来那度胺联合自体造血干细胞移植治疗POEMS综合征1例及文献复习

POEMS综合征(POEMS syndrome)是一种罕见的克隆性浆细胞病,Bardwick等[1]于1980年根据该疾病主要症状的首字母:多发性神经病(polyneuropathy)、脏器肿大(organmegaly)、内分泌异常(endocrinopathy)、M蛋白(mprotein)、皮肤改变(skin changes),提出了POEMS综合征的命名方式。POEMS综合征的临床表现复杂,涉及多个学科,并且没有特定的检查方法,所以POEMS综合征早期容易漏诊或误诊。该病发病机制尚不清,可能与细胞因子失衡相关。

Survivin抑制剂YM155对K562细胞凋亡和自噬的影响

目的:本研究旨在探讨survivin抑制剂YM155对人慢性髓系白血病细胞株K562凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度YM155处理K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RTPCR检测survivin、BCL-2及beclin1的mRNA表达水平,Western blot检测survivin、BCL-2、caspase-3、PARP及LC-3的蛋白表达。结果:YM155抑制K562细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性。随着药物浓度的升高及作用时间的延长,survivin和BCL-2的mRNA及蛋白表达水平下降,而caspase-3、PARP、beclin1及LC-3的表达水平升高。YM155联合3-MA组的LC-3和caspase-3蛋白表达水平以及K562细胞凋亡率均显著低于YM155单用组。结论:YM155通过诱导凋亡和自噬而抑制K562细胞的增殖,其自噬诱导效应与凋亡诱导效应有协同抗CML的作用。

高三尖杉酯碱通过mTOR通路诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡

目的:观察高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)对人CML细胞株K562的增殖及凋亡的影响,并从mTOR通路探索HHT抗CM L效应的作用机制。方法:采用不同浓度HHT或联合mTOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)处理K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖抑制活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测BCL-6、Caspase-3及mTOR通路相关蛋白的表达水平,RT-PCR法检测BCL-6 mRNA表达水平。结果:HHT可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,且呈浓度依赖性(r=0.970)。随着HHT作用浓度的增加,mTOR通路相关蛋白表达水平升高(r=0.908),而BCL-6 mRNA及蛋白的表达水平下降(r_(mRNA)=-0.961,r_(protein)=-0.981)。与HHT单用组相比,联用RAPA可显著下调mTOR及Caspase-3的表达,并上调BCL-6表达。结论:HHT可通过激活mTOR通路抑制抗凋亡BCL-6蛋白的表达,进而诱导CML细胞凋亡。

YM155诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬并促进其凋亡

目的 :研究生存素(survivin)抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡及自噬的影响及其可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时联合加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞与单用组比较细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Real-time PCR法检测不同加药组与对照组细胞的survivin、beclin 1和bcl-2的m RNA表达量;蛋白质印迹法检测survivin、bcl-2、caspase-3、PARP及自噬相关蛋白beclin 1和LC-3表达变化情况。结果:YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性。流式细胞结果显示YM155在0.5、1.0、1.5 ng/m L浓度对细胞的凋亡率分别是(11.9±2.4)%、(21.7±2.6)%、(30.8±4.5)%,与对照组(6.4±1.2)%相比具有统计学意义(P<0.01)。当使用自噬抑制剂3-MA(5 mmol/L)联合处理细胞24 h后细胞增殖率(62.5±3.3)%,与单用YM155组(54.7±2.7)%相比,细胞增殖活性增强(P<0.05)。YM155可显著下调survivn的m RNA和蛋白表达,降低bcl-2和提高caspase-3、PARP的蛋白表达,同时上调beclin 1表达及增加LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的比值,促进细胞自噬的发生。结论:YM155能够有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及自噬的发生,其诱导的自噬效应进一步促进其凋亡的发生。

细胞自噬对高三尖杉酯碱作用K562细胞的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)单用或与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对K562细胞凋亡及自噬的影响。方法:K562细胞在HHT(10 ng/ml)作用下1-8 d,采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用RT-PCR法、Western blot法和透射电子显微镜检测细胞自噬。结果:在HHT作用前期K562细胞凋亡率逐渐升高,而在后期则下降。HHT作用后,K562细胞的Beclin1表达及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值先下降后升高。HHT单用时,激活型caspase-3蛋白表达前期逐渐上升,而在后期下降。与自噬抑制剂3-MA联用组的K562细胞的Beclin1表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值持续下降,而激活型caspase-3蛋白表达则逐渐升高。结论:HHT可诱导K562细胞凋亡,但HHT持续作用可诱导K562细胞发生自噬,与3-MA联用则增强HHT的细胞毒作用。

靶向测序在疑诊髓系肿瘤患者中的临床应用

目的:探讨靶向基因测序在疑似髓系肿瘤患者中的临床意义。方法:对南京医科大学附属淮安第一医院血液科自2018年1月至2019年4月收治的39例疑似髓系肿瘤的血细胞减少患者进行骨髓增生异常综合征(MDS)常见的20个热点基因测序。结果:39例患者包括7例意义未明特发性血细胞减少症(ICUS),8例意义未明克隆性血细胞减少症(CCUS)和24例髓系肿瘤患者(MDS 18例,MDS/MPN 4例,急性髓系白血病2例)。70.8%(17/24)髓系肿瘤患者基因突变阳性;72.7%(16/22)MDS及MDS/MPN患者突变阳性。突变类型以ASXL1、TET2和RUNX1为主,与基因阴性组对比,两组之间的性别、年龄(<60岁或≥60岁)、骨髓原始细胞比例(<5%或≥5%)、细胞遗传学(好、中、差)均无显著统计学差异(P>0.05)。8例CCUS患者均为基因突变阳性,然而双突变或多突变的发生率较MDS及MDS/MPN患者显著降低(37.5%vs 54.5%)(P=0.002)。两组的基因突变类型相似,变异等位基因频率无统计学差异(P>0.05)。结论:靶向测序提示髓系肿瘤患者基因双突变或多突变的比例较高,尤其是MDS及MDS/MPN患者。靶向测序可以提高髓系肿瘤的诊断水平,指导临床治疗。

Acadesine对K562细胞的增殖抑制作用及其对伊马替尼敏感性增强的影响

目的:探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂Acadesine(AICAR)对K562细胞的增殖抑制作用及对伊马替尼(IM)敏感性的影响。方法:以不同浓度的AICAR单用或联合IM处理K562细胞48 h,应用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡,Western blot检测Cyclin D1、Cyclin E1及Caspase 3蛋白表达水平。结果:AICAR对K562细胞增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性,其48 h的IC_(50)为0.45 mmol/L;AICAR可诱导K562细胞发生G_1期阻滞并可下调Cyclin D1和Cyclin E1蛋白的表达水平,但不能诱导其凋亡发生;AICAR与IM联用与单用相比,K562细胞的增殖活性明显被抑制(P<0.05)。结论:AICAR可通过阻滞细胞周期抑制K562细胞增殖,且与IM具有协同作用。

高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562细胞诱导凋亡及BCL6表达的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562细胞增殖、凋亡及BCL6蛋白和mRNA表达的影响。方法:应用CCK-8法检测HHT和IM单用及联用对K562细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析BCL6蛋白表达水平,RT-PCR检测BCL6 mRNA表达水平。结果:单用HHT对K562细胞增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性(r=0.820),诱导K562细胞凋亡;联合用药组细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P<0.05);单用HHT作用后BCL6蛋白表达下调,IM作用后BCL6蛋白表达明显上调,联合用药与IM单药相比,BCL6蛋白表达出现下调,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,HHT和IM单药处理后BCL6 mRNA表达均出现下调,联合用药组较单用组下调更显著(P<0.05)。结论:HHT可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,且与IM有协同作用。HHT可能通过抑制BCL6表达增强K562细胞对IM的敏感性。

酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性髓系白血病疗效预测的研究进展

酪氨酸激酶抑制剂(TKI)已使慢性髓系白血病的临床疗效有了突破性的提高,但TKI耐药和患者不耐受的出现使部分患者难以获得满意疗效,治疗前筛选出高危患者以选用合适的TKI以及在治疗过程中早期发现耐药而及时转换TKI,有助于TKI的精准使用和疗效的进一步提高。本文就初诊患者基线临床、生化和分子生物学特征和伊马替尼早期治疗反应规律对患者远期预后影响的最新研究进展作一综述。

高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562/G01细胞的作用及机制研究

目的:探索高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562/G01细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:应用CCK-8法检测HHT联合IM对K562/G01细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率及磷酸化酪氨酸水平,Western blot检测P210及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果:HHT联合IM与单药相比,对K562/G01细胞的增殖活性具有明显抑制作用(P<0.05),细胞的凋亡率显著增加(P<0.05);HHT与IM联合可显著抑制K562/G01细胞内的p-Tyr及p-Crkl的表达水平,并能使p210蛋白及其下游通路蛋白P13K和p-Akt的表达水平明显降低。结论:HHT联合IM可协同抑制K562/G01细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制p210蛋白表达及其激酶活性有关。

微移植巩固治疗对完全缓解后急性髓系白血病患者的疗效分析

目的:观察微移植在急性髓系白血病(AML)中的疗效与安全性。方法:回顾性分析2014年7月至2019年10月接受微移植作为巩固治疗的13例成人AML患者的临床资料,随访观察微移植治疗的不良反应与疗效。结果:13例微移植患者中有8例仍处于完全缓解状态,5例患者微移植后复发,其中1例再诱导缓解后行脐血微移植。目前13例均处于生存状态,中位总生存期为13个月,中位无复发生存期为12个月。13例患者均发生2-4级血液学不良反应;中性粒细胞中位恢复时间13(11-15)d,血小板中位恢复时间15(13-17)d。13例患者均未发生急慢性移植物抗宿主病;12例患者发生不同严重程度的感染,无严重脏器功能损伤。结论:HLA不相合外周血和脐血来源的干细胞微移植是巩固治疗AML的有效方案,尤其对于低中危、老年AML患者疗效较显著。

泛素化修饰对K562/G01细胞BCL6蛋白表达水平的调节及对细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨泛素蛋白酶系统(UPS)对伊马替尼(IM)耐药细胞株K562/G01中BCL6蛋白水平及耐药细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用Western blot技术检测蛋白酶抑制剂MG-132处理CML细胞前后BCL6蛋白水平差异;用RT-PCR及Western blot方法分别检测ML364(泛素特异性蛋白酶USP2抑制剂)处理前后K562/G01细胞株中BCL6及USP2 mRNA和蛋白的表达水平;应用CCK-8法及流式细胞术分别检测ML364和IM单用及联用对K562/G01细胞增殖及凋亡的影响。结果:蛋白酶抑制剂M G132处理后,K562/G01的BCL6蛋白水平显著上升(P<0. 05); K562/G01细胞株的去泛素化酶USP2 mRNA和蛋白表达水平均高于K562细胞株(P <0. 05); M L364处理K562/G01后,USP2和BCL6蛋白表达水平同步下调(P <0. 05);与IM单药组相比,ML364与IM联合用药组K562/G01细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P <0. 05)。结论:M L364通过抑制USP2介导的BCL6蛋白去泛素化水平降低K562/G01细胞株BCL6蛋白稳定性,使K562/G01细胞株中BCL6蛋白表达下调,从而增加耐药细胞对IM的敏感性。

伴ETV6-ABL1融合基因重排和RUNX1突变的骨髓增殖性肿瘤1例并文献复习

目的探讨伴ETV6-ABL1融合基因重排和Runt相关的转录因子1(RUNX1)突变骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者的临床特征、治疗及预后。方法回顾性分析该院收治的1例同时伴有ETV6-ABL1融合基因重排和RUNX1突变的MPN患者临床资料,应用常规细胞遗传学方法、多重巢式逆转录PCR(RT-multiplex nested PCR)进行遗传学分析;高通量测序技术、血液肿瘤全外显子检测基因突变,并以“ETV6-ABL1”“myeloproliferative neoplasm”“RUNX1 mutation”为检索词,检索PubMed数据库进行文献复习。结果患者为中年男性,临床表现主要为腹胀不适;体格检查显示巨脾;外周血白细胞明显升高,嗜酸性粒细胞增多;骨髓穿刺及活检显示骨髓增生活跃,嗜酸性粒细胞比例增高;染色体核型分析为46,XY,t(9;12)(q34;p13)[14]/46,XY[6];RT-multiplex nested PCR筛查显示ETV6-ABL1融合基因阳性;基因检测提示RUNX1 c720_733del(p.his242 AlafsTer14,NM_001754.4)移码突变;血液肿瘤全外显子检测显示RUNX1突变,为体细胞突变;颈部淋巴结穿刺病理及免疫组织化学显示髓系肉瘤;达沙替尼(100 mg/d)联合IA方案(去甲氧柔红霉素+阿糖胞苷)化疗,化疗后行异基因造血干细胞移植,移植后继续口服达沙替尼治疗,后续多次测ETV6-ABL1融合基因阴性。文献检索共报道21例伴ETV6-ABL融合基因阳性MPN患者,早期加用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)可延长生存,4例伴淋巴结受累患者中3例死亡。结论伴ETV6-ABL1融合基因的MPN患者具有特殊的临床及遗传学特征,分子遗传学检查有助于早期诊断,治疗应及时加用TKI,但合并RUNX1突变者TKI疗效有限、预后差,异基因造血干细胞移植可能改善患者预后。

YM155对乳腺癌细胞 MDA-MB-231凋亡影响的机制探讨

目的：研究生存素（ survivin）抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡效应及其可能的作用机制。方法采用CCK-8法实验检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响，计算其24及48 h半数抑制浓度（ the half maximal inhibitory concentration ，IC50）；流式细胞术检测细胞凋亡情况；RT-PCR法检测加药与对照组细胞的survivin 和bcl-2的mRNA的表达量；蛋白质印迹法检测sur-vivin、bcl-2、caspase-3、PARP蛋白表达变化情况。结果 YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性，24及48 h的IC50分别为（1.749±0.265）及（0.823±0.125） ng／ml。流式细胞仪检测显示YM155在0.5、1.0及1.5 ng／ml浓度对细胞的凋亡率分别是（10.93±0.94）％、（31.10±1.51）％及（46.83±2.92）％，与对照组（6.4±1.2）％相比差异具有统计学意义（P＜0.01）。 YM155可显著下调survivin的mRNA和蛋白表达，同时降低bcl-2和提高caspase-3、PARP的蛋白表达。结论 YM155能有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡，其诱导凋亡机制是通过下调survivin蛋白，激活caspase凋亡通路，切割DNA而引发凋亡；bcl-2家族基因可能参与此过程。

三氧化二砷在慢性髓细胞白血病中的研究进展

早在19世纪,Fowler液,即三氧化二砷（arsenic trioxide,ATO）就被用于慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）的治疗,在化疗药物问世之前,ATO一直是治疗CML的主要药物,单用ATO 2周可使74%的慢性期CML患者获得完全血液学缓解〔1-2〕。由于其独特的作用机制,即使在酪氨酸激酶抑制剂时代,ATO仍可在CML的治疗中发挥独特的作用〔3-4〕。本文就近年来ATO治疗CML的研究进展作一综述。

mTOR信号通路与自噬、凋亡之间的相互关系

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)是一种进化上相对保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其信号通路复杂,被激活后可通过磷酸化其下游靶蛋白调节多种细胞功能。大量研究显示,m TOR信号通路与自噬、凋亡的发生均有关。作者就此方面的研究进展作一综述。

意义不明的克隆性造血的研究进展

一般认为，以血液系统相关肿瘤基因突变为标志的克隆性造血是血液系统恶性肿瘤的重要特征之一，但早在1997年，Champion等“’采用人雄激素受体（human androgen receptor，HUMARA）检测X染色体灭活的方法证实在健康女性体内存在克隆性造血。近年来，采用更敏感的分子生物学检测技术发现克隆性造血在健康人群中颇为常见，但其临床意义以及预后尚不明确，Steensma等将其命名为意义不明的克隆性造血（clonal hematopoiesis of indeterminate potential，CHIP）。本文我们就CHIP的内涵、与骨髓增生异常综合征（MDS）的鉴别以及预后意义进行综述。

地西他滨为主化疗方案联合微移植巩固治疗伴TP53突变骨髓增生异常综合征老年患者一例并文献复习

目的探讨地西他滨为主的化疗方案联合微移植巩固治疗伴TP53突变骨髓增生异常综合征(MDS)老年患者的疗效及安全性。方法回顾性分析南京医科大学附属淮安第一医院收治的1例接受地西他滨、中剂量阿糖胞苷联合微移植治疗的伴TP53突变老年MDS患者的临床资料,并进行文献复习。结果患者3次巩固治疗期间耐受性良好,3次移植后中性粒细胞恢复时间分别为15、16、14 d,血小板恢复时间均为16 d,均未发生急、慢性移植物抗宿主病(GVHD);粒细胞缺乏期合并感染,积极抗感染治疗后好转,无严重脏器损伤相关并发症发生。结论地西他滨为主的化疗方案联合微移植治疗伴TP53突变的老年MDS患者安全、有效,值得进一步研究探讨。