血液制品生产中药用辅料麦芽糖质量可比性研究

目的通过全面比较2家国内厂家(B、C)与1家国外厂家(A)的药用辅料麦芽糖质量、过滤效果,并作为静注人免疫球蛋白产品辅料对产品质量进行可比性研究,确定不同厂家麦芽糖作为静注人免疫球蛋白辅料的可行性和可替代性。方法对不同厂家麦芽糖进行质量检验和质量比对、进行小规模过滤试验、静注人免疫球蛋白(pH4)生产后产品质量进行可比性研究。结果比对结果发现,国内厂家B与国外厂家A药用级麦芽糖质量上无显著差异,生产的静注人免疫球蛋白(pH4)质量上也无显著性差异。国内厂家C质量不符合要求。结论国内厂家B与国外厂家A生产的药用级麦芽糖质量无统计学差异,可用于静注人免疫球蛋白(pH4)的生产。

计划烧除技术在泉阳地区的应用

计划烧除技术在泉阳地区的应用￥吉林省泉阳林业局防火办＠丁亚凌＠王勇＠刘静祥计划烧除技术在泉阳地区的应用吉林省泉阳林业局防火办丁亚凌王勇刘静祥泉阳林业局位于吉林省抚松县境内，地处长白山腹部，白头山西北麓，东南高西北低，经营面积１０６２８７ｈｍ２，有林地面积９...

乙型肝炎人免疫球蛋白抗-HBs效价生物检定统计法的建立

目的采用生物检定统计法设计建立乙型肝炎人免疫球蛋白乙肝表面抗体(抗-HBs)效价的测定方法。方法按照欧洲药典(EP8.0)规定,用生物检定统计法斜率比模型中随机区组设计实验、数据统计分析、结果计算,通过与国际标准品比较计算供试品抗-HBs效价。结果每次独立实验可靠性检验符合欧洲药典(EP8.0)的要求,置信限范围为80%-120%,线性相关系数均>0.99,重复性RSD为1.92%,人员和时间因素在α=0.05水平上对方法的影响无统计学意义。结论乙型肝炎人免疫球蛋白抗-HBs效价生物检定统计法测定结果稳定、可靠,操作简便、快速、无污染,可用于乙型肝炎人免疫球蛋白抗-HBs效价的检测。

人血白蛋白辛酸钠应用于大鼠急性毒性的观察

目的找出静脉注射人血白蛋白辛酸钠大鼠未出现急性症状的辛酸钠最大用量及毒效应特征。方法对110只SD大鼠经静脉分别一次性注射辛酸钠5.3、10.6、21.2、42.4、84.8 mg/ml(相当于临床使用的1、2、4、8、16倍)的人血白蛋白溶液[辛酸钠白蛋白组1～5(实验组1～5)]和水溶液(辛酸钠对照组)[2种溶液的每种辛酸钠浓度(组)各注射10只],注射剂量分别为50、100、200、400、800 mg/kg,另10只注射0.9%NaCl作为阴性对照,于注射后d3、d7、d14称体重、每天观察死亡等毒性表现和行为特征,14 d后解剖大鼠,观察其内脏器官病变。结果无论是辛酸钠白蛋白组还是辛酸钠对照组,当辛酸钠为42.4、84.8 mg/ml(临床使用的8、16倍)时均造成了大鼠注射后的应激反应,而辛酸钠为5.3、10.6和21.2 mg/ml(临床使用的1、2、4倍)时未对大鼠造成任何急性毒性作用。结论人血白蛋白中辛酸钠增加至21.2 mg/ml(临床使用浓度的4倍)时不会对大鼠造成任何急性毒性作用。

RF-HPLC测定凝血因子Ⅷ中蔗糖含量方法的建立

目的测定血液制品人凝血因子Ⅷ中蔗糖的含量。方法利用中性沉淀剂亚铁氰化钾和硫酸锌沉淀样品中蛋白质,采用反相高效液相色谱法,以示差折光检测器检测,用外标法计算含量。结果当蔗糖取样范围为0.5%～2.5%时,直线相关系数为1.000 0,蔗糖的回收率为102%～103%。日内及日间重复测定的相对标准偏差(RSD)分别为0.4%和0.9%,2位操作人员测定结果经T检验P>0.05。结论此方法测定结果稳定、准确,可用于人凝血因子Ⅷ中蔗糖含量的测定。

RF-HPLC测定人免疫球蛋白中甘氨酸含量方法的建立

目的采用反相高效液相色谱法(RF-HPLC)技术,建立人免疫球蛋白中甘氨酸含量的测定方法。方法采用RF-HPLC,以邻苯二甲醛(OPA)为柱前衍生剂,采用自动进样器的自动衍生程序进行衍生化反应,在338nm波长处检测,用外标法计算甘氨酸的含量。结果当甘氨酸衍生化的取样范围为0.05～0.15 g/L时,直线相关系数为0.999 6～1.000 0,甘氨酸的回收率为96%～101%,日内及日间重复测定的相对标准偏差(RSD)分别为2.3%和1.5%,2位操作人员测定结果经T检验P值为0.77。结论 RF-HPLC测定结果稳定、准确,可用于人免疫球蛋白中甘氨酸含量的测定。

铝残留含量检测电感耦合等离子体质谱仪法建立及优化

目的建立及优化电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)法的铝(Al)残留含量检测方法。方法采用硝酸溶液作为消解试剂,对供试品及标准品进行处理,优化相应消解浓度及设备参数,并考察优化后检测方法的专属性、线性、重复性、准确性、检测限、定量限、中间精密度等。确认该方法是否适用于人血白蛋白中Al残留含量的检测。结果硝酸溶液浓度:5%;消解时间:4 h。ICP-MS设备条件:射频功率:1 600 W,采样深度:10 mm,雾化器/载气流速:1.0 L/min,载气补偿流速:0.5 L/min,实验模式:标准模式,积分时间:0.2 s,数据采集:3次。专属性:Al高/低浓度加样回收率分别为92%,98%;RSD为3.5%,4.9%;线性:在0~40μg/L范围内,标准品/样品的Al浓度与光能量信号值(cps)相关系数r均>0.999 0;准确性/重复性:高中低浓度样品Al加样回收率分别为:108%,110%,110%;RSD(%)分别为4.7%,4.9%,2.8%;检测限/定量限分别为:0.006μg/L,0.019μg/L;中间精密度:人员因素P>0.05,日期因素P>0.05,RSD;=2%,无显著差异。ICP MS法与原子吸收法(AAS法)检测结果比对:ICP-MS法与AAS法检测结果偏差为8%,加标样品结果偏差为3%,2种检测方法检测结果无显著差异。结论经优化后,Al残留量ICP-MS检测方法具有良好的专属性、线性、重复性、准确性、检测限、定量限、中间精密度,适用于本公司人血白蛋白制品的Al残留含量检测。

微量法测定人免疫球蛋白制剂Fc段生物学活性

目的通过改良《中国药典》收录的人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法,建立1种适用于酶标仪的高效检测方法。方法本文对《中国药典》收录(通则3514)的人免疫球蛋白FC段生物学活性测定方法,在敏化过程、样品处理及动力曲线参数上进行了调整,并同时采用Origin软件对溶血反应动力学曲线进行了拟合计算结果,使检测方法更适合于采用酶标板检测,通过对比标准品和供试品溶血反应动力学曲线计算人免疫球蛋白Fc段功能活性。结果本方法检测结果稳定,重复性和中间精密度RSD约为10%。检测效率大幅提升,采用96孔酶标板,最高可同时进行30批样品检测(较药典紫外分光光度法)。结论本方法测定人免疫球蛋白制剂Fc段功能活性的稳定性好,检测效率高,可用于人免疫球蛋白制剂中Fc段功能活性检测。

基质效应对注射用重组人凝血因子Ⅷ效价检测方法的影响

目的 考察不同基质对注射用重组人凝血因子Ⅷ(rFⅧ)效价检测方法的影响。方法 采用两种不同检测基质分别建立注射用重组人凝血因子Ⅷ效价检测方法,并对两种基质效应的影响进行了方法验证,包括专属性、线性、准确性/重复性和中间精密度。结果 专属性:高浓度两种基质加标回收率分别为112%,110%,低浓度两种基质加标回收率分别为104%,109%。线性:在0.125~1.000 IU/mL范围内,标准品/样品的浓度和凝固时间之间的相关系数r均>0.99。准确性/重复性:两种基质回收率分别为104%、102%,RSD分别为2.4%、1.9%。中间精密度:两种基质人员因素P值分别为0.72、0.23,日期因素P值分别为0.79、0.85,RSD12次分别为4.2%、3.0%。两种基质检测结果比对:6批重组人凝血因子Ⅷ(rFⅧ)检测结果差异均≤5%,两种检测基质的检测结果无明显差异。结论 两种检测基质均具有良好的专属性、线性、重复性、准确性及中间精密度,适用于重组人凝血因子Ⅷ(rFⅧ)产品的效价检测。

静注人免疫球蛋白生产工艺中活化凝血因子Ⅺ的形成与去除

目的调查活化凝血因子Ⅺ(activated coagulation factorⅪ,FⅪa)在静注人免疫球蛋白各个生产环节中的分布及含量,分析其在生产过程中的主要形成过程、去除过程及其影响因素。方法采用底物显色法对合并血浆、组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ(fractionⅠ+Ⅱ+Ⅲ,FⅠ+Ⅱ+Ⅲ)上清液、FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ上清液、FⅡ沉淀溶解液、FⅡ精制滤过液以及超滤配制后、低pH孵放后制品的FⅪa含量进行检测。添加硅藻土对合并血浆的FⅪ进行激活,将FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液采用双层滤纸过滤或离心进行FⅪa去除。结果FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段合并血浆FⅪ被激活形成FⅪa,其激活量为合并血浆的2500倍。FⅠ+Ⅲ分离阶段可去除合并血浆FⅪ活化后形成的约99.8%的FⅪa。结论FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段为FⅪa形成的主要阶段,该阶段硅藻土启动内源性凝血途径形成FⅪa;FⅠ+Ⅲ分离阶段为FⅪa去除的主要阶段,该阶段废弃吸附了FⅪa的硅藻土以去除工艺中形成的FⅪa;硅藻土为FⅪa形成与去除的主要影响因素。

第二批人血白蛋白国家对照品的研制标定

目的研制第二批人血白蛋白国家对照品,用于人血白蛋白等相关产品的质量活动。方法选择批签发检验合格的人血白蛋白产品作为原料进行合并、除菌、分装。制备后按照2020年版《中国药典》三部人血白蛋白各论要求,选择蛋白质含量、辛酸钠含量、乙酰色氨酸含量、多聚体含量、钠离子含量、pH、吸光度共7个检验项目进行多实验室协作标定。除乙酰色氨酸由5家实验室协作标定外,其余项目均由11家实验室完成协作标定。在LAB01开展对照品的稳定性监测。结果依据各实验室协作标定结果,该批国家对照品确立的参考范围分别为:蛋白质含量均值204.03 g·L^(-1),95%可信区间(203.05,205.00)g·L^(-1),参考范围(204.03±2.90)g·L^(-1);辛酸钠含量均值16.21 mmol·L^(-1),95%可信区间(15.98,16.44)mmol·L^(-1),参考范围(16.21±0.70)mmol·L^(-1);乙酰色氨酸含量均值16.28 mmol·L^(-1),95%可信区间(15.82,16.74)mmol·L^(-1),参考范围(16.28±0.74)mmol·L^(-1);多聚体峰面积百分比均值7.43%,95%可信区间(7.30,7.56)%,参考范围(7.43±0.38)%(HPLC-SEC);pH值均值6.95,95%可信区间(6.92,6.98),参考范围(6.95±0.08)[测定温度(22±5)℃];吸光度均值0.06,95%可信区间(0.06,0.06),参考范围(0.06±0.01);钠离子含量均值135.2 mmol·L^(-1),95%可信区间(131.2,139.2)mmol·L^(-1),参考范围(135±12)mmol·L^(-1)。所有检测项目结果在考察期内量值没有发生趋势性变化。结论该批人血白蛋白国家对照品符合相关要求,可以发放使用。

一种抗新型冠状病毒灭活血浆的制备及质量标准的建立

目的建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)灭活血浆的工艺及其质量标准。方法采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆,开展2019-nCoV、HIV和梅毒螺旋体等病原体的筛查,进行亚甲蓝光照灭活,并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子Ⅷ活性等,判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。结果亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化,血浆的凝血因子Ⅷ含量≥0.50 IU/ml,抗体滴度未出现明显下降,各项检测结果均符合质量要求。结论确立了以COVID-19康复者恢复期血浆制备抗2019-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。

人凝血因子Ⅷ活性生物检定统计法(显色法)的建立

目的依据《欧洲药典》8.0版规定的生物统计检定法原理,建立检测人凝血因子Ⅷ（FⅧ）活性的显色法。方法采用斜率比模型中随机区组设计显色法实验,进行数据统计分析及结果计算。以FⅧ国际标准品及FⅧ原液、成品为测试样品,确定其线性范围,并验证其重复性、中间精密度、专属性;用《中国药典》三部（2010版）规定的一期法和建立的方法进行比较。结果当FⅧ效价在0-17.85 IU/L范围内时,标准品和样品的线性相关系数（r）均大于0.99;重复性相对标准偏差（RSD）为2.1%;2位实验人员测定结果经t检验,差异无统计学意义（P〉0.05）;该方法置信限范围为80%-120%。两种方法检测结果差异无统计学意义（P〉0.05）。结论该方法操作简便、快速,测定结果稳定、准确,检测水平符合《欧洲药典》要求,可用于FⅧ活性检测。

血液制品中残留辛酸/根的急性毒性试验

目的探讨酸性条件下血液制品中残留辛酸/根的急性毒性。方法配制辛酸浓度分别为0.25、2.5和10 mg/ml的10%静注人免疫球蛋白(pH 4)溶液,另设阴性对照组(0.9%NaCl),经尾静脉注射SD大鼠,每只大鼠等容量注射,注射剂量为4.5 ml/只。每天观察1次大鼠的形态外观、四肢活动和行为方式,并记录大鼠摄食量,共14 d;给药后第3、7、14天称量大鼠体重,计算体重增长率;给药后第14天解剖所有动物,观察内脏器官病变情况。结果辛酸浓度为10 mg/ml时,大鼠出现了明显的应激反应、血尿和行为特征的改变,体重增长率明显降低(P<0.01),解剖后发现有较明显的肺部病变;辛酸浓度为0.25和2.5 mg/ml时,未表现出明显的应激反应和行为特征异常,解剖观察均与阴性对照组无明显差异。结论 10%静注人免疫球蛋白(pH 4)溶液中辛酸/根浓度为2.5 mg/ml时不会对大鼠造成急性毒性,为酸性条件下血液制品中辛酸/根残留的安全性评价提供了实验数据,也为后期制定10%静注人免疫球蛋白(pH 4)中残留辛酸/根的限量标准提供了参考。

恢复期血浆中新型冠状病毒核酸的提取试剂盒效率比较和检测方法适用性考察

目的通过比较提取效率选择新型冠状病毒核酸提取试剂盒,并考察方法对血浆的核酸检测适用性。方法采用3种不同厂家核酸提取试剂盒对血浆中新型冠状病毒核酸进行提取,使用1种核酸检测试剂盒进行扩增和核酸检测。结果核衣壳蛋白(nucleocapcid,N)基因片段和开放阅读框1ab(open reading frame 1a/b,ORF1ab)基因片段标准曲线的线性相关系数均≥0.999。核酸提取试剂盒A对ORF1ab基因的回收率为91%,对N基因的回收率为38%,试剂盒B对ORF1ab基因的回收率为104%,对N基因的回收率为44%,试剂盒C对ORF1ab基因的回收率为0%,对N基因的回收率为12%.采用试剂盒A、B均能达到100%正确率,试剂盒C仅能达到62.5%正确率,误检均为假阴性。结论采用提取试剂盒A、B和新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒进行核酸检测,均能满足新型冠状病毒肺炎康复者恢复期血浆中病毒核酸的检测需求。