双胍基修饰聚酰胺-胺/阿霉素递药系统的构建及体外评价

目的:构建双胍基(biguanidine,BIG)和聚乙二醇修饰的pH/还原敏感聚酰胺-胺(PAMAM)聚合物(PSSPG),并考察其对阿霉素(DOX)细胞内递送的影响。方法:合成3种不同双胍基比例修饰的双胍基化聚酰胺-胺聚合物,物理包载抗肿瘤药物阿霉素制得3种载药复合物(PG25/DOX,PG50/DOX,PG100/DOX),考察双胍基化修饰程度对双胍基修饰聚酰胺-胺/阿霉素复合物细胞摄取的影响。随后制备PEG化聚酰胺-胺/阿霉素复合物和双胍基修饰PEG化聚酰胺-胺/阿霉素复合物,并对其粒径电位、载药量、包封率、细胞摄取、体外释放以及细胞毒性等进行考察。结果:3种双胍基修饰聚酰胺-胺/阿霉素复合物的粒径均在40~50 nm,具有较高的包封率和载药量;随双胍基修饰程度的增加,复合物摄取略有增加;体外释放结果表明二硫键修饰复合物具有明显pH/还原敏感性;与PEG化聚酰胺-胺/阿霉素复合物相比,双胍基修饰PEG化聚酰胺-胺/阿霉素复合物组体外细胞实验摄取增加,细胞毒性亦随之增加。结论:双胍基和PEG修饰的pH/还原敏感聚酰胺-胺载体可用于细胞对于阿霉素的高效转运。

RGD修饰的线粒体靶向长循环脂质体的制备及初步体外评价

以前药三苯基膦(TPP)-白藜芦醇(1)为模型药,采用薄膜分散法制备RGD修饰的线粒体靶向长循环脂质体(RLP-TPP-1脂质体)。首先将TPP与抗肿瘤药1共价结合得到线粒体靶向前药TPP-1,然后将其包载于脂质双分子层中,最后通过后插法在脂质体表面连接长循环的聚乙二醇(PEG)和细胞靶向肽RGD。所得RLP-TPP-1脂质体呈球形,分布均匀,平均粒径(128.1±3.4)nm,ζ电位(-20.28±1.68)mV,包封率(75.6±0.8)%。体外细胞毒性试验表明,空白脂质体对表面过表达anb3受体的MDA-MB-231细胞无明显毒性,但载药脂质体对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。其中,RLP-TPP-1组IC50值最低(4.95mmol/L)。细胞摄取试验表明,孵育4 h后,肿瘤细胞对RGD修饰脂质体的摄取显著高于未修饰脂质体组。采用JC-1染色法考察制品的线粒体靶向作用,结果显示RLP-TPP-1脂质体组线粒体靶向效果最佳,凋亡细胞增多。

T7肽修饰氧化还原敏感型聚酰胺-胺作为siRNA递送载体的初步评价

拟构建一种具有潜在肝肿瘤靶向作用的T7肽修饰氧化还原敏感聚酰胺-胺(T7-PEG-SS-PAMAM,T7-PSSP)复合物,并用于M2型丙酮酸激酶(PKM2)-siRNA的体外递送。聚合物T7-PSSP的结构特征通过~1H NMR进行确证。制备的T7-PSSP/siRNA复合物粒径为(119.8±0.76)nm,多分散系数(PDI)为0.19±0.12,ζ电位为(8.92±0.38)mV。琼脂糖凝胶电泳试验证明载体-基因复合物具有较好的稳定性,且对siRNA具有较好的保护作用。通过凝胶电泳法观察到,在谷胱甘肽还原剂的作用下,siRNA能快速从PSSP/siRNA复合物中释放出来,说明PSSP/siRNA复合物在还原环境中可有效释出携载的siRNA。体外摄取试验表明,T7肽的修饰可以显著提高siRNA在肝癌细胞HepG2中的摄取量。实时荧光定量RT-PCR结果显示,与阴性对照和其他复合物组相比,T7-PSSP/siRNA具有最高的PKM2基因转染和沉默效率。