCR、实时荧光定量PCR、定量竞争PCR和RAPD-PCR等。

乳酸乳球菌NICE系统食品级分泌表达载体pRNV48的构建及铜绿假单胞菌融合外膜蛋白的表达

乳酸菌NICE系统是目前较理想的可控制蛋白质生产的食品级诱导表达系统,而乳酸菌分泌表达异源蛋白比细胞质表达更优越。本研究将以pVE5524为模板PCR扩增的1.5 kbSPUsp45-NucA-CWAM6-t1t2基因克隆到食品级细胞内诱导表达载体pRNA48上,构建成食品级细胞壁锚定表达载体pRNV48,与宿主菌L.lactisNZ9000共同构成乳酸乳球菌食品级细胞壁锚定诱导表达系统。为检测该系统的功能,将铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF/H克隆进pRNV48中,并检测了OprF/H的表达量和免疫原性。

食品级高效诱导表达系统—NICE系统

乳酸菌NICE系统是在乳链菌肽诱导下由nisA启动子控制目的基因表达的,含nisR和nisK的两组分调节系统的高效诱导表达系统。由于NICE系统的诱导剂、宿主菌和载体都是食品级的,其应用前景十分广阔。

乳酸乳球菌两组分食品级NICE系统载体的构建

乳酸菌食品级NICE系统是目前较理想的可控制蛋白质生产的食品级诱导表达系统。本实验构建的食品级表达载体pRNA48含α-aga食品级选择标记、θ型复制子和nisA启动子,与宿主菌L.lactisNZ9000共同构成乳酸乳球菌食品级NICE系统,可用于目的基因在乳酸乳球菌中高效诱导表达。

共轭亚油酸碱催化法甲酯化条件研究

在共轭亚油酸高效液相色谱法分析中,通过单因素试验和响应面分析法,研究了NaOCH3-CH3OH甲酯化分析奶样中CLA的最佳条件。在单因素实验的基础上,以Box-Behnken响应面分析法(三因素三水平)优化甲酯化条件。实验结果表明:最适衍生化条件为NaOCH3-CH3OH添加量为8.56mL,温度为24.4℃,时间为12.8min。并以该条件对液态奶中的9c,11t-CLA含量进行了测定。

乳酸菌两组分食品级选择标记复制子缺失质粒的构建

乳酸菌NICE系统的两组分食品级选择标记具有显性和互补选择标记的优点。含红霉素抗性选择标记的复制子缺失的伴生型质粒是依赖复制子完全且无选择标记的食品级克隆载体而复制的。构建的伴生型质粒的Emr和rep分别来源于pMG36e和pRAF800,经酶切、缺刻、补平和连接得到只能在红霉素选择压力下与θ型复制子的克隆载体共存的复制子缺失伴生型质粒。

L.helveticus L7生物转化的共轭亚油酸异构体结构分析

利用HPLC分离出L.helveticusL7生物转化的2种CLA异构体单体,通过紫外光谱、傅立叶变换红外光谱、气相色谱-质谱联用分析,确定了L.helveticusL7生物转化形成的两种CLA异构体是t9t11-CLA和c/t-911-CLA。

galU基因在乳酸乳球菌中的克隆及其对胞外多糖产生的影响

从E.coli BL21克隆到UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)基因galU,与pNZ8048载体连接构建重组表达质粒pNZ8048-galU,进而导入乳酸乳球菌L.lactis L18中,得到重组菌L.lactisL18/pNZ8048-galU,研究galU插入对该菌产生胞外多糖的影响。结果显示,在含葡萄糖和乳糖(20∶20g/L)的MRS培养基中,重组菌L.lactisL18/pNZ8048-galU在30℃,pH6.5的条件下培养26h,EPS产量最高,为1489.54mg/L;而相同条件下,L.lactisL18培养28h产量最高,为848.93mg/L。二者相比,EPS产量增加了1.75倍。

共轭亚油酸对前脂肪细胞增殖分化的影响

培养前脂肪细胞3T3-L1,MTT法检测CLA对3T3-L1增殖的影响;以油红O染色检测3T3-L1分化过程胞内脂肪的堆积;同时采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CLA对过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)mRNA表达的影响。结果显示:t10,c12-CLA以及CLA混合物对前脂肪细胞3T3-L1增殖均有显著的抑制作用(P<0.05)。油红染色比色结果表明,t10,c12-CLA具有显著的抑制脂肪分化作用(P<0.05)。RT-PCR结果显示,在前脂肪细胞3T3-L1分化过程中,经100μmol/Lt10,c12-CLA和50μmol/Lt10,c12-CLA处理后PPARγ2 mRNA表达量分别为对照组的52.1%,83.0%。

稀释率对短乳杆菌NCL912连续培养产γ-氨基丁酸的影响

建立了短乳杆菌(Lactobacillus brevis)NCL912连续培养生产γ-氨基丁酸的方法。在32℃、pH 5.0、150r/min条件下,通过考察不同稀释率(0.06 h-1、0.08 h-1、0.10 h-1、0.12 h-1和0.14 h-1)时,连续培养体系中菌体浓度、葡萄糖利用和GABA产量3项指标的变化,研究了稀释率对连续培养的影响。结果表明,当稀释率为0.06 h-1和0.14 h-1时,培养不能达到稳态;当稀释率为0.08 h-1、0.01 h-1及0.12 h-1时,反应体系均能进入稳态。在考察的几个稀释率中,0.10 h-1最好。

酶联免疫吸附法(ELISA)在肉制品检测中的应用

介绍了酶联免疫吸附法(ELISA)的基本原理和肉制品检测所面临的问题,综述了ELISA在肉制品检测中的研究进展,主要包括ELISA用于肉制品中抗生素、激素、致病菌、中枢神经系统组织、辐照食品和肉的组成的检测。

过敏原在食品加工中的变化

食品过敏原的稳定性较好,在一定范围内能耐受加热、酶解等许多加工形式。该文介绍了几种加工方法对食物过敏原的影响。