白细胞介素-10的免疫双重作用及抗炎应用进展

白细胞介素-10(IL-10)是抗炎细胞因子,近年来,大量研究显示IL-10兼具免疫刺激和免疫抑制的双重作用。本文分析了IL-10发挥双重免疫调节作用的机制与主要抗炎作用通路,综述了IL-10在炎性疾病中的治疗潜力及IL-10的药物开发方向。

新冠肺炎并发细胞因子风暴的临床前药效评价方法研究进展

新型冠状病毒-2(SARS-CoV-2)感染的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者存在严重的肺部炎症和细胞因子风暴,因此,细胞因子风暴的治疗是抢救COVID-19危重病人的重要环节。作为重要的致死因素,细胞因子风暴的临床前研究必不可少,相关的体内外实验也是今后开发COVID-19新药的必经之路。该文综合国内外相关研究结果,提供了细胞因子风暴的体内外实验方法,包括动物模型的建立、细胞评价方法、药效学评价指标等,旨在对细胞因子风暴的临床前研究方法予以参考指导。

IL-12在血象恢复领域的非临床药效研究进展

白介素12(inlerleukin-12,IL-12)是由α亚基和β亚基经1个二硫键共价结合而成的异二聚体糖蛋白,可通过直接或间接作用,促进造血干细胞的增殖及分化过程,实现造血功能重建,恢复血象。多项临床前研究证实了IL-12可与其他细胞因子协同刺激血细胞生成,且具有免疫调节作用。本文主要综述了国内外发表的IL-12用于血象恢复领域的动物药效学研究。

IL-12抗肿瘤非临床药效学研究进展

白介素12(inlerleukin-12,IL-12)是一种包含α和β亚基的异二聚体细胞因子,是链接天然免疫和获得性免疫的桥梁,有多项生物学功能,包括刺激血细胞生成、免疫调节、抗肿瘤等。多项临床前研究证实了IL-12具有良好的抗肿瘤效应,本文主要综述了国内外发表的IL-12单药抗肿瘤,及联合放化疗、免疫治疗等治疗方式联合抗肿瘤的动物药效学研究。

IL-12抗肿瘤临床研究进展

白介素-12(inlerleukin-12,IL-12)在临床前研究中显示出了较好的药效及安全性,随后展开了IL-12用于肿瘤治疗的临床研究。早期研究探索了给药方案、IL-12的最大耐受剂量和易感肿瘤。但因给药剂量大,给药次数频繁,其全身给药引起了严重的副作用。由于出现了严重的受试者死亡医疗事故,关于IL-12的临床研究被FDA停止。在经过了几年研究低迷之后,目前又恢复了对IL-12治疗潜力的研究,其给药策略在持续探索中。

氨基酸序列比对分析IL-12的种属特异性

采用生物信息分析学方法,通过UniProt数据库检索人、鼠、兔、犬和猴的白介素-12(IL-12)氨基酸序列,运用ClustalW及Espript软件进行两序列比对,运用Blat数据库进行多序列比对,分析了人的IL-12氨基酸序列与其它种属的差异。结果表明,人的IL-12α亚基及IL-12β亚基氨基酸序列与各种属的同源性大小顺序均为猴源>犬源>兔源>鼠源,说明人的IL-12氨基酸序列与恒河猴、食蟹猴的一致性较高,与其它种属的一致性普遍较低,因此存在种属特异性。该研究为IL-12产品的非临床研究和评价中的动物种属选择提供了参考,可指导新药产品的注册申报。

阳离子脂质体运载基因的跨膜机制

阳离子脂质体等非病毒载体以其制备简单、低毒性、低免疫原性、可生物降解等优点,成为近年来基因转运中的常用载体。理解阳离子脂质体运载基因的机制对阳离子脂质体的研究具有重要意义。从跨膜机制和信号调控的角度,介绍了脂质体/DNA复合体以特定构象避免细胞外基质中核酸酶的降解,跨越细胞膜进入细胞的过程;阐明了DNA在信号调控的作用下,逃离溶酶体并安全释放的机制;讨论了基因穿过核被膜进入到细胞核的方式,为进一步阐明阳离子脂质体运载基因的分子机制奠定基础。

Hela细胞对阳离子脂质体/DNA复合体的摄取机制

该文主要研究了Hela细胞对阳离子脂质体/DNA复合体的摄取机制。通过使用抑制剂抑制真核细胞跨膜运输的相关路径,再通过阳离子脂质体将绿色荧光蛋白基因、荧光素酶报告基因转染到细胞中。利用荧光显微镜、微光检测仪定性以及定量检测不同抑制剂浓度下转染效率的差异,MTT法检测各浓度下的细胞存活率,确定对相应路径的依赖性。结果显示,在细胞存活率保持在60%以上的前提下,镜下观察到随着药物浓度的升高,荧光强度明显减弱,微光检测数据显示随着药物浓度增加,基因表达的效率具有明显的下降趋势。因此推测,Hela细胞主要通过网格蛋白以及小窝蛋白介导的路径摄取脂质体/DNA复合体,对于微管微丝介导的巨胞饮作用也具有一定的依赖性。

脂质体介导RNAi的研究

本文选用阳离子脂质体Lipofectamine 2000为基因载体,使用沉默荧光素酶基因的小干扰RNA(siRNA)进行体外RNA干扰(RNAi),对阳离子脂质体转运siRNA的效率进行研究。首先以阳离子脂质体运载质粒DNA转染细胞,并以延滞实验对阳离子脂质体与siRNA的结合能力进行检测;然后通过基因载体将荧光素酶基因载入细胞,转运不同浓度的siRNA对其进行沉默,应用酶标仪对荧光素酶基因的表达进行分析,并用MTT法对转染后细胞存活率进行检测。结果表明:阳离子脂质体Lipofectamine 2000可以高效转运质粒DNA,并可与siRNA很好地结合。在较低的siRNA浓度下,对荧光素酶基因的沉默率达到较高的水平,转运siRNA转染细胞对细胞活性的影响很小,但细胞存活率随着siRNA浓度的增加而逐渐降低。通过优化实验条件,阳离子脂质体转运较低浓度的siRNA即可高效沉默目的基因。