耐环丙沙星的产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌gyrA基因突变研究

目的为了解耐环丙沙星产超广谱β_内酰胺酶大肠埃希菌的gyrA基因突变状况。方法在大肠埃希菌gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)序列的两侧自行设计引物并建立PCR扩增和产物直接测序体系,对11株耐环丙沙星产超广谱β_内酰胺酶大肠埃希菌和1株环丙沙星敏感的TEM2型大肠埃希菌的QRDR序列进行检测。结果11株耐环丙沙星的大肠埃希菌均存在第83位和87位的氨基酸密码子的错义突变:TCG(丝氨酸)→TTC(亮氨酸);GAC(天冬氨酸)→AAC(天冬酰胺);其中3株菌株还同时存在第85位氨基酸密码子的同义突变:GTC(缬氨酸)→GTT(缬氨酸)。而环丙沙星敏感的TEM2型大肠埃希菌则无突变。结论耐环丙沙星表型的产超广谱β_内酰胺酶大肠埃希菌存在gyrA基因QRDR区的突变。表明ESBLs菌同时耐喹诺酮类药物的表型有其基因改变的基础。

肺炎链球菌分离株红霉素耐药erm、mef基因检测研究

目的 :了解引起苏州地区儿科临床肺炎链球菌 (Sp)分离株红霉素耐药的状况。方法 :设计、优化与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因 (erm )和主动外排转运体基因 (mef)PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月～ 2 0 0 3年 4月呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 2 3株Sp菌 (红霉素敏感表型 3例、中敏 3例、耐药 17例 )进行检测。结果 :红霉素耐药、中敏、敏感Sp菌分别检出耐药基因 94.1% (16 17)、10 0 %、3 3 .3 % (1 3 )。ermB基因PCR检出率 43 .5% (10 2 3 ) ;ermA ermB基因通用兼并引物PCR检出率 69.6% (16 2 3 ) ;mefA基因PCR检出率 2 6.1% (6 2 3 ) ;erm或 和mef基因检出率 87.0 % (2 0 2 3 )。携带erm基因的耐药表型率 93 .3 % (14 15) ,其中单独ermA基因为 10 0 % (4 4) ;ermB +ermA B基因为 87.5% (14 16)。单独携带mef基因的耐药表型率 50 % (2 4) ,而erm或 和mef基因为 80 % (16 2 0 )。结论 :本地区Sp菌株中存在ermA、ermB和mef基因 ;三者单独或共同表达均可致Sp菌红霉素耐药 ;

50株肺炎链球菌pbp2B基因突变与苯唑西林药敏相关性分析

目的 探讨我国耐青霉素肺炎链球菌 (Streptococcuspneumoniae,SPN)pbp2B基因的突变与苯唑西林药敏表型相关性。方法 对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 5 0株肺炎链球菌 ,用K B法进行苯唑西林药物敏感试验 ,用套式聚合酶链反应 (nPCR)扩增pbp2B基因 ,对PCR产物直接进行DNA测序 ,测得序列与SPNR6株 (青霉素敏感株 )序列 [GenBank登录号 :NC 0 0 30 98]相比较。结果 2 9株无突变 ,2 1株有突变 ;突变的 2 1株中 2 0株为点突变 ,可分A、B、C、D 4个类型 ,分别占 71 4 %、14 3%、4 8%、4 8% ;另 1株为E型 ,除有点突变外 ,并有CCT碱基插入 ;无突变的 2 9株SPN菌中苯唑西林敏感率为 86 2 % ;有突变的 2 1株中苯唑西林敏感率为 9 5 % ,二者相比较差异有显著性 (P <0 0 0 1) ;5种突变类型均存在SPN菌对苯唑西林耐药。结论 SPN分离株pbp2B基因突变与其苯唑西林耐药性相关 。

苏州地区肺炎链球菌分离株tet M基因检测

目的 调查苏州地区肺炎链球菌 (Sp)临床分离株四环素耐药tetM基因。 方法 设计、优化编码细菌核糖体保护蛋白的tetM基因PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月至 2 0 0 3年 4月自苏州大学附属儿童医院呼吸科患儿痰标本中分离的 2 3株Sp菌 (四环素表型耐药 17株、中敏 3株、敏感 3株 )进行检测。 结果 2 3株Sp菌均检出tetM基因 (10 0 % )。

套式聚合酶链反应直接测序法分析产超广谱β-内酰胺酶菌TEM全基因

目的 建立套式聚合酶链反应直接测序方法分析产超广谱 β 内酰胺酶菌TEM全基因 ,以便TEM分型和发现新的亚型。方法 根据Genbank核酸数据库已登录的TEM各亚型序列 ,在保守区自行设计 4条引物 ,分A、B两段半套式重叠扩增TEM全基因 ;并对A段作正向测序 ,B段作反向测序。结果 大肠埃希菌TEM 1、TEM 2、TEM2 6等 3种典型菌株均成功扩出A、B两段 ,产物直接测序波峰锐利 ,信噪比值高。该三株菌测得的序列与已在Genbank登录的序列一致。

新生儿肺炎患儿沙眼衣原体PCR检测研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙眼衣原体（ＣＴ）ＤＮＡ，８４例新生儿肺炎患儿的咽拭子中共检出２１例，阳性率２５．Ｏ％。其中剖宫产儿阳性率１６．６％（２／１２）；经产道产儿阳性率２６．４％（１９／７２）；早产、低体重儿阳性率５０％（５／１０）；而对照组２０例健康新生儿无１例检出。提示新生儿是ＣＴ感染的高危群体；其感染ＣＴ以通过孕妇产道获得为主，但也有宫内感染；早产、低体重儿最易被ＣＴ感染，ＰＣＲ检测ＣＴ感染具有快速、敏感、特异的优点，有广阔的应用前景。

肺炎链球菌β-内酰胺酶TEM基因的发现

目的 探讨肺炎链球菌是否产β-内酰胺酶。 方法 对2002年9月至2003年4月在苏州大学附属儿童医院就诊的呼吸道感染患儿痰标本中分离到的23株肺炎链球菌进行β-内酰胺酶TEM基因PCR检测与PCR扩增产物直接测序分析。 结果 23株肺炎链球菌经TEM基因PCR检测21株阳性,阳性率达91.3％。测得1号菌株(SR001)基因序列为TEM-1型,已登录美国国立生物信息中心,注册号:AY392531。 结论 从肺炎链球菌中检出β-内酰胺酶TEM基因。肺炎链球菌对青霉素耐药机制包括产β-内酰胺酶。

细菌、支原体通用引物PCR扩增研究

以原核生物 16SrRNA基因 (16SrDNA)为靶基因 ,自行设计细菌和支原体通用引物 ,并建立PCR扩增体系。其对细菌、支原体诊断特异性强 ,灵敏度达一个菌体 ,扩增产物经DNA测序证实正确性佳。

微小病毒B19与造血危象的研究进展

微小病毒Ｂ１９（ＰＶＢ１９）是目前唯一认知的具有独立复制能力的存在于人类体液中的病毒，是引起造血危象的病原体之一。该病毒易引起原有慢性贫血患者发生造血危象，也可引起正常健康者发生造血危象。红细胞Ｐ抗原是ＰＶＢ１９的细胞受体，前红造血细胞是ＰＶＢ１９复制的主要场所，但不是唯一的靶细胞，其它造血系统也可受累。ＰＶＢ１９感染诊断依赖于病毒抗原、抗体和核酸的检测。ＰＶＢ１９引起的造血危象是可治的。

PCR诊断微小病毒B_(19)感染致儿童造血危象初探

应用聚合酶链反应(PCR)技术检测儿童骨髓片和血清标本中微小病毒 B_(19)—DNA(PVB_(19)—DNA),在急性造血停滞、周期性粒细胞缺乏症及血液病患儿中均有检出。提示 PV B_(19)是导致急性造血停滞的病源之一;前红造血细胞不是唯一的 PV B_(19)感染的靶细胞;血液病患儿是 PV B_(19)的易感群体。PCR 技术是快速检测 PV B_(10)感染的有效手段之一。

双温PCR对儿童支原体肺炎的诊断价值

应用肺炎支原体(MP)双温聚合酶链反应(PER)检测肺炎儿童咽拭子144例,阳性率21.5%。平行检测血清冷凝集试验56例中,7例提示 MP 感染,而 PCR 检出17例MP-DNA,有非常显著差异(P<0.005)。MP 双温 PCR 具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的优点,对支原体肺炎(PAP)早期诊断有重要意义。

苏州地区5岁以下严重急性呼吸道感染(SARI)住院患儿的病毒病原学和临床特征分析

目的了解苏州地区5岁以下严重急性呼吸道感染(severe acute respiratory infection,SARI)住院患儿的病毒病原学构成、季节分布和临床特征,为苏州地区SARI病例的临床诊断治疗及防控提供线索和依据。方法对2011年3月至2012年2月期间在苏州大学附属儿童医院内科急诊病房及呼吸科病房住院治疗的5岁以下SARI病例采集鼻咽部分泌物进行实验室检测,同时收集患儿的既往病史及临床特征等相关信息。结果共纳入SARI病例746例,其中474例采集了鼻咽部分泌物。病毒阳性检出率为46.0%,其中流感病毒A型2.1%、B型11.0%、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)26.6%、腺病毒3.2%、副流感病毒Ⅰ型2.7%、Ⅲ型4.0%,未检测到副流感Ⅱ型病毒。RSV全年均有流行,流感A、B型病毒则主要在冬、春季流行。男性患儿RSV阳性率高于女性患儿(P<0.05);流感病毒、RSV、腺病毒、副流感病毒在不同年龄段SARI患儿的阳性率差异皆有统计学意义(P<0.05)。病毒检测阳性患儿咳嗽、喘息及肺炎的发生率显著高于阴性患儿(P<0.05);RSV及副流感病毒在肺炎患儿中的检出率明显高于其他诊断(P<0.05)。纳入研究的SARI患儿平均住院天数7.38天,中位数为7天。SARI患儿在病程中接受糖皮质激素治疗与住院时间密切相关。结论苏州地区5岁以下SARI住院患儿病毒检出率最高的是RSV和流感病毒,病毒感染可能是加重SARI病例临床症状的原因之一;不同病毒感染所致疾病特征有所差异,流感病毒以上呼吸道感染和肺炎为主,RSV以毛细支气管肺炎为主。

肺炎支原体致支气管肺炎和大叶性肺炎患儿的临床及实验室检查特征分析

目的分析和探讨肺炎支原体(MP)所致支气管肺炎和大叶性肺炎患儿的临床及实验室检查特征。方法选取于2006年1月—2010年12月住院的社区获得性MP肺炎患儿,根据肺部影像学检查将患儿分为MP-支气管肺炎组151例和MP-大叶性肺炎组89例,收集临床和实验室检查资料并加以分析。结果 MP-支气管肺炎患儿平均年龄为42.7个月,MP-大叶性肺炎患儿平均年龄为63.6个月,差异有统计学意义(P<0.05)。5岁以下患儿以支气管肺炎为多见,而5岁以上患儿以大叶性肺炎多见。MP-支气管肺炎患儿比MP-大叶性肺炎患儿容易出现喘息症状(13.2%对1.1%),而MP-大叶性肺炎患儿更易出现发热(95.5%对78.1%),且发热持续时间长(4 d对8 d),差异均有统计学意义(P<0.05)。MP-大叶性肺炎患儿伴有胸腔积液的比例高于MP-支气管肺炎患儿(9.0%对1.3%)。MP-大叶性肺炎患儿CD3+及CD8+T淋巴细胞的比例高于MP-支气管肺炎患儿,而CD4/CD8比值、CD3-CD19+及CD19+CD23+B淋巴细胞比例低于MP-支气管肺炎患儿,差异均有统计学意义(P均<0.05)。MP-大叶性肺炎患儿的IgA水平高于MP-支气管肺炎患儿,差异有统计学意义(P<0.05),而IgG和IgM的差异无统计学意义。结论 MP-支气管肺炎和MP-大叶性肺炎患儿具有各自的临床和实验室检查特征。MP感染后因不同年龄患儿机体的免疫状态不同,最终导致的疾病转归也不同。

不同年龄肺炎支原体肺炎患儿胸片与实验室检查特点比较

目的探讨不同年龄肺炎支原体肺炎(MPP)患儿表现为大叶性肺炎和支气管肺炎时,血常规、血清C反应蛋白(CRP)及体液免疫各项指标的变化。方法 MPP患儿211例,根据年龄分为1个月～6岁组和≥6岁组,同时依据胸片表现分为大叶性肺炎组和支气管肺炎组。入院初检测血常规、CRP及体液免疫指标。结果≥6岁组患儿MPP大叶性肺炎发生率为45.92%,高于1个月～6岁组的22.12%(χ2=13.4,P<0.001)。在1个月～6岁组中,大叶性肺炎患儿外周血淋巴细胞比例低于支气管肺炎患儿(P<0.05);而在≥6岁组患儿中,两者差异无统计学意义(P>0.05)。≥6岁组大叶性肺炎患儿的血清IgA、IgM含量低于支气管肺炎患儿(P<0.05)。两个年龄组大叶性肺炎患儿的血清CRP含量均高于支气管肺炎患儿(P<0.05)。结论年长儿MPP以大叶性肺炎多见,可能是年长儿MP感染后机体全身炎症反应强烈的表现之一,MP感染后淋巴细胞减少和早期特异性抗体产生不足也可能与大叶性肺炎的发生有关。

食物IgG抗体检测在慢性消化系统疾病中的临床意义

目的探讨血清中14种食物过敏原特异性IgG与小儿慢性消化系统疾病的关系。方法应用酶联免疫法检测40例慢性消化系统疾病患儿,血清中食物特异性IgG水平,然后按3∶1分别采用微粒子化学发光法和散射比浊法检测血清总IgE和血清IgG4水平。结果40例患儿食物过敏原特异性IgG升高有1到6种不等,总阳性率为100%,2种以上升高者为87.5%。食物特异性IgG升高以鸡蛋(92.5%)和牛奶(72.5%)最多见,其次为小麦、大豆(分别为40.0%、27.5%),鸡肉、猪肉和玉米均为0。根据试验结果调整所有患儿的饮食,病人症状在3周内明显改善者62.5%,症状有所改善者32.5%,无效5.0%,总有效率为95.0%。血清总IgE大于正常值者为17.5%,与食物特异性IgG无相关性(r=-1.132,P=0.268)。血清总IgG4水平变化与食物特异性IgG无相关性(r=0.863,P=0.396),与年龄呈正相关(r=3.317,P=0.003)。结论测定食物过敏原特异性IgG在小儿慢性消化系统疾病诊治中有重要意义。

3岁以下肺炎住院患儿的病原学研究

目的肺炎是小儿时期,尤其是3岁以下儿童的常见疾病,有较高的发病率和病死率。在发展中国家,病原菌以细菌感染相对多见,而病原菌的分布则随着年代不同而发生变化。该研究的目的是了解3岁以下肺炎住院患儿的深部痰液的病原学种类及分布,以期更好的指导临床用药。方法对苏州儿童医院2006年3月至2007年1月316例肺炎患儿进行呼吸道深部吸痰,对其进行常见病原学检测,并分析比较。结果316例患儿痰标本中,病原体检出率为60.8%,其中细菌检出率为51.3%,病毒总检出率为6.3%。细菌、病毒混合检出率为3.5%;细菌感染中以流感嗜血杆菌(14.6%)和肺炎链球菌(10.1%)为主;病毒感染则以呼吸道合胞病毒(4.0%)和腺病毒(3.6%)为主。结论苏州地区3岁以下儿童的肺炎主要是由细菌感染引起的,以革兰阴性杆菌为主,流感杆菌是主要的致病菌,其次是肺炎链球菌。

NICU内早产儿院内感染病原菌监测及耐药性分析

目的分析新生儿重症监护病房(NICU)早产儿院内感染病原菌及其耐药性变化,为防控早产儿院内感染提供依据。方法按照统一标准采集2005年9月—2009年3月间103例早产儿院内感染者的痰、尿液、皮肤分泌物和(或)血标本,进行细菌培养、鉴定;分析致病菌及其对抗生素的耐药性。结果检出病原菌165株,革兰阳性菌23株(13.9%),革兰阴性菌142株(86.1%)。革兰阴性菌是早产儿肺部、泌尿系、血液院内感染的主要致病菌,革兰阳性菌是早产儿皮肤感染的主要致病菌。革兰阴性菌以肺炎克雷伯杆菌常见,其次为大肠杆菌。革兰阴性杆菌对青霉素类、头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素耐药率较高,显著高于添加β-内酰胺酶抑制剂的抗生素、碳青霉烯类和喹诺酮类(P<0.05)。肺炎克雷伯杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL+)菌株占65.6%(42/64);大肠杆菌产EBSL+菌株占47.1%(8/17)。产EBSL菌株对青霉素类、头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素耐药性显著高于碳青霉烯类和喹诺酮类(P<0.05)。结论革兰阴性杆菌是NICU早产儿院内感染主要病原菌;产EBSL肺炎克雷伯杆菌和大肠杆菌比例较高,且对大多数抗生素耐药率高,值得重视;早产儿应尽量根据药敏试验合理使用抗生素。

牛磺酸抑制新生大鼠心肌重塑的体外研究

目的 通过牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及对Ⅰ /Ⅲ型胶原比值的影响 ,从细胞水平探讨其在体外抑制心肌重塑的作用。方法 在培养的心肌成纤维细胞中加入不同浓度的牛磺酸 ,用羟脯氨酸法测定胶原量 ,MTT比色法检测细胞增殖情况 ,SDS PAGE电泳测胶原Ⅰ /Ⅲ型比值。结果 10 0mmol/L、2 0 0mmol/L牛磺酸用药 2 4h和 4 8h及 5 0mmol/L用药 72h后能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成 ,Ⅰ /Ⅲ型胶原比值明显下降。结论 牛磺酸能通过抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成 ,降低Ⅰ /Ⅲ型胶原比值起到抗心肌重塑的作用。

苏州地区儿科重症监护病房呼吸道感染病例的临床分析

目的 归纳苏州大学附属儿童医院儿科重症监护病房（pediatric intensive care unit,PICU）5岁以下重症呼吸道感染病例的临床特征,探索影响患儿预后的危险因素.方法 根据医院信息系统（hospital information system,HIS）和PICU的出科纪录,检索2007年1月至2012年12月期间曾于PICU住院治疗的所有5岁以下重症呼吸道感染病例,回顾性收集病例的人口学资料、临床特征及住院转归等信息.比较≤6月龄及＞6月龄患儿的临床特征,对并发症及转归情况的危险因素进行单因素或多因素分析.结果 926例患儿列入研究,其中位年龄为4个月（IQR：2.0～10.8个月）,≤6月龄者占61.3％.18.2％患儿有基础疾病或早产史.咽红/咽痛（95.9％）、咳嗽（93.4％）为最常见的临床表现.并发症中呼吸衰竭占39.7％、心力衰竭占33.7％,有基础疾病及早产史的患儿多发（AOR=1.456,95％CI：1.009～2.107）.另外,有基础疾病及早产史的患儿住院时间更长（x2=14.7,P＜0.001）、治愈和好转率更低（AOR=0.721,95％CI：0.578～0.900）.≤6月龄患儿也较＞6月龄者住院时间更长（x2=18.2,P＜0.001）、治愈和好转率更低（AOR=0.770,95％ CI：0.660～0.900）.结论 PICU的患儿临床表现以咳嗽、咽红/咽痛、发热、呼吸急促为主,且常伴有消化道症状.有基础疾病及早产史的PICU严重呼吸道感染患儿发生并发症的风险更高,基础疾病、早产史及≤6月龄不利于患儿的治愈或好转.