龟鹿二仙胶通过Keap1/Nrf2通路抑制自噬、减轻小鼠GC-1精原细胞氧化损伤

目的:探讨龟鹿二仙胶(Guilu Erxian glue,GLEXG)对氧化损伤小鼠GC-1精原(mouse GC-1 spermatogonial,MGS)细胞模型的影响及潜在作用机制。方法:过氧化氢(H_(2)O_(2))处理MGS细胞构建氧化损伤细胞模型。通过细胞计数试剂盒-8测定法评估细胞活力。运用流式细胞术和酶联免疫吸附测定分别检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平。通过蛋白印迹和免疫荧光测定sequestosome-1(p62)、核因子红细胞相关因子2(Nrf2)、微管相关蛋白轻链3β(LC3B)和Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)的表达。通过实时定量聚合酶链反应评估Keap1相对mRNA的表达。通过透射电子显微镜(TEM)观察自噬相关囊泡的结构变化。结果:H_(2)O_(2)诱导的氧化损伤细胞模型表现出细胞活力下降,ROS和MDA水平升高。10%浓度GLEXG含药血清治疗后细胞活力显著上升(P=0.0002),ROS和MDA水平显著下降(P=0.0105和P=0.0033)。在雷帕霉素处理的MGS细胞中,GLEXG治疗可显著上调p-mTOR、Nrf2和p62蛋白表达(均P<0.01),下调Keap1蛋白表达和LC3B-II/LC3B-1比值(P=0.002和P=0.0043),并可降低细胞内ROS和MDA水平。TEM分析显示GLEXG治疗显著减少雷帕霉素处理的MGS细胞中异常增大的自溶体数量。在Keap1-siRNA转染的MGS细胞中,siRNA-Keap1-2311敲除位点显示出更高的效率。此外,在这些Keap1-siRNA转染的细胞中,GLEXG治疗可显著上调Nrf2和p62的蛋白表达,下调Keap1蛋白表达和LC3B-II/LC3B-I比值,并降低细胞内ROS和MDA水平。结论:GLEXG通过Keap1/Nrf2通路抑制自噬,有效减轻MGS细胞模型的氧化损伤。

不同灸温对2期压力性损伤大鼠创面修复的实验研究

目的观察不同灸温对压力性损伤大鼠创面修复的影响。方法选择65只SPF级SD雄性大鼠,取其中60只根据缺血-再灌注原理进行压力性损伤造模,在成功造模的基础上将模型大鼠随机分为模型组、(42±1)℃艾灸组、(45±1)℃艾灸组、(48±1)℃艾灸组,每组15只。模型组创面仅给以碘伏消毒,1次/d,干预12 d;艾灸组用直径18 mm的艾条,施以回旋灸,10 min/次,1次/d,干预12 d。分别于干预第3、7、10天观察比较四组大鼠创面愈合情况、愈合时间及愈合率、病理改变,并观察血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A),缺氧诱导因子1α(HIF-1α),磷酸化蛋白质丝氨酸苏/氨酸激酶(p-Akt)的表达水平。结果干预第3、7、10天,与模型组比较,艾灸组创面愈合时间显著缩短;(45±1)℃艾灸组创面愈合时间短于(42±1)℃艾灸组及(48±1)℃艾灸组;创面愈合率显著高于(42±1)℃艾灸组及(48±1)℃艾灸组(均P<0.05)。HE染色结果显示,(45±1)℃艾灸组炎症细胞少于其他组,新生的肉芽组织多于其他组,血管内皮细胞及成纤维细胞排列更紧密。免疫组化结果显示,干预第3、7天,与模型组比较,艾灸组VEGF-A、HIF-1α及p-Akt表达水平均较高;与(42±1)℃艾灸组及(48±1)℃艾灸组相比,(45±1)℃艾灸组VEGF-A、HIF-1α及p-Akt表达水平较高;干预第10天,(45±1)℃艾灸组VEGF-A及p-Akt表达水平显著高于其他组(均P<0.05)。结论(45±1)℃艾灸可促进压力性损伤创面愈合,缩短愈合时间,提高修复效果。

基于索拉非尼敏感性基因的肝细胞癌预后模型的构建及临床意义

目的 基于生物信息学方法构建并验证肝细胞癌(HCC)对索拉非尼敏感性相关基因的预后模型,探究该模型对HCC患者预后和索拉非尼敏感性的预测能力。方法 对基因表达汇编数据库GSE109211数据集、癌症基因组图谱(TCGA)数据库LIHC队列、国际肿瘤基因组协作组(ICGC)数据库LIRI队列进行差异基因分析,通过交集筛选出HCC索拉非尼敏感性相关基因,进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。利用单因素Cox回归与最小绝对收缩和选择算子(LASSO)回归构建预后模型,依据风险评分中位值将患者分为高、低风险组。通过Kaplan-Meier法和多因素Cox回归分析进行生存分析。通过癌症药物敏感性基因组学(GDSC)数据库分析索拉非尼的IC_(50)并探索其与风险评分的关系。结果 筛选出365个HCC索拉非尼敏感性相关基因,KEGG富集分析显示存在与药物代谢相关的信号通路。通过单因素Cox回归分析获得221个与HCC预后相关的基因,通过LASSO回归构建了一个包括含TCP1伴侣蛋白亚单位3(CCT3)、红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、甲酰转移酶环脱氨酶(FTCD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)、磷脂酰肌醇聚糖锚定生物合成U类基因(PIGU)、分泌型磷蛋白1(SPP1)7个关键基因的预后风险评分模型:风险评分=CCT3×0.032+EPO×0.055+FTCD×(-0.026)+G6PD×0.083+KIF20A×0.039+PIGU×0.144+SPP1×0.009。验证结果显示高风险组生存时间短于低风险组(P<0.001),多因素Cox回归分析显示风险评分是独立预后因素。高风险组的索拉非尼IC_(50)比低风险组低,提示高风险组对索拉非尼的治疗可能更敏感。结论 基于索拉非尼敏感性相关基因构建的HCC预后模型具有良好的预测价值。

生肌玉红膏治疗压疮Meta分析

目的 系统评价生肌玉红膏治疗压疮的临床疗效。方法 计算机检索中国知网(CNKI)、万方数据库(WanFang Data)、中国科技期刊数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)、The Cochrane Library、PubMed、EmBase、Web of Science等数据库中以生肌玉红膏为主治疗压疮的随机对照试验(RCT),检索时限为建库至2022年11月。由2名研究员对纳入文献进行严格质量评价和数据提取后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果 最终纳入15个随机对照试验,包括925例患者,其中试验组465例,对照组460例。Meta分析结果显示:试验组压疮治愈率、压疮治疗总有效率、压疮愈合时间与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 生肌玉红膏能够促进压疮愈合,提高压疮治疗有效率和治愈率,缩短压疮愈合时间。

TAT-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白原核载体的构建及表达

目的:构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease,TR)融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法:将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋白(HBV core protein,HBVc)基因、人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(human eosinophil derived neurotoxin,hEDN)基因,克隆人含PTD TAT的pTAT原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内,以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果:成功地构建了乙肝病毒靶向核糖核酸酶及其两个对照的融合蛋白原核表达载体,并在IPTG诱导下获得特异性表达。结论:Tat-乙肝病毒 靶向核糖核酸酶融合蛋白的构建,为体内应用靶向核酸酶治 疗乙型肝炎奠定了基础。

HIV-Tat蛋白转导域在医学研究中的应用

HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高而且对细胞没有损伤。TAT融合蛋白系统被认为是一种很有前途的运载工具 。

精索静脉曲张不育症临证经验

精索静脉曲张是导致男性不育的常见原因,张耀圣教授在长期的临床实践中总结出辨证治疗精索静脉曲张不育症的临床经验和用药特点,张教授发现精索静脉曲张不育症患者皆有脾虚气陷的临床表现,认为精索静脉曲张不育症的病机是"清阳不升、浊阴不降为因,肾虚血瘀为果"。他强调以健脾益气、升清降浊,兼以补肾活血、理气化湿,用药轻灵、整体调治,科学饮食、重视调养、适度适量运动四个方面为主要治疗原则,详审病机及病症特点,整体调理,标本兼治。

益肾健脾方对少弱精子症小鼠模型睾丸生精功能和血清性激素水平的影响

目的观察益肾健脾方对雷公藤多苷诱导少弱精子症小鼠模型睾丸组织、精液质量和血清性激素水平的影响,探讨益肾健脾方治疗少弱精子症可能的作用机制。方法以雷公藤多苷诱导少弱精子症小鼠模型,随机平均分为正常组、模型组、左卡尼汀组、中药组(益肾健脾方低、高剂量组),每组10只,中药及左卡尼汀干预,睾丸组织病理切片、HE染色,观察小鼠睾丸组织病理学,应用伟力精子测试仪检测小鼠精液质量,应用酶联免疫夹心法检测小鼠血清性激素水平。结果左卡尼汀组、中药组的A级精子活力、总活力高于模型组(P<0.05);左卡尼汀组低于中药低剂量组(P<0.05);中药高剂量组与左卡尼汀组相比差异无统计学意义(P>0.05)。左卡尼汀组、中药组的精子总数高于模型组(P<0.05);左卡尼汀组、中药低、高剂量组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠血清卵泡刺激素、黄体生成素水平高于正常组及各药物干预组(P<0.05);各药物干预组高于模型组(P<0.05);各药物干预组之间相比差异无统计学意义(P>0.05);模型组及各干预组血清睾酮低于正常组(P<0.05);模型组与各干预组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论益肾健脾方可能通过调节小鼠血清性激素水平从而改善精液质量达到治疗少弱精子症的目的。

益气扶元颗粒治疗III度以下精索静脉曲张不育症45例临床观察

目的:观察益气扶元颗粒治疗III度以下精索静脉曲张性不育症患者的临床疗效。方法:将88例III度以下精索静脉曲张性不育症患者随机分为治疗组45例和对照组43例,治疗组给予益气扶元颗粒(免煎颗粒),2次/d,每次1袋,开水冲服;对照组给予左卡尼汀口服液(瓶),2次/d,每次2瓶,口服;两组共治疗12周治疗结束后随访24周。比较两组患者的临床疗效,精液质量[包括精液量、精子密度、精子活率、前向运动精子(PR)及精子畸形率],测定治疗前后左侧精索静脉管径的变化,随访观察患者配偶受孕情况,结果:两组治愈率(治疗组6.67%,对照组6.97%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗组显效率(55.56%)、有效率(24.44%)、总有效率(86.66%)与对照组(分别为41.86%、20.90%、76.74%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组优于对照组。两组患者治疗后精液量、精子密度、精子活率、PR比治疗前提高,精子畸形率均比治疗前降低(P<0.05);并且治疗后治疗组精子密度、PR均高于对照组(P<0.05)两组治疗后亚临床型、I度、II度左侧精索静脉管径,治疗组比治疗前缩窄(P<0.05),对照组(P>0.05);治疗24周后随访,患者配偶共有6例确诊怀孕,其中治疗组3例,对照组3例。结论:益气扶元颗粒能够提高三度以下精索静脉曲张性不育患者的精液质量,缩窄亚临床型、I度、II度精索静脉管径。

除湿通淋颗粒治疗慢性非细菌性前列腺炎临床疗效及对IL-2、IL-6、IL-8影响观察

目的:观察除湿通淋颗粒治疗慢性前列腺炎的临床疗效以及对按摩前列腺后精确控制的前段尿液(VB3)中IL-2、IL-6、IL-8的影响。方法:将97例慢性非细菌性前列腺炎患者随机分为治疗组48例和对照组49例,治疗组给予除湿通淋颗粒(免煎颗粒),每日2次,每次1袋,开水冲服;对照组给予癃清片,每日3次,每次3g;治疗4周后对比观察两组临床疗效以及采用双抗体夹心ELISA法定量分析VB3内的IL-2、IL-6、IL-8的水平变化,并且与对照组比较。结果:治疗组NIH评分总有效率为85.71%,对照组为69.05%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组中医证候积分总有效率为92.86%,对照组为71.43%,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后IL-2较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);IL-6、IL-8较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:除湿通淋颗粒治疗慢性非细菌性前列腺炎临床疗效显著,可能通过提高前列腺液中IL-2的水平或者降低IL-6、IL-8的水平而发挥作用。

Tat-p53融合蛋白的表达、纯化及其转导活性

目的:原核表达野生型p53与TatPTD(proteintransductiondomain)的融合蛋白,检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率。方法:利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导表达并进行纯化。以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清。将Tat-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测Tat-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率。结果:成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体,表达纯化了Tat-p53融合蛋白及p53蛋白,制备p53特异的抗血清,证实Tat-p53可以高效的转入HepG2细胞内。结论:Tat-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析,为应用Tat-p53融合蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了基础。

益肾健脾方对少弱精子症小鼠模型精液质量和精子线粒体结构及功能的影响

目的观察益肾健脾方对雷公藤多苷(GTW)诱导少弱精子症小鼠模型精液质量、精子线粒体超微结构和膜电位(MMP)水平的影响,探讨益肾健脾方治疗少弱精子症可能的作用机制。方法60只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(东维力口服液)、中药组(益肾健脾方低、高剂量组)。除正常组外,其余各组以GTW诱导少弱精子症小鼠模型。造模后,阳性对照组给予东维力口服液灌胃,益脾健肾方低、高剂量组分别给予不同剂量的益脾健肾方灌胃,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃。治疗结束后,应用伟力彩色精子质量检测系统检测小鼠精液质量,应用透射电镜观察精子线粒体超微结构,应用荧光染色、流式细胞技术检测精子MMP正常精子百分率(JC-1,%)。结果阳性对照组、中药组A级精子活力、精子总活力高于模型组(P<0.05);阳性对照组及中药高剂量组低于中药低剂量组(P<0.05)。阳性对照组、中药组精总数低于模型组(P<0.05);阳性对照组、中药低、高剂量组之间相比无统计学意义(P>0.05)。模型组精子MMP低于正常组(P<0.05);中药高剂量组高于中药低剂量组及阳性对照组(P<0.05);中药低剂量组高于阳性对照组(P<0.05)。结论益肾健脾方可能通过改善精子线粒体结构、提高精子MMP从而改善精液质量达到治疗少弱精子症的目的。

慢性非细菌性前列腺炎从肝论治之文献回顾与探讨

临床上发现对于慢性非细菌性前列腺炎从肝进行论治,经常能起到很好的疗效,而且辨证明确,方药变化多样。本文在临床和实验研究的基础上,从中医学中肝的经络归属、肝的生理功能及特性、临床常用从肝论治慢性非细菌性前列腺炎的方药及实验研究方面展开论述,对慢性非细菌性前列腺炎从肝论治的现状进行评述,希望在临床上对于治疗本病有所帮助。

基于“脾肾亏虚、精失所养”理论应用针刺疗法治疗弱精子症临床疗效的随机对照研究

目的:探讨基于"脾肾亏虚、精失所养"理论应用针刺疗法治疗弱精子症的临床疗效及可能机制。方法:将91例弱精子症患者随机分为左卡尼汀组26例、针刺组29例及针刺联合左卡尼汀组36例,共治疗4周。治疗0周、4周检测各组精液质量、精浆MDA、T-SOD、GSH-Px及精子线粒体膜电位(MMP)水平。结果:最终完成观察85例。治疗4周各组A级精子活力、精子总活力均较治疗前提高(P<0.05),针刺组A级精子活力、精子总活力与左卡尼汀组相比无显著差异(P>0.05),针刺联合左卡尼汀组A级精子活力、精子总活力高于针刺组及左卡尼汀组(P<0.05)。治疗4周各组精浆T-SOD、GSH-Px及精子MMP水平均较治疗前提高(P<0.05),各组精浆MDA水平均较治疗前降低(P<0.05);各组精浆MDA、T-SOD及GSH-Px水平之间相比无显著差异(P>0.05),治疗4周针刺组精子MMP水平与左卡尼汀组比较无明显差异(P>0.05),针刺联合左卡尼汀组精子MMP水平高于针刺组及左卡尼汀组(P<0.05)。结论:基于"脾肾亏虚、精失所养"理论应用针刺疗法治疗弱精子症的临床疗效显著,其机制可能通过减轻附睾氧化损伤、提高精子MMP、改善精子成熟微环境从而提高精子活力。

河流上下游控制断面非点源污染特征的分析

为了深入研究河流上下游断面非点源污染的特征及其变化,以及同一断面不同年份的非点源污染特征,以渭河的支流沣河上游大峪口断面和中游秦渡镇断面为研究对象,根据两控制断面2009-2011三年的非点源污染水质水量同步实测资料,运用平均浓度法估算非点源污染负荷,并结合河流断面控制流域的土地情况、人类活动等情况,分析了河流上下游控制断面的非点源污染特征。结果表明:非点源污染是沣河的主要污染源,河流上游区域非点源污染负荷所占比重大于下游区域;河流上下游断面非点源浓度基本相当,下游点源浓度大于上游;下游COD、TP和NO2—N的非点源负荷量是上游的10~20倍;人类活动所产生的点源排放对中下游河流水质影响更大。

针灸治疗少弱精子症之文献回顾与探讨

少弱精子症是男性不育症发生的主要因素。目前西医治疗疗效局限,针灸作为中医药的重要组成部分,具有"简、验、廉、便"的特点。本文就近年来关于针灸治疗少弱精子症的研究文献进行回顾与整理。结果显示针灸治疗该病疗效显著且在腧穴选择、刺激方式、综合治疗以及作用机制研究等方面都取得了一些进展,本文将从中医辨证分型、腧穴处方、穴位刺激方式、针灸复合疗法等方面深入探讨针灸治疗该病的临床疗效及可能的作用机制。

不同通气方式在早期心肺复苏中的应用效果观察

目的探讨不同通气方式在早期心肺复苏中的影响。方法对48例心跳呼吸骤停患者按数字法随机分为观察组和对照组各24例。观察组在心肺复苏早期采取气管插管,对照组在心肺复苏早期采取面罩口咽通气管通气,对比两种通气方式对心肺复苏成功率的影响。结果①治疗后两组心跳呼吸骤停患者有效率比较:观察组患者有效14例,无效10例,有效率为58.33%;对照组患者有效9例,无效15例,有效率为37.5%,组间差异有显著性(P<0.05)。②治疗后两组心跳呼吸骤停患者存活率比较:观察组患者有效9例,无效15例,有效率为37.5%;对照组患者有效6例,无效18例,有效率为25.0%,组间差异亦有显著性(P<0.05)。结论对于心跳呼吸骤停的患者,在心肺复苏早期采用气管插管通气治疗,无论是从患者有效率还是存活率方面比较,都比采取面罩口咽通气管通气治疗效果理想。

基于数据挖掘技术探讨针灸治疗少弱精子症取穴规律

目的运用数据挖掘技术探讨针灸治疗少弱精子症取穴规律。方法收集并筛选中国知网(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、重庆维普数据库(VIP)、万方学术期刊全文数据库(Wan Fang)中近20年针灸治疗少弱精子症的文献,并将其穴位逐一录入中医传承辅助系统(V2.5),应用软件对其进行描述性分析、关联规则分析及复杂系统熵聚类分析。结果共纳入51篇针灸治疗少弱精子症的腧穴处方,穴位共50个,确定了处方中穴位出现的频次及归经、常用穴位组合的关联规则,并聚类获得6个核心腧穴组合、3个新腧穴处方。结论针灸治疗少弱精子症主要以膀胱经、任脉、脾经、胃经腧穴为主,使用频次排列前5位的穴位有关元、三阴交、足三里、肾俞、气海,使用频次最高的对穴是"三阴交,关元"。

中医护理干预对肝阳上亢型高血压睡眠障碍的影响

目的:探讨中医护理干预对肝阳上亢型高血压患者睡眠障碍的影响。方法:选取肝阳上亢型高血压伴睡眠障碍患者160例,随机分为对照组、干预组各80例。对照组给予常规护理方法进行护理,干预组在常规护理基础上加中药足浴、耳穴按压及中医辨证护理。2组均以治疗15天为1个疗程,1个疗程后观察患者降压效果、睡眠障碍状改善情况。结果:中医护理干预组在临床症状及睡眠改善方面优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),在降压疗效方面与对照组对比无显著差异性(P>0.05)。结论:中医辨证护理能够提高肝阳上亢型高血压病患者睡眠质量。