肉鸡圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌混合感染的检测与分析

为查明福建省龙岩市某鸡场肉鸡消瘦、呼吸困难、病死率升高原因,对发病鸡进行细菌分离鉴定、16S rDNA鉴定、荚膜分型检测、药物敏感试验等分析;以及进行病毒核酸PCR检测、遗传进化分析。结果显示,从病鸡中分离的细菌在血平板上形成圆形、微突起、表面光滑、奶油状的菌落;分离菌16S rDNA核苷酸序列与GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌的同源性达到99.9%以上,菌株荚膜为A型;该菌对哌拉西林、头孢氨苄、庆大霉素等药物均表现为高度敏感;从病鸡中检测出圆圈病毒3型(GyV3)VP2基因,与GenBank(登录号MK089248)GyV3同源性最高(99.9%)。结果表明,该鸡场发生圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌引起的混合感染病例。

微生物发酵饲料工艺条件优化的研究

生产工艺条件影响着微生物发酵饲料的产量和质量,试验对一种微生物饲料发酵的淀粉原料组成与含量、物料含水量、发酵菌液pH、发酵温度和发酵时间等工艺条件进行了优化。结果表明,接种酿酒酵母（Sacharomyces cerevisiae）和乳酸菌（唾液链球菌嗜热亚种Streptococcus salivarius subsp.thermophilus）的最优发酵工艺条件为玉米淀粉250 kg、豆粕4 000 kg、淀粉酶0.85 kg、糖化酶0.30 kg、物料含水量34%~36%、发酵菌液pH 5.0、发酵温度30℃和发酵时间90 h。

微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析

通过比较分析羟基联苯比色法、EDTA定钙法、乳酸脱氢酶法3种检测方法的准确性、简便性、经济性,找到适合于测定微生物发酵饲料中乳酸含量的方法。试验结果表明,乳酸脱氢酶法检测的准确性最好、迅速,但成本高;EDTA定钙法检测虽然简便、迅速,但准确性最差;羟基联苯比色法检测效果居中,较为准确和方便。因此,乳酸脱氢酶法适合于高精度、高效率的检测;EDTA定钙法适合于迅速简便、精度要求不高的检测;羟基联苯比色法可作为企业或科研单位精度要求不高的常规检测。

圆圈病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立一种检测圆圈病毒3型(Gyrovirus 3,GyV3)的TaqMan荧光定量PCR方法,为GyV3提供快速便捷的检测技术手段。【方法】根据NCBI数据库中GyV3 VP2基因保守区序列,设计一对特异性检测引物和一条标记FAM荧光基团的探针,经过条件优化,建立用于检测GyV3的TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性以及模拟样品的检测试验。【结果】该方法灵敏性高,最低检测限度为1.585 copies·μL^(−1);特异性强,对其他常见禽病原不发生非特异性反应;重复性好,批内和批间变异系数均小于1%;对鸡肝脏组织DNA加入重组质粒制备的模拟样品同时进行TaqMan荧光定量PCR与SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测,均扩增出与预期相符的扩增曲线。【结论】首次建立用于检测GyV3的TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法,具有灵敏性高、特异性强、重复性好等优点,为GyV3的诊断和流行病学调查提供了技术支持。

沙门氏菌耐药机制研究进展

沙门氏菌是一种常见的人畜共患病病原,其繁殖速度快,传播途径多。由于养殖业中抗生素大量的不规范使用,沙门氏菌对抗生素的耐受性日趋严重,不断出现多重耐药的现象,严重阻碍了养殖业的发展,危害公共健康安全。本文综述近年来沙门氏菌耐药机制的研究进展,旨在为今后沙门氏菌病的防治提供理论参考。

银杏叶提取物的免疫调节作用研究进展

银杏叶提取物是一种具有广泛生物学功能的活性物质。该文从免疫器官重量、单核巨噬细胞与自然杀伤细胞、体液免疫、细胞免疫、细胞因子以及红细胞免疫、粘膜免疫等方面综述了银杏叶提取物的免疫调节作用。

1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的分离鉴定及基因组序列分析

【目的】研究1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的基因组信息。【方法】采用厌氧培养法,通过乳酸分解培养基(LADM)初筛、梭菌增殖培养基(RCM)复筛,从饲喂乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离利用乳酸快、丁酸转化率高的菌株,对所筛选的菌株进行形态鉴定、16S rDNA序列分析、乳酸转化特性试验、基因组重测序和框架图测序,并对其编码蛋白进行功能注释。【结果】分离得到1株分离菌LY33,基于形态和16S rDNA序列分析鉴定为丁酸梭菌。菌株LY33对乳酸具有较好的利用能力,在生长第6天可将66 mmol的乳酸基本转化完全,生成17 mmol左右的丁酸。LY33菌株的重测序表明,其编码基因整体变异较小,与参考基因组相比,LY33菌株全基因组杂合比率为0.022‰,单核苷酸多态性(SNP)位点变异总数21590个(占整个基因组0.4666%),插入缺失(InDel)突变总和594个(占0.0128%),不存在拷贝数变异(CNV),结构变异(SV)注释的变异总数103个(占0.0003%)。突变基因主要为与菌株生长、能量代谢调节、维生素合成(特别是生物素)有关的基因,分布于2条染色体的多条序列上。LY33菌株框架图测序及其编码基因蛋白的功能注释表明,其基因组序列长度4627127 bp,GC含量28.60%,含有4171个基因,编码区总长度占比84.12%,参与了糖代谢(carbohydrate metabolism)、膜转运(membrane transport)和氨基酸代谢(amino acid metabolism)等多种代谢途径转化过程,基因组中抗大环内酯类药物、抗杆菌肽、VanI糖肽抗性基因个数较多。【结论】本研究从饲喂4%乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离到1株利用乳酸快、丁酸转化率高的LY33菌株,经鉴定为丁酸梭菌,其具有良好的应用前景,可作为一种新的微生物资源用于微生态制剂产品。

沼液灌溉杂交狼尾草叶粉粗蛋白及总磷含量变异的研究

以龙岩市新罗区3个规模化猪场全沼液灌溉杂交狼尾草为试验材料,在考虑种植场地、采样季节两个影响因子的条件下,探讨狼尾草叶粉粗蛋白(CP)、总磷(TP)含量与刈割高度(Height)的统计关系。结果表明:当刈割高度为0.5～1.0米时,粗蛋白、总磷含量平均值分别为15.367%和0.7325%;当刈割高度为1.0～1.5米时,粗蛋白、总磷含量平均值分别为15.192%和0.7004%;当刈割高度为2.0～2.5米时,粗蛋白、总磷含量平均值分别为11.971%和0.4283%;线性拟合统计分析表明,当刈割高度在0.5～2.5米之间时,粗蛋白和总磷含量符合二次曲线变化规律。

基于工程教育专业认证产业需求为导向的“环境微生物学”课程项目化教学改革

本课程团队以地方产业需求为导向,结合国家工程教育专业认证的标准,实施了“环境微生物学”课程项目化教学改革,构建了“教、学、育、用”一体化的创新教学模式。课程设计了3个教学项目、17个学习任务,设定了4个课程目标,完善了课程各目标达成的评价方法,建立了多元化的考核评价体系。课程教学方法多样,授课形式多元,同时注重课程的特色教学和思政教育。课程改革后学生学习的主动性、积极性明显增强,课程目标的达成度均高于期望值;期末学生及格率、综合成绩、督导评价、同行评价、学生评价均有明显的提升,课程的项目化教学改革取得良好的成效。

猪蛔虫感染相关基因28A02的表达谱及其全长cDNA的克隆和分析

为鉴定猪蛔虫与感染相关的差异表达基因,本实验由猪蛔虫感染期幼虫差异消减cDNA文库中挑选EST序列(28A02)为研究对象,首先,经半定量RT-PCR方法分析该基因在各期虫体的表达情况。结果显示:该基因在猪蛔虫感染期幼虫和肺三期幼虫中均有表达,并且在感染期幼虫表达丰度最高,在其它各期虫体包括雌虫、雄虫、虫卵和第四期幼虫均未检测出该基因的表达。其次,以已知的EST序列为模板,采用RACE技术获得了864 bp的全长cDNA序列,包含一个完整的长约450 bp的开发阅读框。另外,经生物信息学分析显示,该基因编码的氨基酸序列与众多物种的ATP合酶有43%～47%的相似性,推测该基因可能参与编码猪蛔虫的线粒体ATP合酶,这为进一步研究其功能奠定了基础。

猪蛔虫不同发育阶段09G10基因的表达分析

为进一步鉴定和分析猪蛔虫感染相关基因,从构建的猪蛔虫感染期幼虫消减cDNA文库中筛选出一基因(EST编号为09G10),以肌动蛋白(β-actin)为内参,采用半定量RT-PCR方法分析该基因在猪蛔虫不同发育阶段的表达情况。通过09G10基因与内参β-actin基因的积分光密度的比值结果显示,09G10在感染期幼虫中呈现高丰度表达,在肺第3期幼虫和第4期幼虫期有微量表达,在其他各期虫体包括肝第3期幼虫、雌虫、雄虫和虫卵均未检测出该基因的表达量,表明09G10基因可能是猪蛔虫幼虫期所特有的基因,在幼虫感染宿主过程中可能扮演重要角色,为进一步研究该基因的功能提供了依据。

鸡圆圈病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立与应用

本研究针对圆圈病毒3型(GyV3)VP2基因构建标准质粒,以此作为模板建立标准曲线,在优化qPCR反应体系的基础上,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示,该方法仅对GyV3特异性扩增,最低检测模板浓度为1.585×10^(1)copies/μL,组内和组间重复性试验的变异系数均小于1.0%。用本研究建立的qPCR方法对50份临床样品进行检测,阳性检出率为10%(5/50),高于常规PCR的阳性检出率8%(4/50)。上述结果表明,本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、灵敏度高,可用于临床快速检测GyV3。

猪圆环病毒体外高效增殖研究进展

猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus diseases,PCVDs)主要通过疫苗产品进行预防,病毒增殖水平与疫苗研发密切相关,随着新发病原PCV3和PCV4的出现和广泛流行,对于实现此类病毒体外高效增殖,已经成为开展相应病毒病原学、发病机制及其疫苗研究方面的瓶颈。鉴于4种猪圆环病毒(PCV)在基因组结构、复制机制等方面的相似性,现对其中已实现体外培养的PCV2,在促进其病毒增殖方面的方法和研究进展进行总结和概括,以期进一步提升现有PCV2增殖水平,并对实现PCV3或PCV4的体外培养提供助力,从而促进PCV疫苗的研发和相关病原学与发病机制的深入研究。

一株冠突散囊菌的分离鉴定、基因组成及其枇杷花 发酵特性分析

【背景】冠突散囊菌LYEC03是从陕西泾阳茯砖茶中分离得到的主要发酵菌株。【目的】研究冠突散囊菌LYEC03菌株的基因组信息及其发酵枇杷花产品的特性,从分子水平阐明冠突散囊菌的发酵机制。【方法】应用形态和显微形态观察、ITS序列鉴定、重测序及框架图测序对所分离的菌株LYEC03进行鉴定和基因组信息解析,采用所分离的菌株LYEC03发酵枇杷花,研究冠突散囊菌对枇杷花主要功效成分及抗氧化性能的影响。【结果】陕西泾阳茯砖茶中分离得到的主要发酵菌株LYEC03确定为冠突散囊菌。菌株LYEC03与参考基因组覆盖率高,含有丰富的纤维素酶、蛋白酶、氧化酶和脂肪酶相关基因;基因组相关整体变异较小,其中假设蛋白、碳水化合物激酶、纤维素酶家族糖基水解酶、位点2蛋白酶家族蛋白、多酚氧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶等与菌株生长、能量代谢调节、产纤维酶、产蛋白酶和产氧化酶相关的基因发生了变异。菌株LYEC03基因组序列长度30623602 bp、GC含量51.70%、编码13033个基因、编码基因占比55.74%,参与了碳水化合物代谢、氨基酸代谢、外源生物降解代谢、能量代谢、脂质代谢与萜类化合物和聚酮类化合物的代谢等多种物质的代谢途径转化过程。菌株LYEC03生长、主要功效成分含量的变化与总抗氧化活性、2,2-二苯基-1-苦基肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazine,DPPH)自由基清除率和羟自由基清除率3个抗氧化指标变化一致,均呈现先增加后缓慢降低的趋势。【结论】冠突散囊菌的发酵特性与其基因组纤维素酶、蛋白酶和氧化酶基因的含量丰富密切相关,对冠突散囊菌的基因组信息分析及其发酵特性研究有利于其发酵产品性能的提升,并为其在食品、轻工业及医药等方面的应用提供科学依据。

发酵液中硫酸酯化茯苓多糖(SP)的制备及其结构改性的研究

茯苓菌株HD06-10进行液态发酵培养,获得的茯苓多糖进行硫酸酯化结构改性处理,制备硫酸酯化茯苓多糖(SP),并采用正交设计法优化其制备条件。采用柱层析纯化得到SP精制品,并通过紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳和红外光谱对SP进行纯度和理化、结构性质鉴定,结果表明:SP为多糖纯品,符合多糖及其硫酸根反应特征,分子量大约为5000～6000u;SP特性黏数降低,水溶性增加,IR分析有硫酸根的特征吸收峰,说明茯苓多糖的硫酸酯化成功。