成年和老年小鼠脑蛋白质组双向电泳图谱比较

使用双向电泳 (2 DE)比较成年和老年小鼠脑蛋白质差异 ,从分子水平初步探索老年脑蛋白整体变化规律 .以固相 pH梯度等电聚焦为第一向 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶水平电泳 (PAGE)为第二向进行 2 DE .图象分析软件Imagemaster 2DElite分析电泳图谱 .重复性实验结果显示 ,同组样品在三次不同实验中所得蛋白质斑点数目的相对标准差 (变异系数 )为 4 43%± 0 2 5 % ;同一蛋白质斑点在三次实验中等电点、分子质量和蛋白质量的相对标准差分别为 8 76 %± 5 14% ,13 0 0 %± 4 2 2 %和 10 84%± 9 16 % .成年和老年小鼠脑组织 2 DE图谱分别获得 996和 12 5 6个蛋白质斑点 ,其中 8个蛋白质在老年脑组织中含量降低 ,2 0个蛋白质斑点含量增加 .另至少有 4个蛋白质斑点在老年脑组织中缺失 ,14个蛋白质点为老年脑特有 .

不同上样方式对蛋白质组双向电泳图谱质量的影响比较

蛋白质组技术难点之一是如何获取尽可能多的细胞或组织的蛋白信息.双向电泳蛋白斑点数目直接反映了实验蛋白质组信息的完整性.除样品制备外,蛋白上样方式对双向电泳图谱的质量和完整性有直接的影响.实验论文从以下3个方面考察不同的蛋白上样方式对双向电泳图谱的影响;即:水化上样与杯上样;一次上样与重复上样;以及酸性端加样与碱性端上样.实验结果发现;蛋白上样量较大时,杯上样方式的图谱斑点数目较水化上样方式明显增多;样品蛋白浓度较高时,稀释多次上样明显优于一次性浓缩蛋白上样;蛋白裂解液(MCF-7乳腺癌细胞)在酸性端加样对偏碱性蛋白的分离未发现明显优势.相反,在等电聚焦伏小时(Vh)足够的前提下,碱性端加样对偏碱性端蛋白反而有利,表现为斑点数目较多,而且等电点方向拖尾减轻.实验结果对提高双向电泳的质量以及相关蛋白质组信息的完整性提供了有益的技术参考.

银杏叶提取物(EGb761)拮抗阿霉素引起的心脏毒性不影响其抗肿瘤活性

目的：研究银杏叶提取物（ＥＧｂ７６１）对阿霉素心脏毒性以及抗肿瘤活性的影响。方法：采用阿霉素体外损伤大鼠心脏线粒体和体内小鼠心脏毒性两种模型，应用生化方法和电镜观察药物作用。结果：阿霉素体外引起大鼠心脏线粒体丙二醛生成、腺苷三磷酸酶活性丧失、膜流动性降低、膜线粒体肿胀、溶解等，ＥＧｂ７６１对上述毒性损伤均有明显的保护作用。体内实验表明，ＥＧｂ７６１能剂量依赖性地抑制阿霉素引起的小鼠心肌脂质过氧化和血清肌酸磷酸激酶活性升高。荷瘤鼠存活期实验表明，ＥＧｂ７６１对阿霉素抗肿瘤活性无明显影响。结论：ＥＧｂ７６１拮抗阿霉素引起的心脏毒性但不影响其抗肿瘤活性。

抗氧化剂治疗胃十二指肠溃疡研究进展

目的：阐述活性氧在胃十二指肠溃疡发病过程中的作用以及临床应用抗氧化剂预防和治疗该病的可能性。方法：归纳活性氧以及抗氧化剂在多种类型胃溃疡中的作用。结果与结论：活性氧与许多类型胃溃疡有关。

与胃粘膜细胞损伤有关的活性氧

与胃粘膜细胞损伤有关的活性氧丁勤学综述刘耕陶审校（中国医学科学院、中国协和医科大学药物研究所，北京１０００５０）１９９６－０９－０４收稿，１９９７－０３－１８修回作者单位：丁勤学，男，３１岁，博士研究生；刘耕陶，男，６４岁，中国工程院院士中国图书分类...

轴突生长抑制性蛋白

轴突生长抑制性蛋白是阻止成年哺乳动物中枢神经再生的重要因素。近年来一些重要的抑制性蛋白陆续得到鉴定和克隆。本文概述轴突生长抑制性蛋白的发现过程 ,着重介绍勿动蛋白 (Nogo) ,髓磷脂相关性糖蛋白 (MAG)以及崩溃蛋白 (Collapsin)的结构和功能 。

赤芍治疗热毒血瘀证的血清蛋白质组变化的初步研究

目的研究赤芍对大鼠热毒血瘀证的血清蛋白质组变化的影响。方法用双向电泳(two-di-mensionalelectrophoresis,2DE)分析正常组、内毒素组〔用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)静脉注射〕、赤芍组(灌胃给药)、LPS(静脉注射)+赤芍(灌胃给药)组之间的血清蛋白质组表达差异。结果(1)LPS致热毒血瘀证大鼠的血清在2DE胶上13个蛋白点(xPr)出现非常明显的含量变化,与正常组比较,LPS组的xPr16、xPr19的点容量值均显著降低,xPr1、xPr2、xPr3、xPr4、xPr6、xPr7、xPr8、xPr9、xPr11、xPr12、xPr23的点容量值均显著增高。(2)LPS+赤芍组与LPS组比较,LPS引起增高的xPr1、xPr2、xPr3、xPr4、xPr9的点容量值均显著降低,LPS引起降低的xPr16的点容量值显著增高,但xPr16的点容量值仍显著低于正常组,xPr1、xPr4、xPr9的点容量值均显著高于正常组;LPS+赤芍组的xPr2、xPr3两个蛋白点已被明显调节到正常状态;赤芍组除xPr2、xPr4外,在xPr1,xPr3,xPr9,xPr16点均表现对LPS显著的交互作用。(3)对xPr19,赤芍和LPS两因素显著的交互作用有协同性。(4)赤芍组xPr13、xPr14的点容量值均显著高于正常组,xPr15、xPr17的点容量值均显著低于正常组,这4个蛋白点LPS组与正常组比较差异均无显著性。结论通过调节xPr1、xPr2、xPr3、xPr4、xPr9、xPr16蛋白点,可能是赤芍治疗热毒血瘀证的疗效的分子基础。

玄参治疗大鼠内毒素血症的血清蛋白质组变化的初步研究

目的 :研究玄参治疗大鼠内毒素血症的血清蛋白质组变化。方法 :用双向电泳 (2DE)分析正常组、内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS ;静脉注射 )组、玄参 (灌胃给药 )组、LPS(静脉注射 ) +玄参 (灌胃给药 )组之间的血清蛋白质组表达差异。结果 :①LPS致内毒素血症大鼠的血清在 2DE胶上 16个蛋白点 (xPr)出现非常明显的含量变化 ,与正常组比较 ,LPS组的xPr16 ,xPr19的点容量值均极显著降低 ,xPr1,xPr2 ,xPr3,xPr4 ,xPr5 ,xPr6 ,xPr7,xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr18,xPr2 3的点容量值均极显著增高。②LPS +玄参组与LPS组比较 ,LPS引起增高的xPr1,xPr6 ,xPr7,xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr18,xPr2 3的点容量值均显著降低。玄参在xPr1,xPr8,xPr11,xPr12 ,xPr18均表现对LPS显著的交互作用。LPS +玄参组与正常组比较 ,其中xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr2 3蛋白点已被明显调节到正常状态 ,但是xPr18的点容量值显著低于正常组 ,xPr1,xPr6 ,xPr7的点容量值仍显著高于正常组。③玄参与LPS两因素对xPr5 ,xPr10 ,xPr19,xPr2 0 ,xPr2 1,xPr2 2均有明显的交互作用。④在玄参组 ,xPr13,xPr2 0 ,xPr2 1,xPr2 2的点容量值均比正常组显著增高 ,xPr10 ,xPr15的点容量值均比正常组显著降低 ,这

中枢神经蛋白质组分析中双向电泳技术的建立

建立和优化了中枢神经组织蛋白质组分析所需的双向电泳及相关技术 .由于中枢神经组织结构的特殊性 ,样品处理非常困难 .对样品液组成、样品处理、上样方式、上样量、IPG胶条和SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法和保存等相关技术进行了比较研究和条件优化后 ,以固相 pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶 (T =12 5 % )的水平电泳为第二向 。

氧自由基与庆大霉素肾毒性

庆大霉素的临床应用十分广泛,对革兰阴性菌引起的多种感染有效.由于庆大霉素有肾脏毒性,限制了临床使用.其肾毒机制目前有多种学说,包括线粒体损伤、溶酶体损伤、Na～-/K～-ATP酶抑制、氧自由基损害等.本文就氧自由基作用与庆大霉素肾毒性关系作简要归纳.

二维凝胶电泳分离结核分枝杆菌胞外蛋白和膜蛋白

目的 :建立二维凝胶电泳分离结核分枝杆菌 (M .TB)胞外蛋白和膜蛋白的方法。 方法 :M .TBH37Rv菌株在苏通液体培养基培养 3周后获得胞外蛋白和膜蛋白 ,第一相电泳用 pH 3～ 10线性IPG预制胶条进行等电聚焦 ,第二相电泳用SDS PAGE凝胶再分离蛋白。银染PAGE凝胶、干燥 ,用ImageScanner扫描凝胶 ,ImageMaster 2DElite 3 .10 (图像分析软件 )分析 2D图像。 结果 :胞外蛋白和膜蛋白的蛋白质斑点数分别为 90 7和 681,两组蛋白的斑点大部分在酸性区域 (pH <7.0 )。在极碱性区域 ( pH >9.0 ) ,胞外蛋白只有 10个蛋白质斑点 (占1.1% ) ,而膜蛋白有 5 2个蛋白质斑点 (占 7.6% ) ;在极酸性区域 ( pH <4 .0 ) ,膜蛋白只有 15个蛋白质斑点 (占2 .2 % ) ,而胞外蛋白有 99个蛋白质斑点 (占 10 9% )。约 5 0 %的胞外蛋白和膜蛋白相对分子质量 <3 0 0 0 0。 结论 :二维凝胶电泳分离M .TB蛋白是研究M .TB蛋白质组学的重要途径之一。

生物质谱在蛋白质组学研究中的应用

本文简述了生物质谱的发展以及在蛋白质组学研究中的应用。

肝十二指肠韧带内注射利多卡因对缺血再灌注损伤肝脏的影响

目的 :探讨肝十二指肠韧带内注射利多卡因减轻肝脏缺血 再灌注 (Ischemia reprefusion ,I R)损伤的有效性以及从蛋白质组水平研究其可能涉及的机制。方法 :4 6只SD大鼠随机分成I R组、利多卡因组和开腹组。检测各组血清丙氨酸转氨酶 (ALT)和门冬氨酸转氨酶 (AST) ,肝脏组织标本胎盘蓝染色分析。肝脏组织的蛋白质组学分析采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 (2 DPAGE)、质谱 (MALDI TOF MS)方法。结果 :利多卡因组ALT和AST较I R组显著降低 (ALT :t=2 .5 99,P <0 .0 2 ;AST :t=2 .992 ,P <0 .0 1) ,胎盘蓝染色的无活性肝细胞较I R组也明显减少。利多卡因组的 2 DPAGE图谱较I R组发生了改变 ,质谱鉴定出 11个差异表达的蛋白质 ,其中 6个上调表达 ,5个下调表达。结论 :肝十二指肠韧带内注射利多卡因预处理有效地减轻了大鼠肝脏随后的I R损伤 ,是一种保护面临I R损伤肝脏的新方法。蛋白质组学研究可见 ,利多卡因预处理改变了肝脏I R后的蛋白质表达。

抗肿瘤抗生素博安霉素体外产生羟基自由基的自旋捕捉─ESR研究

采用电子自旋捕捉技术检测抗肿瘤抗生素博安霉素体外产生羟基自由基（OH）。以5，5’-二甲基吡咯啉-N-氧化物作为羟基自由基捕捉剂．借助电子自旋共振（ESR）波谱仪在室温下检测自由基信号。磷酸缓冲液中单独加入博安霉素或硫酸亚铁，或两者共存．同时在溶液里通入氮气，均无自由基产生；缓冲液中同时加入博安霉素及硫酸亚铁并通入氧气，出现OH信号，信号强弱与博安霉素浓度呈正相关系。博安霉素／硫酸亚铁／氧气系统中加入乙二胺四乙酸二钠或过氧化氢酶，自由基信号明显减弱，上述系统中以硫酸铁胺替换硫酸亚铁，自由基信号消失。

抗肿瘤抗生素博安霉素对大鼠肾功能及形态学的影响

研究了抗肿瘤抗生素博安霉素（boanmycin）对大鼠肾功能及病理形态学的影响。在急性和亚急性毒性实验中，博安霉素引起大鼠血清尿素氮、血清肌酐、尿蛋白等明显增加，且具有剂量依赖性。大鼠毒性反应后期，肾皮质区细胞广泛变性坏死；超微结构显示近曲小管上皮细胞微绒毛肿胀，线粒体肿大，排列紊乱，细胞核固缩或核溶解。

出国劳务人员艾滋病（AIDS）健康教育方法学探讨

本文采用流行病学实验的方法，对将派出的２６０名劳务人员进行ＡＩＤＳ的健康教育干预，并分别在干预前后进行有关ＡＩＤＳ的ＫＡＢＰ和ＫＡＢ研究。结果表明，劳务人员接受教育后综合得分明显增加（教育前为１９．９４，教育后为２８．２４），对ＡＩＤＳ知识的兴趣随着文化程度的提高而呈递增趋势，对发生婚外性关系的态度，随年龄的增长表示反对的有增加的趋势。被调查者中婚前性行为率达１９．７％，其中未婚者婚前性行为的发生率高达３３．７％，１０．８％己婚者中有婚外性行为的发生。７７．２％赞同在我国要把宣传道德作为预防ＡＩＤＳ、ＳＴＤ的一顶措施，２２．８％不同意单纯依靠性道德教育预防ＡＩＤＳ、ＳＴＤ的传播。劳务人员出国前接受ＨＩＶ抗体检查结果均为阴性。

两种不同溶液体系提取大鼠脊髓蛋白双向电泳图谱比较

目的 :比较尿素 /CHAPS和尿素 /硫脲 /CHAPS/SB3 10两种不同溶液体系提取大鼠脊髓蛋白双向电泳 (two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)图谱的差异。方法 :大鼠脊髓经三氯醋酸 /丙酮沉淀蛋白后 ,分别用尿素 /CHAPS和尿素 /硫脲 /CHAPS/SB3 10两种不同的溶液体系提取蛋白。以固相pH梯度 (IPG)等电聚焦为第一向 ,SDS PAGE水平电泳为第二向进行蛋白质 2 DE。图像分析软件ImageMaster 2DElite 3.0 1分析蛋白质 2 DE图谱。结果 :两种蛋白提取溶液分别获得 10 59和 10 2 3个蛋白 (亚基 )斑点 ,其中 790个蛋白在两张图谱中重叠 ,其余 2 6 9和 2 33个蛋白点为两种体系各自所特有。两种提取方法共获得 12 92个蛋白斑点。结论 :综合使用不同蛋白提取方法有助于提高组织蛋白 2

肽质量指纹图谱中实验因素引起的氨基酸修饰以及相应肽段的质量变化

目的:肽质量指纹图谱是蛋白质组研究中最重要的蛋白鉴定手段之一,而氨基酸残基的化学修饰会导致图谱中肽质量的改变。本文对实验性因素可能引起的这种质量改变进行了较为系统的观察和小结。方法:本文分析了多个标准蛋白基于SDS-PAGE分离的肽质量指纹图谱的实验结果,综合报道由各种实验因素引起的氨基酸残基体外化学修饰以及相应的肽质量变化。结果:这些化学修饰至少包括:①半胱氨酸残基丙烯酰胺加合物生成或乙酰基烷基化修饰,相应的肽段质量数分别增加71.04和57.02;②甲硫氨酸残基的氧化修饰,相应肽段质量数增加15.99(单甲硫氨酸氧化)或其倍数(多甲硫氨酸氧化);③酸性氨基酸残基的成盐反应,相应肽段质量数增加21.98(加钠盐)或37.95(加钾盐);④酸性氨基酸残基的酯化反应,相应肽段质量数增加14.03(甲醇固定)或28.03(乙醇固定);⑤碱性氨基酸(赖氨酸)残基与甲醛发生西佛碱反应,相应肽段质量数增加27.99。以上各种氨基酸的体外修饰,以甲硫氨酸的氧化修饰最为常见;酸性氨基酸的酯化反应通常发生在蛋白固定步骤;碱性氨基酸(赖氨酸)的西佛碱反应是由于蛋白质银染时增色剂甲醛的引入。特别注意的是,某些肽段可以同时发生多种化学修饰,使得肽质量指纹图谱的解析复杂化。结论:以上实验因素引起的氨基酸修饰以及相应的肽质量变化在蛋白质数据库检索和蛋白质鉴定时必须加以考虑。

银杏叶对中枢神经系统的作用及其分子机理

综述了银杏叶对中枢神经系统的作用及其分子机理。银杏叶对损伤中枢神经系统的保护作用比较明显;对正常个体促智和增强记忆功能尚需进一步实验证实。其作用的机理从药物-受体作用、药物-酶抑制作用、药物自由基清除作用等方面进行了归纳。认为在分析药物作用机理时还必须考虑其药代动力学特点。