RNA在离体小鼠肝脏组织中的稳定性

采取肝脏等临床样本时,常因不能及时保存造成核酸降解,从而影响后续实验的进行.本研究旨在通过对室温条件下放置不同时间的小鼠肝脏组织的RNA的完整性进行评价,为肝脏临床样本的采集与保存提供依据.将离体小鼠肝脏组织在室温下放置0～180min后,提取总RNA,采用电泳、RT-PCR和芯片生物分析仪检测RNA的完整性.电泳结果显示,将小鼠肝脏置于室温180min后,RNA尚未发生降解.对β肌动蛋白,GAPDH和Trp53的RT-PCR的分析表明,室温下保存180min的RNA样品均未降解.生物分析仪检测的RNA完整性系数(RIN)都大于7.9,样品可用于后续研究.因此,离体后的小鼠肝脏置于室温下3h以内,RNA仍能保持其完整性.

三唑磷对斑马鱼miR-99及其预测靶标ckmt2的表达的影响

在农药三唑磷作用下,miRNA的表达发生改变;并通过与靶基因的配对,从而调控基因的表达。本文采用荧光定量PCR和Western blot等方法对miR-99及其潜在靶基因ckmt2的表达变化进行了研究。结果表明,三唑磷处理后miR-99表达是对照的0.062倍,助剂处理是对照的0.414倍,表达下调;三唑磷处理后ckmt2基因是其对照的0.91倍,助剂处理是其对照的0.89倍,在mRNA水平变化不显著。三唑磷及助剂处理后,斑马鱼的总蛋白含量减少,CKMT2蛋白含量增加,采用独立样本检验方法分析结果表明,处理前后的CKMT2蛋白质含量差异显著。综上所述,在三唑磷作用下,斑马鱼miR-99对潜在靶标基因ckmt2的表达可能存在抑制作用,miR-99表达的降低致使对ckmt2表达抑制的作用减弱,从而提高ckmt2的表达。