2016年~2022年福建地区猪流行性腹泻病毒S基因的遗传变异分析

为了解2016年~2022年福建地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行现状及遗传变异情况,本研究对从福建地区采集的231份疑似猪流行性腹泻(PED)发病仔猪病料样品经RT-PCR进行PEDV的检测,选取不同地区22份PEDV阳性样品经PCR扩增S基因并测序,采用MegAlign分析PEDV S基因及其编码氨基酸序列的相似性,采用MEGA7.0软件构建其系统发育树,采用MegAlign分析S基因编码氨基酸序列的分子特征,分别利用RDP4、SimPlot、MEGA7.0软件进行S基因的重组分析,并利用BEAST软件进行该基因分歧时间估算。结果显示,福建地区PEDV总阳性率为51.51%(119/231),福建5个不同地区PEDV阳性率为40.00%~63.16%。从22份PEDV阳性样品中获得19条PEDV S基因序列,全长4149 bp~4161 bp,共编码1382 aa~1386 aa,19株PEDV S基因序列及其编码氨基酸序列之间相似性分别为94.4%~100%和93.8%~100%。19株PEDV S基因系统发育分析结果显示,其中18株PEDV属于GIIb亚型,1株属于GIb亚型。S蛋白氨基酸序列分析结果显示,与经典疫苗株CV777相比,18株GIIb亚型PEDV S蛋白的氨基酸序列在aa55~aa56、aa135~aa136和aa155~aa156处存在插入与缺失,具有典型的PEDV变异株的分子特征;其中14株还出现了独特的aa1193缺失。与GII型疫苗株AJ1102相比,19株PEDV S1区氨基酸突变率为60.00%~83.82%,其中18株GIIb亚型PEDV S1区氨基酸突变位点中有10个位于S蛋白重要结构域;基因重组分析结果显示,有3株PEDV S基因存在重组事件,其中FJLY01-2018株由GD-B株和CH-S株重组而来,FJLY02-2018株由CH/HNPJ/2017株和PEDV4-S-3株重组而来,FJLY03-2022株由PEDV-1931-1-Valladolid-Molpeceres株和HUA-M17株重组而来;S基因分歧时间估算结果显示,福建地区GIIa亚型、GIIb亚型、GIa亚型及GIb亚型PEDV的最早分歧时间约为1995年、2009年、2010年和2011年。上述结果表明福建地区PEDV流行率较高,田间流行株基因型具有多样性,且存在重组现象,临床上应予以高度重视。本研究为福建地区PED的流行病学调查及免疫防控提供了参考。

五株华南虎源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为了解福建省梅花山繁育研究所华南虎潜在病原菌的携带情况并分析相关生物学特性,本研究对2018—2021年从梅花山华南虎繁育研究所采集的104份华南虎组织、粪便、肛门拭纸、鼻拭纸进行细菌分离,并对分离菌进行生化鉴定、16S rRNA序列扩增、毒力基因检测、致病性试验、药敏试验。结果显示,通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、16S rRNA序列分析,确定从104份华南虎样本中分离到5株弗氏柠檬酸杆菌;5株分离菌16S rRNA序列的相似性为99.3%~99.7%,与其中18株不同来源的弗氏柠檬酸杆菌的相似性为98.3%~99.9%;遗传进化分析结果显示,5株分离菌与18株弗氏柠檬酸杆菌位于同一进化分支,亲缘关系较近;毒力基因检测结果显示,FJ/Tiger-1803、FJ/Tiger-1804、FJ/Tiger-1806、FJ/Tiger-1807株均携带ureD、ureE、ureABC基因,FJ/Tiger-1805株仅携带ureD、ureE基因;小鼠致病性试验结果显示,在相同浓度(1×10^(9) CFU/mL)下腹腔注射感染健康小鼠,FJ/Tiger-1803、FJ/Tiger-1806、FJ/Tiger-1804、FJ/Tiger-1807、FJ/Tiger-1805株对小鼠的致死率分别为100%、100%、80%、80%和0;药敏试验结果显示,分离菌株对14种抗生素具有不同的耐药性,其中对阿莫西林、青霉素G、万古霉素和红霉素的耐药性最强,且呈现多重耐药现象。综上,本研究从不同华南虎样本中分离获得了5株对小鼠具有较强致病性且耐药严重的华南虎源弗氏柠檬酸杆菌,临床上应引起重视。