高通量检测技术在植入前胚胎遗传学诊断中的应用

基因芯片和深度测序是两大最重要的高通量检测技术,给生物学和医学研究带来巨大的变化,在功能基因组、系统生物学、药物基因组的研究和遗传疾病诊断中得到了广泛的应用。随着全基因组扩增技术的不断改良,高通量技术在辅助生殖植入前遗传学诊断(PGD)中的应用有了巨大的进展。基于微阵列技术的胚胎全染色体组非整倍体筛查及结构异常的PGD已经开始临床应用,PGD/植入前遗传学筛查(PGS)后的临床妊娠率和胚胎植入率显著提高;基于单细胞高通量测序技术的染色体非整倍体及单基因病诊断的临床试验也已见报道,并有希望在不久的将来走向临床应用。

胚胎植入前遗传学诊断/筛查技术专家共识

植入前胚胎遗传学诊断技术（preimplantation genetic diagno-sis,PGD）是对胚胎或卵子行卵裂球/滋养层细胞或极体活检,作染色体和（或）基因学检测,将无疾病胚胎植入子宫妊娠,并出生正常子代的技术.该技术于1990年由Handyside教授首次应用于性连锁疾病诊断.

全基因组扩增在DMD植入前遗传学诊断中的可行性研究

目的:建立单细胞扩增前引物延伸法及巢式PCR技术,研究该技术在杜氏肌营养不良症植入前遗传学诊断中的可行性。方法:获取单个正常男女淋巴细胞和无杜氏肌营养不良(DMD)家族史的单个卵裂球,15碱基随机引物PEP扩增单细胞全基因组,再以巢式PCR技术检测PEP反应产物中DMD基因外显子8,17,19,44,45,48及Y染色体上的睾丸决定基因SRY。结果:单个淋巴细胞和单个卵裂球的6个DMD外显子扩增成功率分别为97.2％(175/180)和100％(60/60),单个男性淋巴细胞SRY的扩增成功率为100％(15/15),而单个女性淋巴细胞无SRY的扩增(0/15)。结论:检测单细胞DMD基因外显子8,17,19,44,45,48和SRY的PEP-巢式PCR技术具有较高扩增成功率和特异性,可望应用于 DMD的植入前遗传学诊断的单细胞基因诊断中。

ICSI治疗前无精子症患者Y染色体微缺失的筛查分析

目的 研究ICSI治疗前无精子症患者Y染色体微缺失发生率及微缺失类型,探讨精子生成障碍与Y染色体微缺失的关系.方法 应用PCR技术,对63例ICSI前行诊断性睾丸活检的无精子症患者进行Y染色体15个序列标记位点的微缺失检测.结果 63例无精子症患者中发现12例有Y染色体微缺失,缺失率为19.1%.其中10例患者的缺失发生在AZFc/DAZ区域,缺失率为15.8%;2例患者发生AZFb、AZFc双重缺失,缺失率为3.2%,AZFa无缺失病例.结论 Y染色体微缺失是引起男性无精子症的重要原因之一.采用PCR技术进行微缺失检测是一种非常有效的方法.对无精子症患者进行ICSI治疗前,有必要进行Y染色体的微缺失筛查.

人胚胎干细胞建系及其研究进展

人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hES)在再生医学、药物筛选和发育生物学等领域具有重要的研究和应用价值。hES细胞系通常生长在小鼠胚胎成纤维细胞上,动物源性病原生物的污染风险限制了这类hES的临床应用,因此寻找无血清、无饲养层细胞的成分明确的培养体系进行hES细胞建系及培养,生产细胞移植临床安全应用标准的hES是近年hES建系的努力方向。

影响体外受精-胚胎移植临床妊娠率因素的探讨

为探讨体外受精 -胚胎移植 (IVF- ET)过程中影响临床妊娠率的因素 ,对 2 4 8个常规 IVF-ET周期进行了分析 ,研究了夫妇年龄、穿刺卵泡数、获取卵母细胞数、卵母细胞成熟卵比率、卵母细胞空卵比率、精液精子质量和数量、授精前孵育时间、授精精子密度、受精率、多原核孕卵生成率、卵裂率、移植胚胎数目、胚胎累积评分及移植过程评分和临床妊娠率之间的关系 .结果表明 ,临床妊娠率与母方年龄呈显著性负相关 (P<0 .0 5 ) ,与移植胚胎数目、胚胎累积评分和移植过程评分呈显著性正相关 (P<0 .0 5 ) .说明母方年龄、移植胚胎数目、胚胎累积评分和移植过程评分是影响临床妊娠的重要因素 .

用户自定义Wishbone片上总线IP自动生成系统的实现

Wishbone作为一种免费开放的SoC片上总线接口标准,当前有着十分广泛的应用。根据Wishbone的标准,使用Perl/Tk语言实现了一个用户自定义Wishbone总线的自动生成系统。它具有友好的GUI配置界面,简单易用,平台独立性较好。针对具体的应用,能灵活的配置Wishbone总线,自动生成不同语言风格的总线的IP模块,极大地提高了Wishbone总线IP的设计效率。

脉冲熔化极气体保护焊熔池的视觉传感与实时控制

研究对脉冲熔化极气体保护焊 (GMAW )熔池过程采用视觉传感与实时控制方法的可行性问题。由于GMAW过程的熔滴过渡现象的复杂性 ,尝试模拟焊工通过观察熔池变化等因素来调整焊接参数获取满意的焊缝成形的行为。建立了脉冲GMAW过程熔池视觉传感系统 ,宏观上将熔滴过渡对熔池特征的影响作为黑箱过程处理 ,根据脉冲GMAW弧光光谱分布和熔池图像特征提取 ,实现对脉冲GMAW熔池动态过程的实时检测。采用辨识算法建立焊接动态过程的数学模型 ,进而设计脉冲GMAW熔宽的PID控制器 ,实现对脉冲GMAW熔池宽度的实时控制。试验表明 ,建立的视觉传感系统。

人类卵子体外成熟及其胚胎冷冻复苏研究

目的:探讨取卵周期准备、卵泡发育状态、培养液成分对未成熟卵的获取率、体外成熟率、受精率、胚胎质量、胚胎移植后成功率及其胚胎冷冻复苏移植的影响。方法:19例进行卵子体外成熟的不孕不育患者为研究对象。其中1例为自然周期,14例为促性腺激素(Gn)诱导排卵周期,4例常规控制性促排卵(COS)周期;分别以TCM 199或人输卵管液(HTF)为基础培养液,进行卵子体外成熟培养。结果:当取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,获卵率、受精率和胚胎质量下降;TCM 199组优质胚胎的形成率显著高于HTF组(P<0.01)。IVM胚胎经冷冻复苏、胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。结论:在IVM周期取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,将影响胚胎着床率和累积妊娠率。TCM 199优于HTF培养液,能提高未成熟卵体外成熟后受精卵所形成胚胎的发育能力。IVM胚胎经冷冻复苏-胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。

多精受精与体外受精-胚胎移植结局的关系

目的 :探讨体外受精 -胚胎移植 (IVF- ET)过程中多精受精对 IVF结局的影响。方法 :回顾性分析 4 96个IVF- ET周期、5 349个卵细胞的资料 ,比较有多精受精与无多精受精周期的获卵数、成熟卵比例、受精率、分裂率、卵裂胚胎数、妊娠率等指标。结果 :有多精受精发生的周期 ,成熟卵比例、受精率以及分裂率分别为 6 7%、76 .7%和95 .6 % ,均显著高于无多精受精周期 (分别为 6 0 %、6 0 .7%和 88.7% ) ,P<0 .0 1。有多精受精的周期妊娠率略高于无多精受精周期 (分别为 2 5 .7%和 2 3.6 % ) ,但无统计学上的显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :多精受精与卵细胞对精子的接受能力有关 ,预示较好的 IVF结局。

冻存胚胎复苏移植的影响因素

为探讨冻存胚胎复苏移植妊娠的影响因素 ,统计分析了 2 8个周期 12 7个冻存胚胎复苏移植的妊娠率与胚胎冻存前形态、细胞数、保存时间、复苏后存活率、培养至次日的继续分裂率等因素的关系 .表明妊娠周期冻存前胚胎形态良好比例、复苏后存活率、复苏后培养至次日继续分裂的比例有增高的趋势 ,胚胎细胞数妊娠与非妊娠周期相似 ,形态良好胚胎复苏后存活率显著高于形态不良者 .

宇佐美曲霉L336酸性蛋白酶的动力学性质

L336酸性蛋白酶的分子量为54000，等电点为3．8±0．2。在pH2．5，40℃条件下，酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0．263g／L、0．278g／L和0．415g／L，Vmax分别为2075、1550和2793μgTyr／min、mL，酪蛋白为最适底物。在pH2．0～5．0、40℃以下时酶的稳定性最好。此外，还研究了金属离子对酶活性的影响。

Turner综合征足月妊娠1例

1病例报告患者，27岁，G2P0，不良妊娠2次要求孕前咨询。患者身高148cm，系第二胎，足月顺产，出生时右肘稍外翻，余无特殊情况及处理；患者童年易感染，有反复发作中耳炎病史；10岁无身高陡增现象，无特殊治疗；15岁初潮，月经周期28～32天，经期3～4天，经量中等，无痛经；第二性征发育正常。23岁结婚，婚前体检正常；24岁第1次自然怀孕，停经47天B超检查提示无胚芽，行刮宫术终止妊娠，未行进一步检查；

植入前遗传学检测技术在生殖医学领域的应用与挑战

全球首例植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)试管婴儿诞生已近30年,作为产前诊断的替代治疗方法,PGT的发展可谓一日千里,对PGT结果正常的胎儿进行移植已造福许多家庭。

小鼠植入前胚胎GCN5和HDAC1表达模式及体外培养对其表达的影响

为探讨小鼠植入前胚胎组蛋白乙酰化酶GCN5(general control of nucleotide synthesis,GCN5) 和组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetyluse1,HDAC1)的表达模式及常规体外培养对它们表达的影响,应用荧光免疫细胞化学技术,检测了体内和体外培养的小鼠2、4、8细胞期卵裂胚胎、桑葚胚和囊胚GCN5和HDAC1的表达。结果显示,GCN5在体内组各细胞期卵裂胚胎和桑葚胚的细胞浆内均呈高表达,细胞核内未见明显表达,而囊胚细胞的细胞浆和细胞核内均无表达:HDAC1在体内组小鼠2细胞期胚胎中以细胞浆内表达为主,在其他各期胚胎均以细胞核内表达为主．囊胚期内细胞团部分细胞的细胞核内未见HDAC1表达。GCN5在体外组小鼠植入前各期胚胎均不表达,而 HDAC1的表达强度明显低于体内组的。提示体外培养抑制小鼠植入前胚胎GCN5和明显降低 HDAC1的表达,影响胚胎基因的正确性表达。

高龄生育子代出生缺陷的风险

出生缺陷是世界性的公共卫生问题,父母高龄是出生缺陷的重要危险因素之一。随着经济社会的发展,以及计划生育"单独二胎"政策的实施,高龄父母的比例将越来越高。本文结合国内外最新研究进展,从染色体非整倍体、常染色体显性遗传疾病、非孟德尔疾病、精神疾病以及癌症等方面,阐述高龄生育子代出生缺陷的风险。

胎儿分数在预测子痫前期和早产中的临床意义

目的应用无创DNA产前检测高通量测序技术平台,评估孕期胎儿分数在预测子痫前期和早产中的应用价值。方法选择行妊娠无创产前检测的单胎妊娠孕妇,且检测后提示为男胎孕妇896例,通过计算Y染色体DNA在母体血浆中总DNA的百分比得到胎儿分数,与孕妇体重、采血孕周和血清学筛查指标进行Pearson相关性分析。根据妊娠结局,选取正常对照组、早产组和子痫前期组进行Mann-Whitney U检验,比较各组间均值是否存在差异性。结果①胎儿分数与孕周存在明显正相关性(r=0.147,P=0.034),尤以23周后显著相关,而孕12~22^(+6)周胎儿分数相对稳定(r=0.023,P=0.521):与孕妇体重呈明显负相关性(r=-0.175,P=0.032);与孕中期血清学筛查指标HCG-β(r=0.186,P=0.023)、AFP(r=0.192,P=0.048)、uE3(r=0.120,P=0.037)存在一定正相关性。②采血孕周≥23周的子痫前期组胎儿分数与正常对照组相比,差异有显著性(P=0.036);早产组则差异无显著性(P=0.558)。结论孕期NIPT胎儿分数与孕周、体重存在明显相关性,孕23周后对子痫前期的预测有一定的价值。

植入前遗传学诊断妊娠成功

目的 :探索建立植入前遗传学诊断技术。方法 :对 2例高龄输卵管性不孕患者 ,单精子卵细胞浆内注射 ,卵裂球活检 ,染色体 2 1、X、Y三色荧光原位杂交 ,胚胎遗传学分析后 ,选择染色体正常胚胎移植。结果 :2 0 d后血HCG>10 0 0 IU/ L,孕 5 0 d B超见子宫腔内单胎妊娠并见心搏 ,孕 16周 B超检查显示胎儿生长、结构正常。结论 :植入前遗传学诊断移植 2例 ,临床妊娠成功。

男性叶酸代谢功能与辅助生殖技术结局的相关性研究

目的·研究男性叶酸代谢相关基因亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)C677T多态性及同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)水平对辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)妊娠结局的影响。方法·观察接受辅助生殖治疗的285对不孕不育夫妇,收集男方精液质量、血清HCY浓度和MTHFR基因型等资料,并对他们助孕情况进行回顾性分析。根据HCY水平分为高HCY组和正常HCY组,根据MTHFR基因型结果分为叶酸代谢障碍高风险(TT)组和非TT组,两两组合,以非TT正常HCY组为参照组进行比较。结果·各组精液质量对比差异无统计学意义(P>0.05)。非TT高HCY组及TT高HCY组与参照组比较,受精率显著降低(P=0.001,P=0.002);非TT高HCY组的优胚率明显低于参照组(P=0.038)。妊娠率及流产率差异无统计学意义(P>0.05)。结论·高HCY血症可能会影响辅助生殖技术的受精率,MTHFR基因多态性的检测结果有助于提醒受孕人群及时补充叶酸。