结核病实验室的学生安全与生物安全事故防范对策

结核病实验室是进行结核分枝杆菌细菌学操作的必备场所,也是培养学生在结核病领域动手实践与科研创新能力的重要场所。通过宣传教育使学生明确结核病实验室的生物安全风险,并采取一系列的防控措施降低生物安全事故的发生风险,包括提高生物安全意识、制定严格的准入制度、重视个人防护装备、规范实验室操作以及开展生物安全防护模拟训练等,这些防控措施将有助于减少或是避免结核病实验室生物安全事故的发生。

结核病实验室的学生安全与生物安全事故防范对策

实验室生物安全是综合应用行政管理、预防措施，实验室操作规程、安全设备、应急预案和实验室设备等措施手段，使实验室工作人员能够安全处理具有潜在传染性的微生物的过程。结核病实验室是进行结核分枝杆菌细菌学操作的必备场所，也是实验室生物安全的重点防控对象。

GeneXpert MTB/RIF阳性RNA聚合酶β亚基基因突变的结核病患者中利福平耐药决定区突变特征研究

目的:通过分析GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)阳性RNA聚合酶β亚基(rpoB)基因突变的结核病患者中rpoB基因探针的突变分布与频率,阐述利福平耐药决定区的突变特征。方法:连续纳入2019年6月至2020年6月就诊于首都医科大学附属北京胸科医院的Xpert检测阳性且rpoB基因突变的682例结核病患者,其中肺结核618例,肺外结核64例。收集患者临床检测标本,其中痰液465份,支气管肺泡灌洗液153份,脓液37份,胸腔积液19份,便标本7份,脑脊液1份。分析所有Xpert阳性标本中结核分枝杆菌(MTB)的半定量结果及rpoB基因探针的突变分布情况。结果:682份标本中,MTB含量半定量水平为高占6.45%(44/682),中占25.07%(171/682),低占25.51%(174/682),极低占42.96%(293/682)。肺外结核标本中MTB含量半定量极低水平高于肺结核标本[分别为64.06%(41/64)和40.78%(252/618)],差异有统计学意义(χ^(2)=12.83,P<0.001)。标本涂阳率在MTB含量半定量水平为高、中、低和极低水平的标本中分别为84.62%(33/39),64.02%(105/164),27.27%(42/154)和7.84%(20/255)。rpoB基因单探针突变率为92.82%(633/682),双探针突变率为6.89%(47/682),三探针突变率为0.29%(2/682)。单探针突变的标本中,突变率最高的为探针E(74.34%,507/682),其次为探针D(8.80%,60/682);双探针突变的标本中,突变率最高的为探针D+E(4.25%,29/682),其次为探针A+B(1.76%,12/682);2例三探针突变均为探针A+D+E。结论:Xpert阳性rpoB基因突变MTB中以单探针突变为主,在肺结核和肺外结核中最常见的突变探针均为探针E和探针D。

对硝基苯甲酸鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的机制研究

目的研究对硝基苯甲酸(PNB)鉴别结核分枝杆菌复合群(MTC)与非结核分枝杆菌(NTM)的机制。方法应用高压液相色谱(HPLC)和液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS)鉴定5株MTC标准株和33株NTM标准株的PNB代谢产物。结果 33株NTM标准株均可将PNB还原为对氨基苯甲酸(PABA),而5株MTC标准株则不具备该能力。结论 PABA是PNB的代谢产物之一。NTM能将PNB还原为细菌可利用的PABA,因此能够耐受PNB;MTC不具备该能力,因而不能耐受PNB。这可能就是PNB选择性培养基用于鉴别MTC与NTM的机制。

首次复治敏感肺结核治疗新方案疗效的验证性研究

目的:分析复治肺结核治疗新方案(简称“新方案”)与复治标准方案(简称“标准化方案”)治疗首次复治敏感肺结核的有效性及安全性。方法:采用多中心前瞻性队列研究方法,选取2019年1月至2021年12月期间在中国14个省及3个直辖市中的24家结核病定点医疗机构住院确诊的592例首次复治肺结核患者(包括敏感、单耐药、多耐药及部分菌阴复治肺结核),将患者随机纳入新方案组[4H-L_(2)-E-Z-Lfx/4H-L_(2)-E;H:异烟肼(体质量<50 kg,0.3 g/d;体质量≥50 kg,0.4~0.5 g/d),L:利福喷丁(0.6 g/次,2次/周),E:乙胺丁醇(体质量<50 kg,0.75 g/d;体质量≥50 kg,0.75~1.0 g/d),Z:吡嗪酰胺(1.5 g/d),Lfx:左氧氟沙星(0.5~0.6 g/d)]和标准化方案组(3H-R-E-Z/6H-R-E,常规剂量;R:利福平)。本研究参照纳排标准选取其中首次复治敏感肺结核患者(均为涂阳培阳)为研究对象,比较新方案组患者和标准化方案组的治疗成功率、失败率、不良反应发生率等,以评估新方案在复治敏感肺结核患者中的有效性及安全性。结果:共纳入首次复治敏感肺结核患者238例,其中新方案组172例(72.3%),标准化方案组66例(27.7%)。新方案组治疗成功率[77.3%(133/172)]高于标准化方案组[62.1%(41/66)],治疗失败率[4.7%(8/172)]低于标准化方案组[27.3%(18/66)],差异均有统计学意义(χ^(2)=5.609,P=0.018;χ^(2)=25.083,P=0.000),但两组患者不良反应发生率[4.7%(8/172)和3.0%(2/66)]差异无统计学意义(Fisher精确概率法,P=0.731)。结论:新方案可提高首次复治敏感肺结核的治疗成功率及降低治疗失败率,总体治疗效果及安全性均较好。

中国肺结核患者中牛分枝杆菌的感染状况研究

【摘要】目的是确定牛分枝杆菌在中国肺结核患者中的感染状况。菌株源为2007-2009年全国耐药基线调查分离到的4069株分枝杆菌，首先通过对硝基苯甲酸培养基（PNB）和噻吩-2羧酸肼培养基（TCH）进行菌种初步鉴定，然后同时采用spoligotyping技术和多位点PCR技术进行牛分枝杆菌的鉴定。

对硝基苯甲酸鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的机制研究

目的 研究对硝基苯甲酸（PNB）鉴别结核分枝杆菌复合群（MTC）与非结核分枝杆菌（NTM）的机制。方法应用高压液相色谱（HPLC）和液相色谱串联质谱法（LC／MS／MS）鉴定5株MTC标准株和33株NTM标准株的PNB代谢产物。结果33株NTM标准株均可将PNB还原为对氨基苯甲酸（PABA），而5株MTC标准株则不具备该能力。结论PABA是PNB的代谢产物之一。NTM能将PNB还原为细菌可利用的PABA，因此能够耐受PNB；MTC不具备该能力，因而不能耐受PNB。这可能就是PNB选择性培养基用于鉴别MTC与NTM的机制。

分光光度计鉴别结核与非结核分枝杆菌的研究

目的建立并评估应用分光光度计测定对氨基苯甲酸(PABA的浓度,快速鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)的方法。方法首先建立应用分光光度计测定PABA浓度的方法,然后以传统含对硝基苯甲酸(PNB)罗氏培养基鉴定结果为参照,应用32株MTB临床分离株和33株NTM临床分离株评价该方法的准确性。结果以PABA浓度0μg/mL定为cut-off值,还原PNB产生PABA的浓度大于0μg/mL判定为NTM,小于0μg/mL判定为MTB,应用分光光度计测定PABA浓度法鉴定32株MTB临床分离株和33株NTM临床分离株的结果与传统鉴定法完全一致,其灵敏性和特异性均为100%。结论本研究建立了应用分光光度计测定PABA浓度快速鉴别MTB与NTM的方法,该方法简便、快速、廉价,并具有高度的特异性和敏感性,可作为鉴别MTB与NTM的有价值的检测手段。

结核分枝杆菌对吡嗪酰胺耐药相关研究进展

吡嗪酰胺（pyrazinamide，PZA）为一种烟酰胺类似物，是结核病化疗的重要药物之一，能够杀死处于半休眠期的MTB，从而将结核病的治疗周期从9～12个月缩减至6个月。

231例脊柱结核患者耐药情况分析

目的:分析231例脊柱结核患者的耐药特点,为临床医生制定脊柱结核治疗方案提供参考。方法:回顾性分析2016年1月至2021年12月首都医科大学附属北京胸科医院收治的231例脊柱结核住院患者信息,采用分枝杆菌微孔板药物敏感性检测技术测定来自231例脊柱结核患者的结核分枝杆菌对链霉素(Sm)、异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、利福喷丁(Rft)、左氧氟沙星(Lfx)、阿米卡星(Am)、卷曲霉素(Cm)、丙硫异烟胺(Pto)、对氨基水杨酸异烟肼(Pa)、莫西沙星(Mfx)、对氨基水杨酸(PAS)、克拉霉素(Clr)、利福布汀(Rfb)、卡那霉素(Km)和氯法齐明(Cfz)的敏感性。结果:脊柱结核患者对16种药物的总耐药率为34.63%(80/231),复治患者的总耐药率(75.44%,43/57)显著高于初治患者(21.26%,37/174),差异有统计学意义(χ^(2)=55.660,P<0.001)。脊柱结核患者任一耐药率顺位为:Sm(24.68%,57/231)>INH(22.51%,52/231)>Rft(19.05%,44/231)>RFP(18.18%,42/231)>Pa(15.58%,36/231)>Rfb(13.85%,32/231)>Lfx(7.79%,18/231)>PAS(7.36%,17/231)>Cm(5.63%,13/231)>Km(4.76%,11/231)=Cfz(4.76%,11/231)>Pto(4.33%,10/231)=Clr(4.33%,10/231)>EMB(3.90%,9/231)>Am(3.46%,8/231)>Mfx(2.60%,6/231)。脊柱结核患者多耐药率为11.69%(27/231),复治患者的多耐药率(19.30%,11/57)显著高于初治患者(9.20%,16/174),差异有统计学意义(χ^(2)=4.246,P=0.039);耐多药率为15.58%(36/231),复治患者的耐多药率(52.63%,30/57)显著高于初治患者(3.45%,6/174),差异有统计学意义(χ^(2)=46.980,P<0.001)。结论:脊柱结核存在严重的耐药问题,临床医生应根据患者药物敏感性试验结果制定有效的治疗方案。

浅谈如何提高医学研究生的SCI论文写作能力

SCI论文撰写能力的培养是研究生科研素质培养的重要组成。结合自己的带教经验,重点从SCI论文的基本组成和写作能力培养途径两个方面进行探讨,认为在医学研究生的培养过程中,通过医学论文写作和医学统计学课程的开设、SCI论文研读报告的开展、实验进展总结汇报等几个方面展开教学,有利于提高医学研究生的SCI论文写作能力。

SYBR Green I荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

目的基于SYBR Green I荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium.MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插人序列ISI311为检测靶标设计引物,在60 C的退火温度下,建立鉴定MA的SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA.检测限为5.6x 102 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列ISI311为基础建立的SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。