外源性甲状腺素对胎儿酒精效果出生后大鼠小脑发育的改善作用

目的研究胎儿酒精效果对大鼠小脑皮质中脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶B(TrkB)的影响及外源性甲状腺素(T4)的效应。方法选择怀孕第6天的SD孕鼠随机分为酒精组、正常组、酒精+T4组以及代理母鼠组。酒精组孕鼠摄取1 475 J/d的酒精;正常组孕鼠摄取与酒精组同热卡的奶粉;酒精+T4组孕鼠摄取与酒精组同量的酒精,同时皮下注射5μg/(kg.d)甲状腺素;代理母鼠组摄取正常鼠食。酒精组、正常组、酒精+T4组母鼠分娩6 h后处死采血,测试血中酒精浓度和甲状腺素含量。三组仔鼠由代理母鼠养育,并分别于生后第7、14、21、28、60、90天麻醉处死,采用免疫组织化学染色法,观察小脑皮质中BDNF和TrkB阳性浦肯野细胞的分布及形态,并测算小脑4/5小叶中单位面积所含的BDNF或TrkB阳性浦肯野细胞数。结果三组18只母鼠(每组6只)及其所生仔鼠中144只(每组均选择48只)纳入分析。酒精组、酒精+T4组母鼠的血液酒精浓度高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);酒精+T4组母鼠血液甲状腺素含量高于酒精组,差异有统计学意义(P<0.05)。酒精+T4组仔鼠从第14天开始,小脑皮质中出现分布及形态与正常组类似的BDNF和TrkB阳性浦肯野细胞,酒精组仔鼠小脑皮质中始终未出现BDNF和TrkB阳性浦肯野细胞。酒精+T4组仔鼠小脑中BDNF和TrkB阳性浦肯野细胞数,从第14天起与正常组无差异(P>0.05);酒精组仔鼠小脑中BDNF和TrkB阳性浦肯野细胞数,从第28天起较正常组及酒精+T4组显著减少(P<0.01),并持续到第90天。结论外源性甲状腺素能促进小脑皮质中BDNF和其特异性受体TrkB的合成,促进BDNF-及TrkB-阳性浦肯野细胞的发育,进而改善胎儿酒精效果致低甲状腺素所引起的小脑发育障碍。

母鼠孕期摄入乙醇对子鼠背侧中缝核内5-羟色胺合成的影响

[目的]探讨母鼠孕期摄入乙醇对子鼠背侧中缝核内5-羟色胺(5-HT)合成的影响.[方法]选择SD母鼠24只,于怀孕第6日随机分为乙醇组、正常对照组和代理母组.乙醇组母鼠每日摄取热量为35 cal的乙醇,正常对照组母鼠为35 cal糊精,代理母组母鼠为普通饲料.乙醇组、正常对照组母鼠分娩6 h后与其子鼠分开,麻醉后心脏采血,检测血液中乙醇和甲状腺素水平.乙醇组及正常对照组新生子鼠由代理母组代理母鼠养育,并分别于出生后0,7,14,21,28 d时麻醉处死子鼠,采用免疫组织化学ABC染色法观察子鼠背侧中缝核内含有5-HT的神经元的分布及形态.[结果]乙醇组母鼠血中乙醇浓度明显高于正常对照组,而乙醇组母鼠血中甲状腺素水平明显低于正常对照组.正常对照组子鼠生后7 d开始出现成熟的含有5-HT的神经元,即可观察到长而突起明显的、双极或多极的含有5-HT的神经元,出生后14 d开始出现含有5-HT神经元突起所形成的分支及其相互间的连接.乙醇组子鼠始终未出现具有上述表现的成熟的含有5-HT的神经元.在所有时间段中,乙醇组子鼠含有5-HT的神经元数均较正常对照组明显减少,并于生后第7日开始显著减少.[结论]母鼠孕期摄取乙醇不仅可引起血中甲状腺素水平降低,而且可抑制后代背侧中缝核内5-HT的合成及神经元的发育.

孕期持续摄取乙醇母鼠体内注入甲状腺素对新生子鼠脑发育的影响

目的:通过孕期持续摄取乙醇母鼠体内注入甲状腺素,观察母体接受外源性甲状腺素时能否改善胎儿乙醇综合征引起的脑损伤。方法:实验于2003-09/2004-08在韩国朝鲜大学神经解剖实验室完成。选择SD母鼠36只,于怀孕第6天随机数字表法分为乙醇组(n=6),每日摄取22%乙醇20mL(热量为147J);正常对照组(n=6),每日摄取糊精(日本)35mL(热量为147J);乙醇+6.5mol/L甲状腺素(T4,Sigma)组(n=6),每日摄取22%乙醇20mL(热量为147J),并每日在颈后皮下注入T4(5μg/kg);代理母组(n=18),正常摄取食物。乙醇组、正常对照组、乙醇+T4组母鼠分娩6h后,与其子鼠分开,麻醉后心脏采血,由韩国朝鲜大学医院检验室测试血中乙醇浓度和T4含量,并以Kruskal-Wallistest分析。3组新生子鼠由代理母组的代理母鼠养育,分别于生后0,7,14,21,28d时麻醉处死,采用免疫组织化学染色法,在大脑皮质中观察含有神经肽Y的神经细胞的分布及形态,并在大脑皮质的Ⅴ,Ⅵ层中测单位面积含有神经肽Y的神经细胞数。结果:纳入母鼠18只及其所生的子鼠90只均进入结果分析。①乙醇+T4组大鼠生后14d始出现分布及形态与正常对照组类似的成熟的含有神经肽Y神经细胞,即可观察到长而明显突起的、双极或多极的神经细胞突起所形成的分支以及其相互间的连接,乙醇组大鼠始终未出现具有上述表现的成熟的含有经肽Y神经细胞。②乙醇组、乙醇+T4组乙醇浓度高于正常对照组,差异显著[分别为(0.015±0.006)%,(0.012±0.005)%,0,P=0.014];乙醇+T4组T4含量高于乙醇组,差异显著[分别为(33±6),(22±4)μg/L,P=0.022]。③乙醇组含有的神经肽Y神经细胞数,在生后各年龄阶段中均较正常对照组明显减少,并于生后14d开始出现差异显著[分别为(16.3±1.3),(27.8±1.0)个/cm2,P<0.0001]。乙醇+T4组含有神经肽Y的神经细胞数,仅在生后0d时出现类似于乙醇组,与正常对照组有明显差异[分别为(5.3±0.7),(10.5±0.8)个/cm2,P<0.001],但其余日龄中差异均无显著性意义(P>0.05),乙醇+T4组含有神经肽Y的神经细胞数在生后7d时高于乙醇组,差异显著[分别为(14.2±1.7),(8.5±0.9)个/cm2,P<0.05],生后14d开始出现差异非常显著[分别为(28.7±1.1),(16.3±1.3)个/cm2,P<0.0001]。结论:孕期滥用乙醇的母体接受外源性甲状腺素时,能促进其后代生后早期大脑皮质中神经肽Y的合成,促进含有神经肽Y的神经细胞的发育,进而能够改善胎儿乙醇综合征等降低甲状腺素所引起的脑发育障碍。

外源性甲状腺素对胎儿酒精效果大鼠背侧中缝核中5-羟色胺的影响

目的:研究胎儿酒精效果时大鼠背侧中缝核中5-羟色胺(5-HT)的变化以及外源性甲状腺素对其的影响。方法:实验于2006年1～7月在韩国朝鲜大学神经解剖实验室完成。选择SD母鼠36只,于怀孕第6天随机数字表法分为酒精组、正常对照组、酒精+甲状腺素组3个实验组和代理母组。酒精组每天摄取35 Cal的酒精;正常对照组每天摄取与酒精组相同热量的含糖奶粉;酒精+甲状腺素组每天摄取与酒精组同量的酒精,同时每天在颈后皮下注入5 mg/kg的T4;代理母组每天摄取正常的鼠食。酒精组、正常对照组、酒精+甲状腺素组母鼠分娩6 h后,与其子分开,麻醉后心脏采血,由韩国朝鲜大学医院检验室测试血液中酒精浓度和甲状腺素量,并以Kruskal-Wallistest分析。3组新生子鼠由代理母组的代理母鼠养育,并分别于生后0,7,14,21,28天(P0、P7、P14、P21、P28)时麻醉处死,采用免疫组化染色法,在脑干背侧中缝核中观察含有5-HT神经细胞的分布及形态。结果:①酒精组、酒精+甲状腺素组母鼠血液中酒精浓度高于正常对照组,差异显著(P<0.05)。酒精+甲状腺素组母鼠血液中甲状腺素含量高于酒精组,差异显著(P<0.05)。②酒精+甲状腺素组大鼠生后7天始出现分布和形态与正常对照组类似的成熟的含有5-HT神经细胞,即可观察到长而明显突起的、双极或多极的5-HT能神经元,生后14天始出现5-HT能神经元突起所形成的分支以及其相互间的连接。酒精组大鼠始终未出现具有上述表现的成熟的含有5-HT神经细胞。生后各年龄阶段背侧中缝核中,酒精组大鼠含有5-HT神经细胞数均较正常对照组明显减少,并在生后7天始出现的减少更明显。结论:孕期滥用酒精的母鼠接受外源性甲状腺素时,能促进其后代生后早期脑干背侧中缝核中5-HT的合成,促进含有5-HT能神经元的发育,进而能够改善胎儿酒精效果等降低甲状腺素所引起的脑发育障碍。