miR-193a-3p/E2F6调控细胞焦亡在鼻咽癌中的机制研究

目的探讨miR-193a-3p/E2F6在鼻咽癌(NPC)中对细胞焦亡的调控作用及其潜在的分子机制。方法双荧光素酶基因报告实验评估了miR-193a-3p对E2F6的靶向调控作用。HNE-2细胞分为不同处理组:对照组、空白质粒组、沉默E2F6质粒组、空白质粒(miRNA)组、过表达miR-193a-3p组、过表达miRNA+空白(E2F6)质粒组以及过表达miRNA+过表达(E2F6)质粒组。通过qPCR检测miR-193a-3p的表达水平,Western blot检测E2F6蛋白的表达以及NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路的激活情况。同时,使用扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察细胞形态,CCK-8法评估细胞增殖情况,进行集落形成实验和Transwell实验来检测细胞集落形成数量和迁移数量。结果与对照组(0.90±0.02)和空白质粒组(0.88±0.02)相比,沉默E2F6质粒组中E2F6蛋白(0.26±0.02)的表达水平显著降低,NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路明显被激活,SEM显示细胞发生肿胀。CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均下降(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实E2F6是miR-193a-3p的靶基因。同对照组(1.01±0.03,1.02±0.02)和空白质粒(miRNA)组(1.02±0.04,0.21±0.03)相比,过表达miR-193a-3p组(2.02±0.32,0.23±0.02)中的miR-193a-3p的表达水平升高,E2F6的表达水平显著降低。而NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路明显被激活,SEM显示细胞发生肿胀。CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均下降(P均<0.05)。同过表达miR-193a-3p组和过表达miRNA+空白(E2F6)质粒组相比,发现过表达miR-193a-3p结合过表达E2F6组中E2F6蛋白的含量上升,NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N蛋白的含量下降,SEM显示细胞肿胀减轻,CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均上升(P均<0.05)。结论miR-193a-3p通过靶向抑制E2F6激活NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N通路,诱导NPC细胞发生细胞焦亡,并抑制其增殖、克隆和侵袭。

DACT1甲基化作为局部晚期鼻咽癌潜在生物标志物的临床研究

目的 分析Dapper1/Dpr1(DACT1)甲基化作为局部晚期鼻咽癌(NPC)预后生物标志物的可行性。方法 收集2018年6月~2021年3月黄石市中心医院耳鼻咽喉科保存的112例局部晚期NPC患者的肿瘤石蜡标本,采用焦磷酸测序分析DACT1甲基化状态,分为甲基化组(n=51)和非甲基化组(n=61)。随访记录患者的总生存期(overall survival,OS)。结果NPC细胞系中DACT1的甲基化依赖转录沉默。甲基化阳性在c T3~4级的患者中更为常见(P<0.001)。DACT1甲基化和非甲基化患者OS无差异(Log rank χ~2=0.066,P=0.797)。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)低表达者OS时间长于EGFR高表达者(Log rank χ~2=57.289,P<0.001),且在EGFR低表达患者中,DACT1非甲基化患者的OS较甲基化患者更长(Log rank χ~2=8.524,P=0.004)。Cox回归分析显示,DACT1-甲基化/高EGFR是影响局部晚期NPC患者OS的独立危险因素(P<0.001)。结论 对于EGFR低表达局部晚期NPC患者,DACT1非甲基化状态与更好的生存率相关。

缺氧环境下GAPDH通过抑制铁死亡增强喉鳞状细胞癌恶性生物学行为和顺铂耐药性研究

目的探讨缺氧环境下磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)调控喉鳞状细胞癌(简称喉癌)铁死亡、恶性生物学行为和顺铂耐药性中的作用。方法人喉癌细胞系Hep-2和TU212在体外进行培养,分别在缺氧(1%O_(2))和常氧(21%O2)条件下进行无血清培养。Hep-2细胞分为5个实验组:DMSO对照组、Erastin组、缺氧+Erastin组、缺氧+Erastin+NC-GAPDH组和缺氧+Erastin+si-GAPDH组,以研究细胞在不同实验条件下的反应。使用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白免疫印迹法(WB)分析各组细胞系GAPDH的mRNA和蛋白表达水平。细胞计数试验(CCK-8)、集落形成实验和Transwell侵袭实验用于评估各组喉癌细胞活力、增殖能力和侵袭能力。CCK-8实验用来测定细胞对不同浓度顺铂(5、15、20μg/ml)的耐药性。试剂盒法评估细胞内丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的水平。WB检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathioneperoxidase4,GPX4)和4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)蛋白表达水平。同时,使用Fe2+探针和活性氧簇(ROS)荧光探针检测细胞内Fe2+含量及ROS水平,透射电子显微镜用于观察线粒体形态变化,以评估铁死亡发生情况。结果与常氧条件相比,缺氧显著增强Hep-2和Tu212细胞中GAPDH mRNA和蛋白的表达(P均<0.05),在缺氧条件下,细胞的集落形成数量、迁移数量以及在15μg/ml和20μg/ml顺铂处理下的细胞活力显著上升,均高于常氧组(P均<0.05)。GAPDH被沉默后,缺氧引起的这些增强效果得到逆转。在常氧条件下,与DMSO对照组相比,Erastin处理显著降低Hep-2细胞的集落形成数量、迁移数量以及在15μg/ml和20μg/ml顺铂处理下的细胞活力(P均<0.05),但在缺氧条件下,Erastin的抑制作用有所减弱。此外,缺氧+Erastin+si-GAPDH组的集落形成数、迁移数以及在15μg/ml和20μg/ml顺铂处理下的细胞活力显著低于缺氧+Erastin+NC-GAPDH组(P均<0.05)。结论在缺氧环境下,沉默GAPDH能够逆转喉癌细胞铁死亡抑制过程,进而抑制其恶性生物学行为和顺铂耐药性。

3-溴丙酮酸对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度的3-BrPA处理CNE-1细胞,24 h后CCK-8法检测细胞增殖活性,PI染色法流式检测细胞凋亡情况,Western blot检测mTOR和S6及其相应磷酸化蛋白的表达水平。结果 50、100、150 μmol/L的3-BrPA处理细胞24 h,其增殖活性分别为(71.13±1.56)%、(33.32±2.47)%、(15.24±1.74)%,与对照组(97.67±1.21)%相比,均显著降低(t=23.28、41.17、67.37,P<0.05);细胞凋亡率分别为(5.75±1.43)%、(16.86±3.48)%、(54.67±7.49)%,显著高于对照组(4.24±0.56)%(t=-3.08、-6.20、-10.83,P<0.05),3-BrPA能下调mTOR和S6及其相应磷酸化蛋白的表达。3-BrPA显著下调mTOR和S6及相应磷酸化pmTOR和pS6蛋白表达,差异有统计学意义(t=3.08、3.41、2.85、3.23,P<0.05)。结论 3-BrPA抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖,并诱导凋亡,其机制可能与抑制mTOR/S6信号通路有关。

低温等离子刀扁桃体切除术疗效的Meta分析

目的评价低温等离子刀扁桃体切除术和传统扁桃体剥离术的疗效及安全性。方法检索2000-2013年Pub Med、EMbase、万方数据库、中国知网中关于低温等离子刀扁桃体切除术的随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs),对纳入研究应用考克兰系统评价数据库(Cochrane Database of Systematic Reviews)标准进行评价,对符合标准的文献用Review manager 5.1软件进行Meta分析。结果 14个RCTs共1 240例患者纳入研究,其中观察组(低温等离子刀扁桃体切除术)607例,对照组(传统扁桃体剥离术)633例。Meta分析结果提示,观察组术中出血量低于对照组[Md=-2.36,95%CI(-2.56^-2.17),P<0.001];手术时间较对照组短[Md=-2.16,95%CI(-2.33^-1.99),P<0.001];两组术后出血发生率差异无统计学意义[MD=0.54,95%CI(0.25~1.17),P>0.05]。结论低温等离子刀扁桃体切除疗效要优于传统扁桃体剥离术。但两者在术后出血发生率上无统计学差异。

学龄前儿童听力损失的原因及干预效果分析

目的探讨学龄前儿童听力损失的原因、干预方法及效果。方法以黄石地区72例(96耳)确诊听力损失儿童为研究对象,其中分泌性中耳炎47例(67耳),感音神经性聋22例(26耳),单侧外耳道闭锁3例,分别给予相应干预,分泌性中耳炎患儿中,22例(34耳)行鼓膜置管术,2例(4耳)行鼓膜置管+腺样体切除术,2例(2耳)行鼓膜置管+腺样体切除+皮下特异性免疫治疗,21例(27耳)行生理海水鼻腔冲洗、口服黏液促排剂、玻式球吹张。感音神经性聋患儿中,12例(14耳)佩戴助听器,2例(4耳)行人工耳蜗植入,余8例(8耳)单侧感音神经性聋和3例单侧外耳道闭锁患儿暂时观察。结果47例(67耳)分泌性中耳炎患儿经过干预治疗后,13例中耳功能及听力恢复正常,23例患儿有不同程度好转,但是仍有11例(15耳)患儿无明显改善。14例感音神经性聋患儿配戴助听器或植入人工耳蜗后6、12个月听觉言语能力评估得分分别为69.09%±3.19%,74.07%±4.25%,较干预前(40.71%±7.44%)明显提高(P<0.05)。61例给予干预的患儿总体干预有效率为81.97%(50/61)。结论本组学龄前儿童听力损失原因主要为分泌性中耳炎和不同程度的感音神经性听力损失;鼓膜置管对分泌性中耳炎治疗效果明显,助听器或人工耳蜗植入能提高感音神经性聋患儿的听觉功能。

不同部位甲强龙局部注射治疗低频下降型突发性聋伴2型糖尿病的效果比较

目的对比研究耳后注射与鼓室内注射甲强龙治疗低频下降型突发性聋伴2型糖尿病的效果、并发症及对血糖的影响。方法选取2016年1月~2018年6月我院收治的72例伴2型糖尿病的低频下降型突发性聋患者,简单随机化法分为鼓室注射组与耳后注射组各36例。两组均行常规治疗,在此基础上,鼓室注射组、耳后注射组分别予以甲强龙行鼓室内、耳后注射。比较两组患者的临床疗效、不良反应。结果耳后注射组总有效率80.56%,鼓室注射组的总有效率66.67%,耳后注射组总有效率高于鼓室注射组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗14 d后两组的听力阈值均低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);耳后注射组的听力提高值高于鼓室注射组,差异有统计学意义(P<0.05)。耳后注射组无鼓膜穿孔的风险,耳后注射组局部疼痛及一过性眩晕的发生率分别为22.22%、5.56%,鼓室注射组为63.89%、27.78%,鼓室注射组局部疼痛的比率及一过性眩晕的发生率均高于耳后注射组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论耳后注射甲强龙治疗伴2型糖尿病的低频下降型突发性聋患者效果较好,不良反应小,简单实用,可在临床中推广与应用。

鼻咽癌组织中细胞焦亡相关蛋白NLRP3/Caspase-1/GSDMD表达以及同复发转移关系研究

目的探究NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱天冬氨酸蛋白酶1(cysteine-aspartic acid protease 1,Caspase-1)和消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达以及其同NPC复发转移的关系。方法回顾性分析2014年12月至2020年1月黄石市中心医院确诊为NPC的421例病例资料,其中男262例,女159例,年龄18~88岁。通过免疫组化和多重免疫荧光染色法观察NLRP3、Caspase-1和GSDMD在病理标本中的表达。结合随访资料,应用单因素和多因素Cox回归分析NPC复发转移的影响因素。此外,使用NPC细胞系HNE-2进行体外实验,探究NLRP3、Caspase-1和GSDMD的功能机制。结果多因素分析显示,Ⅲ~Ⅳ期肿瘤分期(HR_(复发)=2.74,95%CI_(复发):1.61~4.65;HR_(转移)=1.90,95%CI_(转移):1.04~3.49)和治疗前血浆EBV-DNA≥1500 copies/ml(HR_(复发)=1.91,95%CI_(复发):1.13~3.23;HR_(转移)=2.07,95%CI_(转移):1.23~3.50)是NPC患者发生复发和转移的独立危险因子,而NLRP3(HR_(复发)=0.17,95%CI_(复发):0.08~0.35;HR_(转移)=0.30,95%CI_(转移):0.15~0.59)、Caspase-1(HR_(复发)=0.32,95%CI_(复发):0.18~0.59;HR_(转移)=0.43,95%CI_(转移):0.25~0.76)和GSDMD(HR_(复发)=0.48,95%CI_(复发):0.25~0.91;HR_(转移)=0.96,95%CI_(转移):0.53~1.74)的阳性表达则是独立保护因子;年龄(HR=1.02,95%CI:1.01~1.04)和调强放疗(HR=0.51,95%CI:0.30~0.88)是NPC患者复发独立影响因子,化疗(HR=0.50,95%CI:0.29~0.88)则是NPC转移的独立保护因子(P值均<0.05)。三者阳性表达的NPC患者局部-区域性无复发生存期、远处无转移生存期以及总生存期均高于三者阴性表达者(P值均<0.05)。体外实验中,蛋白免疫印迹法(WB)分析揭示,NLRP3的过表达可以激活NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路。酶联免疫吸附试验和扫描电镜显示,NLRP3的过表达能促进HNE-2细胞的焦亡。细胞功能分析进一步证实,NLRP3的过表达能显著抑制HNE-2细胞的增殖、侵袭和转移能力。结论NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达阳性是NPC患者复发转移的独立保护因子,能够通过促进细胞焦亡发生而抑制NPC增殖、侵袭和转移。

鼻腔恶性颗粒细胞瘤1例

1病例报告患者,男,51岁,因＂右鼻腔间断出血半年＂入院。每次出血量约数滴,自止,伴鼻塞、脓涕,无头痛及其他不适。体检：口唇尚红润,右侧下鼻道中后段可见红色新生物充填,表面尚光滑,质韧,触之极易出血。鼻窦CT示：右下道占位,各窦壁骨质无破坏。各项术前常规检查均未见异常。因新生物出血明显，首先高度怀疑血管瘤，故未取活检，1周后在鼻内镜下行右鼻腔新生物摘除术，术中见新生物来源于右下甲后端，质脆（图1），术中出血约30ml。术后病理检查示：恶性颗粒细胞瘤（图2）。因患者拒绝进一步治疗，伤口恢复后出院。已随诊1年无复发。

低温等离子刀联合匹多莫德治疗复发性小儿喉乳头状瘤的疗效分析

目的:研究低温等离子刀联合匹多莫德对小儿喉乳头状瘤的治疗效果。方法:对黄石市中心医院及武汉市儿童医院2009-2014年诊疗的小儿喉乳头状瘤43例完整随访病历资料进行分析。根据治疗方法分为CO2激光联合匹多莫德组(A组)及低温等离子刀联合匹多莫德组(B组)。记录不同方法治疗后患儿肿瘤复发情况,统计复发率和复发时间,并运用解剖划分法,以此作为不同方法治疗的疗效指标。结果:两组复发率统计学无差异(61.90%vs 59.09%)(P>0.05),但B组复发时间[(8.13±1.17)月]要长于A组[(6.21±1.08月])(P<0.05);两组术前平均解剖亚区为(3.85±1.45)和(3.64±1.57),两组之间无统计学意义(P>0.05),术后3月和6月A组平均(1.82±0.98)和(2.52±1.18)个解剖亚区,B组平均(1.28±0.69)和(1.88±0.79)个解剖亚区,B组均要少于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:低温等离子刀联合匹多莫德治疗小儿乳头状瘤,能够有效延长肿物复发时间,使乳头状瘤复发范围较小,值得在临床上推广应用。