麻荆宣肺颗粒对人冠状病毒229E感染小鼠肺炎模型的治疗作用

目的 研究麻荆宣肺颗粒对人冠状病毒299E感染小鼠肺炎模型的治疗作用,为其临床应用提供参考。方法 建立人冠状病毒229E感染小鼠模型,感染当天连续给予麻荆宣肺颗粒共4 d。实验第5天动物称重后,眼眶取血,解剖取肺组织并称重,计算肺指数及肺抑制率,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测肺组织中病毒载量,流式细胞术检测免疫细胞百分比,酶联免疫法(ELISA)检测肺组织和血清中炎性因子表达量,免疫组化法检测肺组织血管紧张素转化酶2(ACE2)及线粒体组装受体1(MAS1)表达量,组织病理学检测肺组织病变。结果 麻荆宣肺颗粒能显著降低人冠状病毒229E感染小鼠的肺指数(P<0.01),高、中、低剂量的抑制率分别为66.80%、53.20%、45.20%;并显著降低模型动物肺组织中病毒载量(P<0.01);显著升高模型动物外周血淋巴细胞百分比(P<0.05,P<0.01);显著降低模型动物肺组织和血清中炎症因子的含量(P<0.01);显著提高模型动物肺组织ACE2及MAS1的表达(P<0.05,P<0.01);且对支气管及肺泡组织的炎性病变有一定的改善作用。结论 麻荆宣肺颗粒可通过抑制冠状病毒复制、抑制炎症因子释放、调节免疫平衡等途径对人冠状病毒229E肺炎小鼠发挥治疗作用。

基于液质联用技术与网络药理学的生姜质量标志物研究

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术和网络药理学对生姜的质量标志物(Q-Marker)进行预测分析。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术在正、负离子模式下对生姜中化学成分进行定性分析;运用网络药理学分析生姜传统功效的现代药理作用机制从而初步探索生姜的Q-Marker,并利用分子对接技术验证活性成分与靶点蛋白的结合活性。结果:通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术共分析得到生姜中48种化学成分,筛选后得到活性成分33个,以这33个活性成分为Q-Marker候选成分做网络药理学分析,获得靶点基因508个,作用于157条信号通路,如磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、大鼠肉瘤蛋白(Ras)信号通路等。该实验初步探究了8-姜酮(8-gingerone)、6-姜烯酚(6-shogaol)、8-姜酚(8-gingerol)、四氢姜黄素(Tetrahydrocurcumin)、1-脱氢-8-姜二酮(1-dehydro-8-gingerdione)和(E)-4-(3,7-dimethylocta-2,6-dien-1-yl)-2-methoxy phenol等6个化合物发挥药效的作用机制并预测为生姜的Q-Marker。结论:本研究初步预测了生姜传统功效的Q-Marker。

不同工艺的阿胶对血虚证小鼠的血细胞成分及相关细胞因子影响的比较研究

目的本研究旨在评价高压蒸汽提取工艺阿胶与传统常压提取工艺阿胶产品的补血作用,探究不同工艺阿胶补血药理机制。方法将70只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(Normal)、模型组(Model)、阿胶常压工艺低剂量组(aL)、阿胶常压工艺高剂量组(aH)、阿胶高压工艺低剂量组(AL)、阿胶高压工艺高剂量组(AH)、阳性对照药维生素B12组(VB12),每组10只。除正常组外,其余各组均采用乙酰苯肼(Acetylphenylhydrazine,APH)联合环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)构建血虚证小鼠模型,模型构建成功后,药物组给予相应药物连续灌胃14天,每天1次。治疗结束后,收集小鼠全血、肾脏及股骨组织。血液分析仪测定小鼠外周血象;ELISA法测定小鼠血清造血功能相关细胞因子水平;Western blot法测定小鼠血清及肾脏组织造血功能相关蛋白含量;HE染色观察骨髓组织病理学改变;免疫组化观察骨髓组织粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)及粒细胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)蛋白表达水平。结果不同工艺的阿胶均可显著升高血虚证小鼠外周血红细胞、白细胞、血红蛋白及淋巴细胞含量,降低外周血中红细胞平均体积和平均血红蛋白含量等血液指标,显著改善血虚证小鼠造血细胞减少、脂肪组织增加等症状,增加小鼠骨髓有核细胞数量,提高骨髓G-CSF及GM-CSF的蛋白含量,增加血清促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)、白细胞介素-3(Interleukin-3,IL-3)及GM-CSF含量,增加肾脏EPO蛋白表达,降低血清肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量。与常压提取工艺生产的阿胶相比,高压蒸汽提取工艺生产的阿胶在提升血虚证小鼠外周血中血细胞含量,增加骨髓有核细胞数量,提高骨髓G-CSF和GM-CSF的蛋白含量,提升血清中EPO和G-CSF含量,降低IL-6含量等方面的效果更显著。结论不同工艺的阿胶均可明显升高血虚证小鼠血细胞数目及血红蛋白水平,高压蒸汽提取工艺的阿胶补血作用强于传统常压提取工艺的阿胶,其机制与上调小鼠血清中EPO、IL-3、GM-CSF、G-CSF等正向调控造血因子,提高肾脏EPO含量,增加骨髓GM-CSF、G-CSF的蛋白表达,降低TNF-α、IL-6等负向调控造血因子有关。

基于证候表征生物学的中药复方功效物质基础研究思路与方法

中医临床治疗疾病多以辨证论治,其用药方式多以复方为主,中药复方又多以功效来表述。因此,中药复方的功效既包括了对疾病的治疗,也涵盖了对证候的作用。目前对中药复方功效的研究多围绕治疗疾病的药理作用及发挥作用的药效成分开展研究,而对证候的作用及发挥作用的物质基础研究不足,从而严重影响了中药复方功效的深入研究和科学阐释。其原因主要是由于证候表征的生物学基础缺乏研究,影响了中药复方功效的物质基础研究。基于此,本文首次提出基于“证候表征生物学”的中药复方功效物质基础的研究思路和方法:以中医临床为依据、以病证结合为基础、以功效为导向,在尽可能全面明确中药复方功效的证候表征生物学基础后,整合网络药理学、中药化学、中药药代动力学、生物信息学等多种现代科学技术和方法,解析、确证发挥功效的化学成分及作用机理。该研究思路突出了中医临床应用复方治疗疾病的病证结合、方证相应的用药特点,期望为中医证候及中药复方功效物质基础的研究提供参考。

基于血管新生途径探讨银杏蜜环口服溶液对光化学诱导血栓形成致小鼠脑梗死模型皮质损伤的影响

目的 观察银杏蜜环口服溶液(Yinxing Mihuan oral solution,YM)对光化学诱导血栓形成致小鼠脑梗死(photothrombotic stroke,PTs)模型大脑皮质缺血性损伤的影响,同时探讨其在缺血后血管新生方面的作用机制。方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组,模型组,金纳多组(12.5 mg/kg),YM低、高剂量组(412 mg/kg,824 mg/kg),每组10只。采用光化学诱导血栓形成法建立小鼠脑梗死模型,术后连续灌胃给药14 d。观察各组动物体质量、神经功能缺损评分变化;激光散斑成像观察各组动物脑血流灌注量;免疫组化法检测皮质缺血灶周围区脑组织CD31、血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测小鼠缺血灶周围区脑组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α及血管生长素(angiogenin,ANG)m RNA表达。结果 PTs模型成功建立。与模型组比较,YM高剂量组小鼠神经功能缺损评分明显下降(P<0.05),脑血流变化率明显减少(灌注量明显升高,P<0.05),VEGF、HIF-1α及ANG m RNA表达明显上调(P<0.05);低剂量组CD31蛋白表达、高剂量组v WF蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论 YM可改善PTs模型小鼠神经功能缺损,其作用机制可能与促进缺血后的微血管新生,从而增加皮质缺血区域脑血流灌注相关。

中药及其复方治疗病毒性肺炎研究进展

病毒性肺炎是由呼吸道病毒感染鼻腔、咽喉后向下发展引起的肺部炎症。2019年暴发的新型冠状病毒感染(COVID-19)严重威胁人类的生命健康,中医药在治疗COVID-19感染者中发挥着重要作用,且预后良好。对于病毒性肺炎,西医多采用对症治疗如抗病毒、抗细菌及真菌治疗,而中医药治疗病毒性肺炎并不仅仅针对病毒本身,而是通过对机体的整体调节,如增强机体免疫应答等来达到治疗作用。通过检索国内外文献中关于中药及其复方对病毒性肺炎的治疗作用及机制,发现栀子、板蓝根和金银花等单味中药治疗病毒性肺炎效果良好,中药复方如清肺口服液、犀角地黄汤合银翘散、蒿芩清胆汤、麻杏石甘汤、清燥救肺汤等在临床上应用广泛且效果显著,中药复方共包含152味中药,以入肺经的药物频次最多,其中甘草、黄芩、苦杏仁、金银花和麻黄使用最多;作用机制主要与抗炎、抗病毒和免疫调节有关,本研究为今后中药及其复方治疗病毒性肺炎的作用机制研究及其临床应用提供参考。

医学研究中动物实验样本量的确定方法

在开始人体临床药物试验之前,研究人员需要在动物实验中进行广泛的临床前研究,以初步明确药物的作用、毒性和药代动力学特征。在实验研究中,除了与研究设计有关的一般考虑因素外,动物样本量计算也是核心要素。目前研究人员在动物样本量的选择方面具有很大的随意性,不仅导致实验结果的可复制性和代表性降低,而且造成了大量资金的浪费。因此,本文将医学实验研究分为探索性研究和验证性研究,并且探讨了基于文献与经验的样本量确定法、精度分析确定法、两样本均数确定法、资源方程式确定法和KISS确定法,旨在为实验中样本量的选择提供计算方案,进而降低对动物伤害与提高实验的准确性。随着医学统计学与医学实验结合的发展和传播,动物实验样本量确定方面的研究将愈加完善,将为研究过程的严谨性及研究结论的可靠性提供坚定的理论基础和实验依据。

Proteomics analysis of coronary atherosclerotic heart disease with different Traditional Chinese Medicine syndrome types before and after percutaneous coronary intervention

OBJECTIVE: To investigate the underlying protein molecular mechanisms of "Qi stagnation and blood stasis syndrome"(QS) and "Qi deficiency and blood stasis syndrome"(QD), as two subtypes of coronary artery disease(CAD) in Traditional Chinese Medicine(TCM),following percutaneous coronary intervention(PCI).METHODS: In this study, a total of 227 CAD patients with QS and 211 CAD patients with QD were enrolled;all participants underwent PCI. Label-free quantification proteomics were employed to analyze the changes in serum in two subtypes of CAD patients before and 6 months after PCI, aiming to elucidate the intervention mechanism of PCI in treating CAD characterized by two different TCM syndromes.RESULTS: Biochemical analysis revealed significant changes in tumor necrosis factor-α, high density lipoprotein cholesterol, blood stasis clinical symptoms observation, and Gensini levels in both patient groups post-PCI;Proteomic analysis identified 79 and 95 differentially expressed proteins in the QS and QD patient groups, respectively, compared to their control groups.complement C8 alpha chain, complement factor H,apolipoprotein H, apolipoprotein B, plasminogen,carbonic anhydrase 2, and complement factor Ⅰ were altered in both comparison groups. Furthermore,enrichment analysis demonstrated that cell adhesion and connectivity-related processes underwent changes in QS patients post-PCI, whereas lipid metabolism-related pathways, including the peroxisome proliferator-activated receptor signaling pathway and extracellular matrix receptor interaction, underwent changes in the QD group.The protein-protein interaction network analysis further enriched 52 node proteins, including apolipoprotein B,lipoprotein(a), complement C5, apolipoprotein A4,complement C8 alpha chain, complement C8 beta chain,complement C8 gamma chain, apolipoprotein H,apolipoprotein A-Ⅱ, albumin, complement C4-B,apolipoprotein C3, among others. The functional network of these proteins is posited to contribute to the pathophysiology of CAD characterized by TCM syndromes.CONCLUSION: The current quantitative proteomic study has preliminarily identified biomarkers of CAD in different TCM subtypes treated with PCI, potentially laying the groundwork for understanding the protein profiles associated with the treatment of various TCM subtypes of CAD.

中医药动物模型研究现状及展望

随着中医药现代化研究的不断深入,越来越多的疾病动物模型被广泛用于揭示中医基础理论、中药疗效评价及中药作用机制等研究中。本文梳理了中医药疾病动物模型的研究和发展现状,对中医药疾病动物模型建立和评价研究中常见的思路方法以及存在的问题进行介绍,为建立适合中医药特点的动物模型提供参考。

中药复方功效物质基础的研究思路与方法

中药复方的功效代表了复方的整体效应,该效应是中药复方特定化学成分在特定病理条件下对机体发生作用进行调整和整合后的生物效应表达,而这些化学成分就是中药复方功效的物质基础。受多种条件限制,开展中药复方功效物质基础研究的较少,多是药效物质基础的研究,这就造成与中医药理论的脱节,很难对中药复方的功能主治进行科学阐释。在中医药理论和临床实践的指导下,本文提出了中药复方功效物质基础的研究思路与方法进,力争通过多学科、多技术的有机结合,构建中药复方功效物质基础的研究技术体系,进而阐释中药复方功效的产生的化学成分,为中药复方功效物质基础的研究提供借鉴和参考。

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P<0.01),细胞内ROS水平升高(P<0.001),线粒体膜电位降低(P<0.001),细胞凋亡率升高(P<0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P<0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P<0.01,P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.001),线粒体膜电位升高(P<0.001),细胞凋亡率降低(P<0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P<0.001,P<0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P<0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。

延胡索叔胺碱和季胺碱对豚鼠心室肌细胞动作电位和HERG通道电流的影响

目的:观察延胡索叔胺碱和季胺碱对动作电位和HERG通道的影响,探讨2种生物碱抗心律失常的作用机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的豚鼠心室肌细胞动作电位和培养的稳定转染HERG通道蛋白的HEK293细胞的HERG通道电流。结果:叔胺碱(30,100 mg/L)可延长APD90(90%复极化时程);1 mg/L和3 mg/L季胺碱可缩短APD90,加深静息电位;30 mg/L和100 mg/L季胺碱可延长APD90;叔胺碱(3~300 mg/L)可浓度依赖性抑制HERG尾电流幅度,IC50为55μmol/L;1 mg/L和3 mg/L季胺碱可明显升高HERG尾电流电流幅度,而30 mg/L和100 mg/L季胺碱可明显降低尾电流幅度。结论:延胡索叔胺碱可浓度依赖性延长动作电位时程和抑制HERG通道电流,而季胺碱高浓度与叔胺碱作用相同,低浓度则能够缩短动作电位时程和兴奋HERG通道电流,呈现双相性。

银杏蜜环口服溶液对大鼠心肌微血管内皮细胞血管新生能力的影响

目的观察银杏蜜环口服溶液(简称银蜜)对CMECs(大鼠心肌微血管内皮细胞)增殖、迁移、细胞小管形成及VEGF(血管内皮生长因子)、CD31(血小板-内皮细胞粘附分子)蛋白表达的影响,探讨银蜜的体外血管新生能力。方法培养CMECs,分为对照组、银蜜高(2.6 mg/mL)、中(1.3 mg/mL)、低(0.6 mg/mL)剂量组。CCK-8法检测CMECs增殖能力;细胞划痕实验检测CMECs迁移能力;Matrigel血管形成实验检测CMECs成管能力;Western blot检测VEGF、CD31蛋白表达。结果与对照组相比,银蜜高、中、低剂量均能显著促进CMECs增殖;且银蜜高组细胞增殖率显著高于银蜜中、低组。划痕6 h后银蜜高组细胞迁移率显著高于对照组,银蜜中、低组细胞迁移率大于对照组,但无统计学差异;划痕24 h后银蜜高、中、低组CMECs迁移率均显著升高,银蜜高组细胞迁移率高于银蜜中、低组。银蜜高组CMECs网眼数、网眼面积、交叉点数显著优于对照组、银蜜中、低组。银蜜高、中组VEGF、CD31蛋白表达量显著升高。结论银杏蜜环口服溶液可促进CMECs的增殖、迁移和体外血管成环,同时促进VEGF和CD31蛋白表达,且药效随银蜜剂量的增加而增强,提示银杏蜜环口服溶液具有显著的促进体外血管新生能力。

不同浓度乙醇提取丹参中12种成分比较研究

目的建立HPLC同时测定丹参中9种水溶性成分和3种脂溶性成分含量的方法,以不同浓度乙醇为代表,探讨溶剂极性对丹参有效成分溶出的影响。方法采用AgilentExtend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8mL/min,柱温25℃,检测波长280nm,进样量10μL,考察不同浓度乙醇(0%、20%、40%、60%、80%、95%)提取的丹参中12种成分的含量。结果在95min内,丹参中12种成分可实现完全分离,在线性范围内质量浓度与峰面积具有良好的线性关系(r>0.998),平均回收率为95.28%~104.97%,RSD<4.58%。不同浓度乙醇对丹参中12种成分含量影响不同,随溶剂极性降低,水溶性成分总量呈先升高后降低的趋势,脂溶性成分持续升高。结论本研究建立的方法专属性好,灵敏度高,定量准确,可用于同时测定丹参中9种水溶性成分和3种脂溶性成分的含量。不同浓度乙醇对丹参中12种指标性成分的溶出有很大影响。

基于因子分析与聚类分析的射血分数保留的心力衰竭中医证型分布研究

目的探讨射血分数保留的心力衰竭(HFp EF)中医证型分布规律。方法采用横断面流行病学调研方法,收集170例HFpEF患者中医四诊信息及心功能分级,进行描述性统计。运用因子分析和"Q型"聚类分析结合方法对33项主要证候条目进行非线性降维研究。结果共提取10个有效公因子,聚为4类中医证候群。结合中医证素辨证结果和专业知识归为4种证型,依次为气虚血瘀证68例(40.0%)、水湿泛溢证46例(27.1%)、痰阻心脉证34例(20.0%)、心肾阳虚证22例(12.9%)。心功能Ⅱ、Ⅲ级以气虚血瘀证、水湿泛溢证较多,心功能Ⅳ级以痰阻心脉证、心肾阳虚证较多。结论HFpEF基本中医证型为气虚血瘀证、水湿泛溢证、痰阻心脉证、心肾阳虚证,不同心功能分级患者的证型分布规律亦不同。

血脂变异性与冠心病患者不良心血管事件的相关性

目的探讨血脂变异性与冠心病患者中期不良心血管事件之间的关系。方法回顾性收集了2013年1月1日至2016年12月1日于中日友好医院至少接受过3次(非基线)血脂检测的355例冠心病患者的临床基本资料、合并症、血脂结果及随访情况。血脂检测包括总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和三酰甘油(TG)。血脂变异性采用标准差(SD)、变异系数(CV)和校正独立于均值的变异性(cVIM)进行评估。随访截至2018年5月31日,根据是否发生主要不良心血管事件(MACE)将患者分为MACE组和非MACE组。运用Cox比例风险回归分析,探讨血脂变异性与MACE的相关性。结果平均随访(34.1±12.8)个月后,116例(32.7%)患者发生MACE。与非MACE组相比,MACE组TC变异性(SD:43.1比36.2;CV:0.39比0.29;cVIM:0.34比0.27;均为P<0.001)和HDL-C变异性(SD:5.20比4.64;CV:0.14比0.12;cVIM:0.020比0.017;均为P<0.01)水平更高。在校正平均血脂水平和心血管危险因素后,TC变异性(HR=1.012,95%CI:1.003~1.021,P=0.007)和HDL-C变异性(HR=1.081,95%CI:1.019~1.146,P=0.009)仍能预测更高的MACE发生风险。结论冠心病患者的TC和HDL-C变异性与中期MACE有关,而LDL-C和TG变异性与中期MACE无关。

单核细胞/高密度脂蛋白胆固醇比值与冠心病血瘀证相关性研究

目的:探讨单核细胞/高密度脂蛋白胆固醇比值(MHR)与冠心病血瘀证的相关性。方法:选取2018年1月至2018年7月中日友好医院收治的冠心病患者180例作为研究对象,根据冠心病血瘀证积分分为血瘀证组(n=118)和非血瘀证组(n=62),选取同期非冠心病非血瘀证患者55例作为对照组,比较3组MHR的差异。采用Logistic回归分析MHR与冠心病血瘀证的关系;通过绘制受试者工作特征曲线(ROC),评估MHR诊断冠心病血瘀证的能力。结果:血瘀证组MHR水平高于非血瘀证组和对照组(P<0.01),非血瘀证组和对照组之间MHR水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析表明,MHR是冠心病血瘀证的独立危险因素(HR:0.903,95%CI为0.826~0.988,P=0.026)。ROC分析表明,MHR诊断冠心病血瘀证的最佳截止值为14.15,敏感度为83.9%,特异度为68.6%[曲线下面积(AUC)0.609,95%CI为0.521~0.696,P=0.017]。结论:MHR是冠心病血瘀证的独立危险因素,提示脂质驱动的炎症反应可能是冠心病血瘀证形成病理机制之一。

HPLC-双波长切换法同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱、丹酚酸B的含量

目的:建立同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱和丹酚酸B含量的方法。方法:采用HPLC-双波长切换法。色谱柱为Waters symmetry C18,以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为286 nm(丹酚酸B)、336 nm(脱氢紫堇碱),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:在建立的检测条件下,脱氢紫堇碱和丹酚酸B均能达到基线分离,二者进样量线性范围分别为0.157～1.259μg、0.391～3.131μg(r均为0.999 9);精密度、重复性和稳定性试验(24 h内)的RSD均小于2.00%(n=6～10);平均加样回收率分别为101.61%、102.85%(RSD分别为3.59%、2.85%,n=6)。结论:建立的HPLC-双波长切换法可同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱和丹酚酸B含量,且方法操作简便、快速,可用于双参通冠胶囊的质量控制。

冠心病急性心肌梗死气阴两虚证动物模型的构建与评价

目的:探索睡眠剥夺(SD)复合异丙肾上腺素(ISO)建立冠心病急性心肌梗死气阴两虚证大鼠模型的构建和评价方法。方法:将40只SD大鼠分为正常组、SD组、ISO组、SD+ISO组。正常组不予处理,SD组使用改良多平台水环境法连续睡眠剥夺96 h,ISO组皮下注射ISO 100 mg·kg^(-1),隔日1次,共2次。SD+ISO组在连续睡眠剥夺72、96 h时注射ISO 100 mg·kg^(-1)。采用小动物超声心动图检测大鼠心功能;生化分析法检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理变化;通过一般状态及体质量、抓力、体温、旷场实验、血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及cAMP/cGMP、舌象红(R)、绿(G)、蓝(B)值及脉搏幅度观察气阴两虚证的证候指标变化;酶联免疫吸附测定法(EILSA)检测大鼠血清白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、氧化应激超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)及白细胞分化抗原4(CD4)、白细胞分化抗原8(CD8)水平。结果:疾病指标方面,与正常组比较,ISO组和SD+ISO组心功能降低(P<0.01),各模型组心肌酶升高(P<0.01),ISO组和SD+ISO组心肌组织病理损伤明显。证候指标方面,与正常组比较,SD组和SD+ISO组的各时间点体质量下降(P<0.01)、ISO组48、72 h体质量下降(P<0.05,P<0.01),各模型组抓力减弱,舌面R、G、B值降低(P<0.01),SD组爪温、肛温升高(P<0.01),各模型组不动时间延长(P<0.01),总路程和进入中心区次数下降(P<0.01),平均速度减缓(P<0.05,P<0.01);cAMP、cGMP升高(P<0.05,P<0.01),SD+ISO组cAMP/cGMP增加(P<0.01),SD组和SD+ISO组脉搏幅度降低(P<0.01)。血清学指标方面,与正常组比较,ISO组和SD+ISO组IL-18、TNF-α、SOD、MDA升高(P<0.01);各模型组的CRF、ACTH、CORT、T3、T4、CD4、CD8升高(P<0.05,P<0.01)。结论:连续睡眠剥夺96 h复合大剂量ISO能够成功建立冠心病急性心肌梗死气阴两虚证大鼠模型,以西医疾病指标、组织病理形态学、中医宏观指标及血清学指标为模型评价体系。

生姜通过TLR4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨生姜醇提液对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及作用机制。方法:将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、生姜低、高剂量组,每组10只,正常组小鼠经鼻滴入生理盐水,其余各组经鼻滴入含LPS(50μg)的生理盐水。造模30 min后,地塞米松组灌胃5 mg·kg^(-1)醋酸地塞米松溶液,生姜低、高剂量组分别灌胃不同剂量(7、14 g·kg^(-1))的生姜醇提液,正常组及模型组灌胃等体积纯水。造模24 h后取材,细胞计数仪检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察各组肺组织病理学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化(p)-NF-κB p65及Toll样受体4(TLR4)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠BALF白细胞计数、TNF-α、IL-1β、IL-6、MPO水平升高(P<0.01),SOD水平降低(P<0.05),肺组织病理损伤明显,NF-κB p65、p-NF-κB p65及TLR4蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,给药组小鼠BALF白细胞计数、TNF-α、IL-1β、IL-6、MPO水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD水平升高(P<0.05,P<0.01),肺组织损伤均减轻,NF-κB p65、p-NF-κB p65及TLR4蛋白表达降低(P<0.01)。结论:生姜醇提液可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路发挥对LPS诱导小鼠ALI的保护作用。