鸭疫里默氏杆菌16S rRNA和dnaB基因的双重PCR检测方法的建立

为了快速、准确地鉴定鸭疫里默氏杆菌(RA),本实验根据RACH3株16SrRNA和dnaB基因序列设计引物,经引物筛选和PCR反应条件优化后,建立了检测RA的双重PCR方法。结果表明该方法对检测的所有不同血清型RA菌株均能扩增出364bp和627bp两条特异的目的片段,而对鸭致病性大肠杆菌、鸭源禽巴氏杆菌、肠炎沙门氏菌、黄杆菌等对照菌株的扩增结果均为阴性;该PCR方法对细菌HXb2基因组DNA和菌液的检测敏感性分别为17.33ng/mLDNA和2.9×10~3cfu/mL细菌。利用建立的双重PCR检测了RA感染鸭的肝脏和脑组织中的RA,结果显示该方法与细菌分离法符合率分别为100%(9/9)和77.8%(7/9),表明本实验建立的双重PCR方法可用于检测肝脏组织中RA。本研究建立的双重PCR方法既可以对分离的RA疑似菌株进行快速检测和鉴定,也可以直接用于临床样品中RA的检测。

鸭疫里默氏杆菌CH3株tonB1或tonB2基因缺失对生物被膜形成的影响

为探究鸭疫里默氏杆菌CH3株TonB1和TonB2蛋白对其生物被膜形成的影响,本研究采用自杀质粒同源重组的方法分别构建了tonB1和tonB2基因的缺失突变株CH3△tonB1和CH3△tonB2。同时将tonB1和tonB2基因ORF克隆于大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭表达载体pRES中,构建回补株CH3△tonB1(pRES-TonB1)和CH3△tonB2(pRES-TonB2)。利用结晶紫染色法对野生株CH3、突变株CH3△tonB1和CH3△tonB2及其回补株的生物被膜进行测定。结果表明,与野生株CH3相比,突变株CH3△tonB1和CH3△tonB2生物被膜形成能力显著降低(p<0.05),而回补株CH3△tonB1(pRES-TonB1)和CH3△tonB2(pRES-TonB2)的生物被膜形成能力较突变株显著增强。本研究结果表明鸭疫里默氏杆菌的TonB1和TonB2蛋白与其生物被膜的形成相关。

鸭疫里默氏杆菌假定溶血素相关蛋白基因Riean_0415的原核表达及溶血活性检测

为了分析鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)假定的含CBS结构域的溶血素相关蛋白(hypothetical hemolysinrelated protein,HRP)的功能,本研究根据血清10型鸭疫里氏杆菌HXb2株Riean_0415基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用PCR扩增了Riean_0415基因,并进行了序列测定与分析。然后将Riean_0415基因克隆到原核表达载体p ET-43.1a,再用亲和层析纯化获得诱导表达的重组蛋白r HRP。溶血活性检测结果表明表达的重组蛋白r HRP具有裂解鸭红细胞的活性。本研究结果为进一步研究r HRP蛋白的功能和鸭疫里默氏杆菌的溶血机制等奠定了基础。

鸭疫里默氏杆菌假定溶血素相关蛋白基因Riean_0620的原核表达及溶血活性检测

为研究鸭疫里默氏杆菌(RA)的假定溶血素相关蛋白Riean_0620的功能,本研究根据血清10型RAHXb2株Riean_0620基因序列设计引物,PCR扩增Riean_0620基因,并进行序列测定与分析。将Riean_0620基因克隆到原核表达载体p ET-43.1a进行诱导表达,采用亲和层析纯化获得重组蛋白r Riean_0620。溶血活性检测结果表明r Riean_0620具有裂解鸭红细胞的活性。本研究将有利于进一步研究Riean_0620蛋白的生物学特性以及RA的溶血机制。

鸭疫里默氏杆菌50S L27转座子插入突变株的生物学特性分析

为了鉴定鸭疫里默氏杆菌中与卡那霉素抗性相关的基因,本研究采用构建Yb2株转座子随机突变库结合卡那霉素抗性平板来筛选相关抗性基因。先以Yb2株为受体菌,携带质粒pEP4351的大肠杆菌BW19851(pEP4351)为供体菌,构建转座子Tn4351随机突变库。用含红霉素和卡那菌素的TSA进行筛选,得到卡那霉素耐药性降低的突变株DK-2;然后采用基因组步移的方法鉴定表明,转座子插入基因组上编码核糖50S L27亚基基因;再将携带野生株Yb2的50S L27基因的大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭表达载体pRES-50S L27导入突变株DK-2,构建得到了回复菌株cDK-2。结果表明:50S L27基因缺失对其生长无明显的影响,而DK-2突变株对卡那霉素、新霉素和利福平的敏感性均增强。本研究为进一步解析鸭疫里默氏杆菌50S L27亚基的功能奠定了基础。

跟着课本学描写 让作文生动起来

初中作文教学中人物的描写是一个重要版块,但事实上学生在进行作文写作时却很难下笔,不知道如何对人物进行描写或者描写千篇一律,毫无亮点可言,读起来味同嚼蜡经不起细品。追根究底是学生不善于观察生活,再就是没有对课文中的人物描写进行深入探究,不能将课文中人物描写的技巧迁移运用到自己的写作中来。人物的描写是写作中的基本功,如何通过人物的外貌、动作、语言、心理等描写,突出人物的形象与个性是进行人物刻画之前应该思考的。初中作文一般训练学生记叙文的写作能力,记事和写人是密不可分的,事情的发生离不开人,人是做一件事的主体,在对事件的描述过程中离不开人物的描写,学生在掌握了相关的写作技巧之后,写作才会变得轻松。

鸭疫里氏杆菌CH3株ompA基因缺失株的构建及其部分生物学特性的研究

为了分析OmpA缺失对鸭疫里氏杆菌生物学特性的影响,采用自杀质粒同源重组的方法构建了CH3株的ompA基因缺失株。用PCR方法扩增ompA基因左右两侧的同源臂和壮观霉素抗性基因表达盒后连入自杀性质粒pDS132,构建得到重组自杀质粒pDS132-ompA-LSR。再通过双亲本接合转导的方法将此重组质粒导入到CH3株,用含卡那霉素和壮观霉素的TSA筛选可能的基因缺失株,并用PCR和Western-blot进行鉴定,获得基因缺失株CH3ΔompA。生物学特性分析表明,OmpA缺失后鸭疫里氏杆菌对盐离子浓度的耐受能力降低、对抗生素的敏感性增强,而对去污剂SDS、EDTA和酸碱(pH)耐受性没有明显的影响。

民用建筑工程的造价管理与控制措施体会

随着经济的不断发展,我国越来越重视民用建筑工程。现阶段,最引起国家重视的是民用建筑工程中的工程造价管理问题。现在最重要的任务就是将民用建筑工程中的工程造价管理问题处理好。只有将工程造价管理问题解决好,才能够不断地促进我国民用建筑工程的开展,不断地为人民的生活打下基础。进行工程造价管理一方面可以对工程的开展有一定的促进作用;另一方面还可以提高工程建设的管理水平。在各项工程的管理项目中,工程造价项目占有一定的位置。工程项目的管理者和投资人将工程造价的问题解决对工程控制及开展具有重要的意义。