牙龈卟啉单胞菌FimA促进ESCC细胞MHC-I的降解与免疫抑制

目的探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)感染食管鳞状细胞癌细胞后对主要组织相容性一类分子(MHC-I)的影响及其免疫调控机制。方法Western blot检测Pg感染KYSE-150细胞后主要毒力因子鞭毛蛋白(fimbriae,FimA)及MHC-I的表达水平,免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)法探索FimA和MHC-I之间的相互作用,共聚焦检测KYSE150细胞转染LC3双荧光慢病毒后的荧光变化,western blot检测Pg感染KYSE150后LC3B-Ⅱ的表达量,流式细胞术检测感染Pg的KYSE150与外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)共培养后PMBC表达MKi67的情况。结果Western blot显示Pg感染KYSE150细胞后FimA的表达增多而MHC-I的表达减少。Co-IP显示FimA与MHC-I蛋白可直接相互作用,共聚焦显微镜显示Pg感染KYSE150后荧光强度增强,流式细胞术显示Pg感染的KYSE150细胞与PBMC细胞共培养后能显著降低PBMC中Gzmb和Mki67的表达(均P<0.001)。结论FimA可能通过自噬途径促进MHC-1的降解、抑制T细胞免疫应答,参与ESCC的免疫抑制和肿瘤进展。

诱导共刺激因子在癌症免疫治疗中的作用

食管癌作为全世界最常见的恶性肿瘤之一,其发病率、死亡率均较高。除了传统的手术、化疗、放疗等治疗手段外,免疫治疗具有较好的疗效。通过靶向共刺激B7超家族成员,诱导共刺激因子(inducible co-stimulator,ICOS)在T细胞上的表达来促进抗肿瘤反应,近年来引起了转化医学界的关注。本研究使用关键词“ICOS”和“癌症”进行了广泛的检索和分析,发现ICOS在不同恶性肿瘤的发生中具有双重作用,并总结了目前关于免疫治疗靶向ICOS/ICOSL通路的研究现状。

肿瘤与微生物群

长久以来有关微生物群对肿瘤的影响一直争议不休,不断冲击着以肿瘤内在特性为中心的致癌理论。虽然众多研究结果表明微生物群可能在肿瘤免疫治疗中发挥着关键作用,并在一定程度上影响肿瘤的发生、发展及其诊断和预后,但目前对可直接诱发癌变的微生物群仍缺乏系统的认知。本文就微生物在肿瘤中的因果及协同作用,肿瘤内微生物的有关研究发现,以及微生物群在临床中的应用等方面进行综述,同时展望下一阶段能够同时影响宿主和肿瘤微生物群的方法。

靶向免疫代谢改善肿瘤微环境

免疫代谢近年来日益受到关注,癌基因驱动的肿瘤细胞代谢变化可影响肿瘤微环境(TME),进而抑制免疫反应,并对癌症治疗造成障碍。这提示我们可以通过靶向代谢途径改善TME,增强抗癌免疫效应。本文总结目前将TME内免疫细胞代谢转变为促炎状态的策略,并强调需要更好地还原生理条件,进而选择靶点、阐明机制和优化代谢抑制剂。

喜树碱关键酶基因的克隆与生物信息学分析

为了克隆喜树碱生物合成途径关键酶异胡豆苷合成酶的基因STR,本文对喜树幼叶进行RNA提取,利用RT-PCR克隆基因STR的CDS序列,利用在线软件ExPASy ProtParam、SignalP4.1、TMHMMV.2.0、TargetP 1.1分析蛋白理化性质、蛋白信号肽、蛋白跨膜区以及亚细胞定位,利用在线工具Conserved Domain、SOPMA预测蛋白保守结构域和二级结构,利用MEGA 6.0软件构建蛋白系统进化树。结果表明,以喜树幼芽为材料,通过RT-PCR克隆喜树碱生物合成途径关键酶基因STR的CDS序列为993 bp;生物信息学分析表明,STR定位于分泌通道,为酸性蛋白,无信号肽,有1个跨膜区,由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲等二级结构组成;STR包含高度保守的结构域,聚类分析表明其与中果咖啡具有较高的相似性、较近的亲缘关系和遗传距离。

不同海拔地区油菜类黄酮合成关键基因的表达分析及克隆

目的:分析不同海拔地区油菜类黄酮合成基因的表达模式,并克隆关键基因。方法:荧光定量PCR分析类黄酮生物合成途径关键基因C4H、CHS、F3H、F3’H、FLS在不同组织(叶片、茎、花蕾和花粉)的表达模式和不同海拔地区(青海、河南)的表达模式;通过NCBI数据库对克隆的BpFLS基因进行BLASTx比对,利用Clustal Omega进行蛋白质氨基酸序列多重比对。结果:在油菜不同组织中,花粉中类黄酮生物合成途径关键酶基因C4H、CHS、F3H、F3’H、FLS的表达量最高;高海拔地区的青海油菜花粉中类黄酮合成基因的表达量高于低海拔地区的河南油菜花粉中的表达量,尤其是FLS基因表达水平有显著差异;BpFLS基因编码蛋白质的氨基酸序列与甘蓝型油菜和白菜的相似度分别为100%和99.4%。结论:花粉是油菜类黄酮含量较高的组织;油菜花粉类黄酮合成关键基因FLS与较高类黄酮含量有着密切的关系。