Musashi1在结肠癌中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨Musashi1(Msi1)基因在结肠癌中的表达,分析其对结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测Msi1在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达情况。通过慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的HCT116细胞株(shMsi1组),同时设置空白对照组和NC组。MTS实验检测增殖,流式细胞术检测凋亡,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力。Western blotting检测沉默Msi1表达对Wnt和Notch信号通路关键分子的影响。结果结肠癌组织中Msi1表达量为3.36±0.75,明显高于癌旁正常组织的0.69±0.33,差异具有统计学意义(P<0.05)。沉默Msi1表达后,shMsi1组24、48、72 h的细胞增殖率分别为(128.00±3.13)%、(162.70±4.28)%、(191.86±7.72)%,明显低于空白对照组和NC组(P<0.05);shMsi1组48h细胞凋亡率为(8.47±1.04)%,明显高于空白对照组的(4.66±0.75)%和NC组的(4.83±1.07)%,差异具有统计学意义(P<0.05);shMsi1组细胞划痕愈合率为(27.38±9.63)%和侵袭细胞数为51.67±13.50,明显低于空白对照组的(58.12±8.54)%、219.00±24.56和NC组的(60.87±10.08)%、212.33±13.58,差异具有统计学意义(P<0.05)。下调Msi1表达后,shMsi1组Frat1蛋白表达量为0.53±0.10,低于空白对照组的1.00±0.16和NC组的0.94±0.13,而shMsi1组Numb蛋白表达量为1.74±0.09,明显高于空白对照组的1.00±0.17和NC组的0.73±0.09,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Msi1可能通过调控Frat1及Numb表达增强结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制其凋亡。

Musashi1基因调控结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的机制研究

背景与目的:Musashi1(Msi1)属于RNA结合蛋白家族中的一员,是RNA转录后表达的关键调控者,其是否参与肿瘤的发生、发展,以及具体分子机制仍不十分清楚。探讨沉默Msi1基因对结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的影响及可能的机制。方法:采用慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的细胞株,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期的变化,裸鼠移植瘤模型观察沉默Msi1对裸鼠成瘤的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印记法(Western blot)检测沉默Msi1基因后p27基因的mRNA表达和蛋白水平,双荧光素酶实验验证Msi1基因与目的基因p27 3’-非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)的相互作用。结果:沉默Msi1基因后,HCT116细胞的增殖能力显著下降,克隆集落数明显减少,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少,裸鼠移植瘤生长明显受到抑制。沉默Msi1基因后p27 mRNA表达未见明显变化,而p27蛋白水平明显上调,双荧光素酶实验证实Msi1基因能与p27 3’-UTR区域直接结合,抑制其翻译。结论:沉默Msi1基因通过靶向上调p27,导致结肠癌HCT116细胞G0/G1期阻滞,从而抑制肿瘤细胞体内及体外增殖能力。

结直肠癌干细胞表面标志物和信号通路研究进展

肠道干细胞分为两种,一个是表达Lgr5基底柱状干细胞,其表达与疾病分期有关,调控着细胞周期不断更替;另一个是+4干细胞,与肿瘤异质性有关,表达Bmi1使细胞周期停滞,此外还包括Msi1。多项研究表明在结直肠癌中以上标志物是高表达的,并可作用于Notch和经典Wnt信号通路促进肿瘤的发生和进展。

Msi1基因在结肠癌中的临床意义及生物功能研究

目的目前Msi1(Musashi1)在结肠癌中的临床意义及生物功能仍不十分明确,因此全面了解Msi1在结肠癌中的表达及作用,具有重要的临床意义和理论意义。文章旨在探讨Msi1基因在结肠癌中的临床意义,并运用慢病毒干扰结肠癌SW480细胞Msi1基因表达,观察其在结肠癌细胞中的生物功能。方法收集2013年10月至2014年5月河北医科大学第四医院外二科手术切除的20份结肠癌标本。每份标本分别取癌组织及癌旁肠壁组织。Western blot检测Msi1蛋白在结肠癌组织及癌旁组织中的表达,分析Msi1表达与结肠癌患者临床特征的关系。通过慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的SW480细胞株,将包含有shMsi1-1、shMsi1-2干扰序列慢病毒分别转染该细胞,将结肠癌细胞分为空白组(未做任何处理)、shMsi1-1组(转染shMsi1-1)和shMsi1-2组(转染shMsi1-2)。Western blot检测2种慢病毒沉默效果。CCK-8实验检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果结肠癌患者癌组织中Msi1蛋白相对表达量(0.863±0.208)明显高于癌旁组织(0.272±0.078),差异有统计学意义(P<0.001)。shMsi1-1组、shMsi1-2组Msi1蛋白相对表达量(0.299±0.111、0.207±0.087)较空白组(1.000±0.149)明显降低(P<0.001)。shMsi1-1组、shMsi1-2组在48 h和72 h的增殖速度均明显低于空白组(P<0.01)。与空白组细胞形成集落数(296.33±64.04)比较,shMsi1-1组(92.00±43.31)、shMsi1-2组(78.67±32.87)明显降低(P<0.01)。与空白组细胞凋亡率[(4.01±0.26)%]比较,shMsi1-1组、shMsi1-2组[(10.22±1.04)%、(10.87±1.27)%]显著增高(P<0.001)。结论干扰Msi1基因表达可抑制结肠癌SW480细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,为临床治疗结肠癌提供了一个新的干预靶点。

1350例就诊者支原体感染状况及药敏分析

目的:了解本地区支原体感染及药物敏感情况,为指导临床合理用药提供理论依据。方法:对2014年来我院皮肤性病门诊进行支原体检测患者的培养及药敏结果进行回顾性统计分析。结果:1350例标本中支原体培养阳性559例(41.41%),其中Uu感染383例(28.37%),MH感染22例(1.63%),混合感染154例(11.41%);男性患者支原体培养阳性492例(39.87%),女性患者支原体培养阳性67例(57.76%),女性患者支原体感染阳性率明显高于男性患者(P﹤0.01)。Uu对交沙霉素、强力霉素、美满霉素、加替沙星这4种抗菌药物敏感性较高,敏感率大于70%,对克林霉素、甲砜霉素耐药显著;MH对美满霉素、交沙霉素、强力霉素敏感性较高,但与Uu敏感药物比较,可选择药物范围比较窄,对克拉霉素、罗红霉素、红霉素、阿奇霉素耐药性显著。结论:支原体对大部分抗菌药物产生不同程度的耐药性,本文建议使用对Uu和MH都较敏感的美满霉素、交沙霉素和强力霉素治疗泌尿生殖道支原体感染,并强调男女双方共同治疗,减缓耐药菌株的产生。

发生于头面部的痣样基底细胞癌综合征

报告1例发生于头面部的痣样基底细胞癌综合征。患者女,52岁,头面部多发褐色丘疹18年。皮肤科检查:两颊不对称,头面部可见数个散在分布米粒至甲盖大褐色至深褐色的丘疹及斑丘疹,境界清楚,部分表面粗糙,可见树枝状血管,右手掌可见数个点状凹陷。皮损组织病理:真皮层内可见基底样细胞呈栅栏状排列,瘤细胞团外围收缩间隙不明显。诊断:痣样基底细胞癌综合征。治疗:采用手术、脉冲激光及外用咪喹莫特乳膏等综合治疗。

头部多发性化脓性肉芽肿1例

化脓性肉芽肿（pyogenic granuloma）又称毛细血管扩张性肉芽肿，是一种后天性、良性结节状增生。多在皮肤穿透性外伤后发生，由新生成的血管形成息肉状损害，一般直径5～10mm，多为单发。近期我科诊治l例头部多发性化脓性肉芽肿，现报告如下。

伊曲康唑抗肿瘤血管生成的研究进展

伊曲康唑是一种临床广泛使用的三唑类抗真菌药,近年来越来越多的研究发现,其具有抑制肿瘤血管及淋巴管生成的作用,现将抗肿瘤血管生成作用的研究进展综述如下。

食管癌钡餐造影结合CT近期疗效评价标准的临床应用研究

目的探讨钡餐造影结合CT的食管癌放疗近期疗效评价标准的可行性及对预后的预测价值并提出改进意见，为临床提供依据。方法2004-2015年月采用3DRT的529例食管癌患者，依据2013版钡餐造影结合CT评价标准进行近期疗效评价，并Kaplan-Meier法计算Lc、生存率Logrank检验和并单因素预后分析。两种评价标准行Kappa一致性检验。结果近期疗效评价标准对529例患者进行疗效界定并生存分析，完全缓解组（52例）与部分缓解组（409例）3、5、7、9年LC率分别为78．6％、69．8％、69．8％、63．4％与56．4％、47．9％、46．2％、42．4％；3、5、7、9年0s率分别为62．7％、49．1％、39．8％、39．8％与29．5％、21．6％、20．6％、19．5％，中位0s期分别为50个月与17个月（P=0．000），无缓解组（12例）中位0s期为5个月。放疗后cT测量残存淋巴结短径范围为0．37-3．40cm（中位数0．82cm），以短径0．5cm为增幅将放疗后残存淋巴结短径逐一分组进行筛选，结果显示残存淋巴结短径≤1．00cm组生存率高于短径〉1．00cm组（P=0．000）。以放疗后残存淋巴结短径1．00cm代替原评价标准中的淋巴结体积1．00cm。重新进行疗效评价，结果显示完全缓解组Lc率及Os率仍优于部分缓解组（P=0．000、0．000）。两种评价标准一致性较好（Kappa=0．863）。结论钡餐造影结合CT的近期疗效评价标准可以较为准确的判断食管癌近期疗效并评估预后；以放疗后CT测量残存淋巴结短径代替原标准中体积指标对疗效进行界定同样对预后有指导价值。

磁共振在食管癌原发灶放化疗近期疗效评价中的应用

目的 根据食管癌放化疗前后磁共振扫描结果，结合临床疗效评估，对食管癌原发灶进行疗效判定，并结合原有CT及造影的评价标准，验证磁共振在食管癌放化疗近期疗效评价的可靠性。方法 2010年5月至2014年3月采用三维适形或调强放疗的83例食管癌患者，处方剂量50~64 Gy，中位剂量60 Gy，单次1.8~2.0 Gy，其中34例接受了FP或TP方案的同期化疗，放疗前后均行食管钡餐造影、胸及上腹CT、磁共振弥散加权成像（DWI）检查。依据1989版和2013版食管癌近期疗效评价标准进行疗效评价和比较，同时依据患者疗末病变区域DWI高信号表达情况进行疗效界定和亚组分析。结果 依据1989版及2013版近期疗效评价标准，全组完全缓解和部分缓解分别为：45例（54.2%）和38例（45.8%）；35例（42.2%）和48例（57.8%）。两种评价标准中完全缓解组1~5年的局部控制率和生存率均好于部分缓解组。治疗后病变区域DWI高信号完全消失者48例（将其界定为完全缓解），呈稍高信号表达者25例、高信号表达者10例（部分缓解），前者1~5年的局部控制率和生存率均好于后者（χ2=6.125、11.652，P〈0.05）。与2013版近期疗效评价标准相比，一致性为中等（Kappa值=0.478）。依据钡餐造影、CT扫描、DWI检查综合评价，3项均达完全缓解标准者25例，部分缓解为58例，前者1~5年的局部控制率和生存率均高于后者（χ2=5.559、10.014，P〈0.05）。结论 基于钡餐造影和CT扫描的近期疗效评价标准可较好地提示食管肿瘤局部控制情况；DWI可为食管癌治疗反应评价提供直观、量化的参考信息，疗末食管病变局部仍有高信号表达预示极高的复发风险。用3种影像学技术综合评价疗效更全面、客观、准确。

食管癌同期放化疗不同放疗剂量远期疗效分析

目的 比较食管癌同期放化疗不同放疗剂量的LC、长期OS及临床不良反应情况。方法 选取2004—2013年间本院接受同期放化疗的373例食管鳞癌患者,根据放疗剂量分为〈60 Gy组99例、60 Gy组155例、〉60 Gy组119例。采用Kaplan-Meier法计算LC、OS率并Logrank检验和单因素预后分析,Cox模型多因素预后分析。结果 放疗剂量〈60 Gy组,60 Gy组和〉60 Gy组3、5、7、10年样本量分别为97、96、56、38例,146、141、72、17例和118、115、56、20例,其LC率分别为55.3%、51.4%、48.9%、48.9%,65.1%、60.1%、55.1%、55.1%和49.4%、45.1%、37.7%、37.7%（8年）（P=0.020）;OS率分别为35.4%、26.1%、22.0%、22.0%,49.0%、41.3%、32.1%、28.9%和31.1%、25.2%、14.5%、12.9%（8年）（P=0.000）。单因素分析结果显示肿瘤体积≤44 cm3、Ⅰ—Ⅱ期患者60 Gy组LC率优于〈60 Gy组（P=0.040、0.035）,而OS率则优于其他两组（P=0.001、0.003,P=0.045、0.006）;而对于肿瘤体积〉44 cm3、Ⅲ期患者60 Gy组LC率优于〉60 Gy组（P=0.011、0.015）,OS率优于其他两组（P=0.045、0.006,P=0.033、0.002）。〉60 Gy组RE、RP发生率高于其他两组（P=0.007、0.033）。多因素分析结果显示放疗剂量及非手术T分期、N分期是预后影响因素（P=0.004、0.008、0.037）。结论 食管癌同期放化疗剂量以60 Gy为优,接受〉60 Gy放疗剂量患者不良反应显著增加。

食管鳞癌三维放疗或同期放化疗优选照射剂量分析

目的 分析不同治疗模式及照射剂量下食管鳞癌患者的OS状况,探讨优选照射剂量及获益亚组人群。方法 选取2003—2014年本院接受3DRT的1387例食管鳞癌患者,分别对单纯放疗（780例）和同期放化疗（302例）不同照射剂量患者进行分析,采用Logrank检验和Cox多因素分析筛选优选照射剂量及获益亚组人群。结果 单纯放疗中照射剂量〈60 Gy （91例）、60 Gy （429例）、〉60 Gy组（260例）的中位OS期分别为9、20、23个月（P=0.000）;60 Gy与〉60 Gy组OS曲线相近（P=0.362）,且均优于〈60 Gy组（P=0.000、0.000）。同期放化疗中照射剂量〈60 Gy （18例）、60 Gy （224例）和〉60 Gy组（60例）的中位OS期分别为22、34、15个月（P=0.004）;〈60 Gy与〉60 Gy组OS曲线相近（P=0.952）,60 Gy组OS优于〉60 Gy组（P=0.002）。多因素预后分析结果显示不同治疗模式食管鳞癌预后不同,但GTV与照射剂量为2种治疗模式共同的预后因素（P=0.045、0.001）;单纯放疗时照射剂量为≥60 Gy为生存获益因素（P=0.000）;同期放化疗时仅照射剂量为60 Gy是生存获益因素（P=0.050）。结论 单纯放疗时食管鳞癌患者照射剂量≥60 Gy为优选剂量,同期放化疗时建议照射剂量尽量控制为60 Gy。

同期整合加量调强放疗与常规分割放射治疗食管鳞癌的生存获益分析

目的 探讨应用同期整合加量调强放疗（SIB-IMRT）治疗食管鳞癌的生存获益情况。方法 回顾分析2003年7月至2014年3月河北医科大学第四医院接受单中心治疗的1748例食管癌患者的病历资料。选择其中接受标准剂量常规分割放疗的809例患者作为常规分割组,接受SIB-IMRT的110例患者作为SIB-IMRT组。采用倾向性评分配比（PSM）评估2个组患者的生存获益情况。结果 2个组患者的基线特征差异有统计学意义,SIB-IMRT组患者相对更年轻（64岁∶66岁,P=0.001）、颈段及胸上段癌病例更多（53.6%∶31.0%,P=0.000）、N分期偏晚（N2：21.8%∶13.7%,P=0.027）。经PSM配对成功218例,PSM后2个组患者的一般临床资料差异无统计学意义（P〉0.05）。PSM前常规分割组与SIB-IMRT组患者的中位OS分别为23个月和21个月（P=0.638）,PSM后2个组患者的中位OS分别为18个月和22个月（P=0.000）。亚组分析结果显示,SIB-IMRT照射在大肿瘤组和胸中下段癌组的生存获益更明显,大肿瘤组患者行2种分割放疗模式的中位OS分别为14个月和21个月（P=0.001）,胸中段和胸下段食管鳞癌患者的中位OS分别为9个月和17个月（P=0.000）。Cox分析显示年龄、肿瘤部位及放疗模式是影响预后因素,对于SIB-IMRT,在HR=0.551时生存获益。结论 应用SIB-IMRT治疗食管鳞癌具有潜在的生存获益,大肿瘤及胸中下段癌患者更倾向于从SIB-IMRT中获益。

Msi1通过靶向调节p21对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响

目的放射治疗是结直肠癌综合治疗的重要组成部分,尤其是对于中晚期和术前放疗患者,目前结直肠癌对放疗敏感性较差,急需新的增敏靶点。本研究旨在探讨沉默Msi1(Musashi1)通过靶向调节p21对结直肠癌细胞放疗敏感性影响。方法蛋白质印迹法检测结直肠癌HT29、HCT116细胞及正常肠上皮细胞CCD841中Msi1蛋白表达,选择Msi1高表达的细胞系作为后续研究的靶细胞,将含有2种不同干扰序列慢病毒分别转染该细胞后,用qRT-PCR筛选出沉默效果最好的细胞株作为沉默组。实验中将结肠癌细胞分为空白组(Blank)、阴性对照组(NC)、沉默组1(Msi1-shRNA1)和沉默组2(Msi1-shRNA2)。克隆形成实验检测沉默Msi1基因对结直肠癌细胞放射敏感性的影响。MTS法检测6Gy X射线照射后结直肠癌细胞增殖情况,并计算抑制率。流式细胞术检测6Gy X射线照射后细胞凋亡情况。蛋白质印迹法检测沉默Msi1后p21蛋白表达水平,双荧光素酶实验证实Msi1与下游基因p213′-UTR相互作用。结果结直肠癌HT29、HCT116细胞中Msi1蛋白表达水平高于正常肠上皮细胞CCD841,分别为(1.000±0.181)、(1.102±0.219)和(0.106±0.051),符合正态分布,其中HCT116细胞中Msi1蛋白表达量最高(F=32.42,P=0.0006),因此选择HCT116细胞作为靶细胞进入后续实验。Msi1-shRNA1组的沉默效果优于Msi1-shRNA2组,F=68.37,P<0.001。克隆形成实验显示,经0~8Gy X射线照射后,沉默Msi1后HCT116细胞存活曲线下降,相对于空白组和阴性对照组放射增敏比SER分别为1.56和1.47,Blank组与NC组差异无统计学意义,t=2.088,P=0.1050。MTS实验结果显示,与未照射组相比,给予6Gy照射后的24、48和72h,各组细胞的增殖速度降低,并随着时间增加抑制率逐渐增加(F照射=62.16,P<0.001),Msi1-shRNA1组细胞在各时间点的抑制率均高于另外2组细胞,F时间=71.36,P<0.001。流式细胞术显示,经过6Gy照射后Msi1-shRNA1组细胞凋亡率(28.04±5.49)%高于Blank组(13.99±3.21)%和NC组(12.42±2.29)%,F=14.57,P=0.0050。辐射后各组细胞凋亡比例均增加,但Msi1-shRNA1组增加更加明显,F=8.795,P=0.0165。Msi1-shRNA1组p21蛋白表达明显高于Blank组和NC组,分别为(1.000±0.175)、(1.040±0.130)和(2.210±0.247),F=39.15,P=0.0004。双荧光素酶实验证实Msi1-shRNA1组p213′-UTR野生型的荧光素酶活性显著上升(F=102.5,P<0.0001),而3组细胞p213′-UTR突变型的荧光素酶活性差异无统计学意义,P>0.05。结论沉默结直肠癌Msi1基因,可能通过靶向上调p21,诱导辐射后细胞凋亡,抑制放疗后肿瘤细胞增殖,从而增加放疗敏感性。

Musashi1基因表达对人结肠癌HCT116细胞的放射增敏作用及其机制

目的 研究沉默Musashi1对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性的影响，为放射治疗提供新的增敏靶点。方法 用慢病毒载体建立Musashil（Msi1）低表达的稳转细胞株及阴性对照细胞株，将细胞分为沉默组、空白对照组和阴性对照组，通过克隆实验、流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期，证实其放射敏感性。结果 成功构建了沉默Musashi1的HCT116细胞。沉默组的D0、Dq、N、SF2分别为1.55、0.88、1.76 Gy和0.43，空白对照组分别为2.17、1.51、2.01 Gy和0.64，阴性对照组分别为1.99、1.45、2.07 Gy和0.62。沉默组相对于空白对照组的放射增敏比为1.40，相对于阴性对照组的放射增敏比为1.28。8 Gy照射后24、48、72 h，沉默组凋亡比例始终高于阴性对照组和空白对照组（F=65.16，P〈0.05），而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。12 Gy照射后48 h，沉默组细胞周期中G2/M期比例较空白对照组和阴性对照组显著下降（F=65.398，P〈0.05）。结论 降低Musashi1的表达对人结肠癌HCT116细胞有放射增敏作用，可能通过促进其凋亡，解除G2/M期阻滞而发挥放射增敏作用，有望成为新的增敏靶点。

RNA结合蛋白Musashi1在结直肠癌中的表达及临床意义

Musashi1（Msi1）是一种进化保守的RNA结合蛋白,同时它是肠道、神经等多种组织中的干细胞标志物,对于维持自我更新与分化之间的平衡具有重要作用.近年来研究发现Msi1在多种肿瘤组织尤其是结直肠癌中高表达,参与调控细胞周期、增殖、凋亡等过程,逐渐成为多种癌变的关键调节剂,有望成为肿瘤治疗的新靶点.

家族性慢性良性天疱疮一家系五例

先证者 男，48岁。因“双腋下、腹股沟水疱伴瘙痒破溃18年，糜烂加重半月”于2012年11月22日来我科门珍就诊。患者18年前无明姓诱因出现双腋下红斑、水疱，伴瘙痒，后发展至双侧腹股沟。