肾功能不全患者处方审核规则的优化与实践

目的:构建我院肾功能不全患者处方审核规则库,提高处方审核系统适用性,保障患者合理用药。方法:通过引入定量评价指标,优化患者肾功能评估流程,从剂量调整和药物选择两方面细化相关审核规则,对比优化前后系统规则的适宜性与临床认可度。结果:优化后,系统规则的假阳性率和假阴性率均下降(P<0.05),系统审核后医生修改率提高(P<0.05)。结论:通过处方审核规则库的二次构建,可以有效提高审方系统的临床契合度,在保障患者合理用药的同时有利于处方审核工作的可持续开展。

冬凌草甲素抗突变性研究

目的 :探讨冬凌草甲素的抗突变作用。方法 :采用Ames试验及小鼠骨髓嗜多染红细胞 (PCE)微核试验。结果 :冬凌草甲素在未加S9条件下 ,对TA98及TA10 0回复突变具有明显的抑制作用 ,其最高抑制率分别达 89 1%及 80 2 % ;对由环磷酰胺(CP)诱导的小鼠骨髓PCE微核发生率也有显著的拮抗作用 (P <0 .0 1)。结论

人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建

中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。

pcDNA3．1-hTERT真核表达载体的构建及其抗肿瘤效应

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)真核表达载体pcDNA3.1-hTERT,并观察其对荷瘤小鼠的抗肿瘤效应。方法:用RT-PCR方法扩增出带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-TEasy克隆载体连接,筛选出阳性克隆,酶切获得目的片段,与pcDNA3.1载体连接,构建pcDNA3.1-hTERT表达载体。将真核表达载体pcDNA3.1-hTERT注射移植性H22肝癌模型C57BL/6小鼠,并设PBS组及转染空质粒pcDNA3.1组,观察3组的抗肿瘤效应。结果与结论:成功构建pcDNA3.1-hTERT真核表达载体。该载体中的hTERT基因片段全长为951 bp,可编码相对分子量为37 000、由317个氨基酸构成的多肽。该基因片段与GenBank公布的相应基因进行同源性比较,核苷酸序列的同源性为98.73%,编码产物的氨基酸序列的同源性为99.68%。该真核表达载体免疫荷瘤小鼠后,pcDNA3.1-hTERT组肿瘤生长受到抑制,且该组生存期分别长于PBS组及pcDNA3.1组(P<0.05);pcDNA3.1-hTERT组的IL-2、IFN-γ细胞因子水平也均高于PBS组与pcDNA3.1组(P<0.05)。提示该真核表达载体在受试动物体内可有效地诱导特异性抗肿瘤免疫应答。

门脉高压症患者术后早期肠内营养支持的疗效观察

目的研究门脉高压症患者术后早期肠内营养支持的疗效。方法将50例门脉高压症患者随机分为两组,试验组25例在术后第1天(24 h)即通过肠内营养输注系统给予营养支持,对照组25例按常规处理,观察围手术期患者的临床表现,监测术前、术后1周营养状况,肝功能变化,免疫学指标及术后并发症等。结果试验组胃肠道功能恢复时间为49.2 h,对照组为84.2 h。试验组2例轻度腹胀,1例出现高渗性腹泻,其余患者均耐受良好。试验组1例出现引流管口渗液,对照组术后出现切口感染3例,肺部感染2例。试验组患者应用瑞素行肠内营养后血清蛋白和转铁蛋白明显高于对照组。两组患者术后CD3^+、CD4^+较术前均有所下降,试验组术后第7天与对照组比较,CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+均升高,差异有显著性意义。两组患者转氨酶和黄疸指数在术后3、7 d明显高于术前,组间比较也有明显差异性。结论术后患者早期肠内营养能提高患者免疫功能,增加营养,促进胃肠功能恢复,减少并发症,减轻护士工作量,建议临床中对此类患者尽可能早期选用肠内营养支持。

胎盘多肽对肿瘤细胞生长抑制作用研究

目的 探讨胎盘多肽 (PPs)对小鼠肿瘤细胞体内、外生长的影响。方法 染料排斥试验及肿瘤细胞体内种植实验。结果 PPs在体外对肿瘤细胞无明显的直接杀伤作用 (P >0 0 5 ) ,但体内肿瘤种植实验中给药组H2 2 腹水瘤小鼠生命延长率为 70 % ,S180 实体瘤生长抑制率为 6 5 % ,与对照组相比实验组荷瘤小鼠生存时间有显著差异 (P <0 0 1 )且肿瘤的形成也有明显的抑制作用 (P <0 0 1 )。

麦饭石对霉菌毒素AME AOH的吸附清除实验

目的 研究麦饭石对有致癌作用的互隔交链孢霉毒素AME和AOH的吸附清除作用。方法 把麦饭石装入两组过滤柱中 ,把毒素配制成 0 5mg/ml浓度液体 ,加入两组的过滤柱中 ,分别测定在紫外光下荧光斑点颜色和面积 ,来记为强阳性、弱阳性。结果 原液 ,对照组AME和AOH都是强阳性 ,空白组为阴性。结论 麦饭石对霉菌毒素有较强的吸附清除能力 ,吸附清除率可认为达98% ,是一种比较结合实际成本低廉的去毒途径。

指状青霉提取物对大肠杆菌infA基因的致突变研究

为了研究分离获得的引发桔子霉烂的优势真菌指状青霉提取物的致突变作用。方法：将Ｅ．ｃｏｌｉ ｋ１２菌株作为诱变对象，利用ＰＣＲ扩增得到ｉｎｆＡ基因片段，通过Ｔ载体克隆并作序列分析。结果：ｉｎｆＡ基因片段中 有５个点突变存在；推导氨基酸序列有一个氨基酸变异（Ｌｙｓ→Ｖａｌ）。结论：指状青霉提取物可引起 Ｅ．ｃｏｌｉ ｋ１２菌株 基因突变。

酶联免疫吸附试验检测食管癌高、低发区粮食中交链孢酚单甲醚的研究

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，分别对食管癌高发区林县和低发区商丘各６４份粮食（玉米３２份、小麦３２份）中交链孢酚单甲醚（ＡＭＥ）进行检测。结果：林县６４份粮食中检出ＡＭＥ２５份，阳性率为４０．３％；商丘６４份粮食中有１５份阳性，阳性率为２３．４％。两者比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。不论是小麦还是玉米，ＡＭＥ含量林县均高于商丘，这与粮食中互隔交链孢霉污染情况相符。结果提示：ＡＭＥ可能是人食管癌的病因之一。

胎盘多肽的抗突变作用

采用平扳掺入法Ａｍｅｓ试验及小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，检测了胎盘多肽（ＰＰｓ）的抗突变作用。结果表明，在Ａｍｅｓ试验中，ＰＰｓ无抗突变作用，但在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中，对环磷酰胺（ＣＰ）诱导的微核形成具有明显的拮抗作用（Ｐ＜００１）。结果提示，ＰＰｓ在体内具有抗突变性。

胎盘多肽对环磷酰胺抑制小鼠骨髓及白细胞作用的影响

目的：探讨PPs对环磷酰胺LLP诱导小鼠骨髓及周血白细胞作用的影响。方法：用CP诱导小鼠骨髓及周血白细胞抑制，并投以PPs，观察骨髓细胞及周血白细胞变化。结果：PPs对CP诱导的受试动物周血白细胞的降低与阳性对照组比较有明显升高作用（P＜0．01），对CP诱导的动物骨髓抑制现象也有明显的保护作用（P＜0.01），并且与阴性对照组比较，PPs对正常小鼠血白细胞及骨髓细胞均无明显影响，结论：PPs可望成为具有明显疗效又无明显副作用的骨髓及白细胞保护剂。

霉烂水果优势真菌提取物致突变性研究

用细菌回复突变试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞（ＰＣＥ）微核试验，研究了经分离获得的引发梨霉烂的优势真菌互隔交链孢霉（Ａ．ａｌｔｅｒｎａｔａ）及引发桔子霉烂的优势真菌指状青霉（Ｐ．ｄｉｇｉｔａｔｕｍ）提取物的致突变性。结果表明：所测试的３株互隔交链孢霉（Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３）提取物及４株指状青霉（Ｐ_１、Ｐ_２、Ｐ_３、Ｐ_４）提取物均可不同程度地诱发Ｅ．ｃｏｌｉＮＤ－１６０菌株回复突变。且其中Ａ_１、Ａ_２和Ｐ_２、Ｐ_４株提取物还可诱发小鼠骨髓ＰＣＥ微核率明显升高（Ｐ＜０．０１）。结果提示分别引发梨及桔子霉烂的互隔交链孢霉及指状青霉其代谢产物均具致突变性。

污染水果的霉菌提取物诱发微核实验

应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，分别对从市售污染水果梨和桔子中分离出的优势真菌互隔交链孢霉和指状青霉提取物进行诱变实验。结果：菌株Ａ６和菌株Ｐ３提取物分别在达到２００ｍｇ／ｋｇ、１６０ｍｇ／ｋｇ时，其微核出现率分别为１６．８±０．３９‰、１８．２±０．３８‰，与溶剂对照组（ＤＭＳＯ）３．６０±０．４６‰相比有显著性差异（Ｐ＜０．０１），并呈明显的剂效关系。说明互隔交链孢霉和指状青霉两种提取物含有使染色体损伤的物质。

污染水果中霉菌的分离及毒性和微核试验

市场销售水果中,因不同程度的受霉菌污染而霉变,食用后对人体产生危害。如霉变后的梨可引起消化道过敏,类过敏性皮炎,食物中毒。为了解霉变水果的主要污染菌及其产毒致突作用,我们对霉变桔子、梨、苹果、西红柿和香蕉作了霉菌分离与鉴定,并以梨、桔子污染霉菌的提取物作了LD_(50)和微核试验。

指状青霉诱发大鼠细胞DNA突变效应研究

目的 :研究指状青霉 (Penicilliumdigitatum)的致突变效应。方法 :采用E .coliND 16 0菌株 ,大鼠肺及肝原代细胞非程序DNA合成 (UDS)试验和E .coliK12infA基因突变试验及infA基因序列测定和分析。结果 :指状青霉提取物 :①可明显地诱发E .coliND 16 0菌株回复突变 ;②可明显诱导大鼠肝原代细胞UDS((P <0 .0 5 ) ,极显著诱导肺原代细胞UDS(P <0 .0 1) ;③可诱导E .coliK12infA基因DNA序列中 5个碱基位点突变 ,且其中 1个位点的突变还可导致编码相应氨基酸的变异。结论

指状青霉提取物诱发大鼠肺及肝原代细胞DNA损伤作用

目的探讨指状青霉（Penicilliumdigitatum）提取物对大鼠肺及肝原代细胞的DNA损伤作用。方法用指状青霉提取物诱发大鼠肺及肝原代细胞的程序外DNA合成（UDS）。结果指状青霉提取物均可诱发大鼠肺及肝原代细胞的UDS，尤其是对肺原代细胞的作用更为明显（P＜0.01）。结论指状青霉提取物对大鼠肺及肝原代细胞DNA有损伤作用，从而证实其对哺乳动物细胞具有明显的遗传毒性。

市售茶叶霉菌污染检测及毒性试验

从市售茶叶中分离培养出大量的黄曲霉和烟曲霉等。用黄曲霉提取物注入小鼠腹腔可引起死亡。用100℃或75℃的无菌水,浸泡茶叶15min,可杀死其中的霉菌,但不能破坏毒素,提示发霉茶叶不宜饮用。

圆弧青霉代谢物的诱变作用

从食管癌高发区林县农户粮食中分离出19株圆弧青霉,随机选4株(45A_2,7B_3,155D_1,26B_1),在以甘露醇为碳源的Raulin-Thom培养基中培养。氯仿提取其代谢物,应用CHO(Chinese hamster ovary)细胞SCE(Sister Chromatid Exchange)法检测了它们的诱变作用,结果发现:45A_2加S_9后诱发SCE频率显著升高;7B_3,155D_1在不加S_9情况下诱发SCE频率显著升高;26B_1在加与不加S_9情况下均为阳性,但以不加S_9时作用较强,所测试的4株圆弧青霉代谢物均有不同程度的损伤细胞DNA作用,与食管癌的发生可能有一定关系。