检测骨髓增生异常综合征的ETV6/JAK2融合基因产物的意义

目的:探讨在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中检测ETV6/JAK2融合基因产物的临床意义。方法:对66份来自MDS患者的骨髓标本进行骨髓细胞培养,制备染色体,做核型分析,对涉及9p24与12p13易位的患者检测ETV6/JAK2融合基因产物。结果:66例MDS中检出染色体畸变24例,染色体畸变率36%;其中低危MDS的染色体畸变率为25%(5/20);高危MDS的染色体畸变率为63%(19/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。涉及9p24和12p13易位1例,为RAEB-t患者,核型为46,XX,-6,t(9;12;22)(p24;p13;q11),+mar。行逆转录PCR检测ETV6/JAK2融合基因产物(+)。该患者在诊断MDS后5个月死于感染。结论:对MDS患者进行骨髓的ETV6/JAK2融合基因产物检测有助于了解病情的严重程度,便于指导治疗。

济南汉族群体5个Y-SNP位点的多态性分析

目的探讨济南汉族群体5个Y-SNP位点的多态性并评价其在法医学中的应用。方法采用片段长度差异等位基因特异性PCR（fragment length difference allele specific PCR,FLDAS-PCR）对济南汉族群体共103名男性无关个体5个Y-SNP标记（M89、M9、M122、M134、M95）进行分型研究。结果 5个Y-SNP位点在济南汉族群体中均呈多态性分布,基因多样性（GD）为0.093 3~0.491 2,共检测到20种单倍型（HD为0.8679）,根据国际Y染色体协会命名原则,共有6种单倍群。结论 5个Y-SNP位点及其单倍型在济南汉族具有较好的多态性分布,为该地区人群遗传结构的分析及法医遗传学研究提供了较多的信息量。

急性白血病M4Eo型患者ETV6基因重排及其意义

目的探讨在急性髓细胞白血病(AML)M4Eo型患者中检测到ETV6基因重排的临床意义。方法对3例AML-M4Eo患者骨髓标本进行细胞培养,制备染色体,分析核型,Split-signal FISH技术分析12p13染色体易位,RT-PCR检测ETV6/ARG融合基因产物。结果核型分析显示3例患者均有inv(16),Split-signal FISH检出12p13染色体易位1例,RT-PCR证实患者ETV6/ARG融合基因产物阳性。这是国际上第2例报道ETV6/ARG融合基因在AML-M4Eo中表达。结论伴有ETV6/ARG融合基因的患者对化疗不敏感,预后较ETV6/ARG融合基因阴性者差。Split-signal FISH是检测ETV6基因重排准确可靠的手段。

融合基因ETV6-NTRK3在恶性血液病中的表达及临床意义

目的:研究融合基因ETV6-NTRK3在血液系统恶性肿瘤中的表达水平及其特点,并寻找其与免疫表型之间的关系,初步探讨该融合基因在临床诊断、治疗及预后判断等方面的价值。方法:收集未治疗的血液系统恶性肿瘤患者的骨髓液共47例及其中14例经标准化疗方案化疗2个疗程的急性髓细胞白血病(AML-M2)患者的骨髓液,釆用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增特定的融合基因片段。同时,对47例初治患者使用流式细胞术进行FCM免疫表型分析。结果:47例血液系统恶性肿瘤中,有2例表达ETV6-NTRK3融合基因,均为AML-M2a患者,其在M2中阳性率约为14%(2/14)。未能查到NTRK3-ETV6和NTRK3基因。结论:①约有14%AML-M2患者存在ETV6-NTRK3融合基因t(12;15)(p12;q25)。均为M2a,为老龄患者,且伴有骨髓纤维化;②目前的标准化疗方案,对表达ETV6-NTRK3融合基因患者效果不佳,为难治性白血病,患者预后不良;③FCM免疫表型分析结果表明,表达ETV6-NTRK3融合基因的为AML M2型,表达CD13和CD33,且CD13表达强于CD33,不表达CD14,白血病细胞起源早,分化程度差,恶性度高。

伴有ETV6缺失、PML/RARα阴性的急性早幼粒细胞白血病一例报道

急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种特殊的急性白血病亚型,95%以上的APL患者有典型的染色体易位t(15;17),该文报道1例PML/RARα融合基因阴性但存在ETV6缺失的APL患者。患者成功治疗两年半后,再次出现白细胞及血小板异常,怀疑复发给予化学治疗无效,最终根据骨髓细胞学及骨髓活组织检查诊断该例发生了骨髓增生异常综合征(MDS)。该例提示ETV6缺失与患者先后发生APL、MDS可能有一定关系;APL成功治疗缓解后再次发病,是复发还是新发其他血液疾病,也应认真分析鉴别。

兴隆庄煤矿中年技术干部和行政干部血液流变学指标等检测结果比较

目的 观察兴降庄煤矿中年以上技术干部和行政干部的血液流变学指标等检测结果差异。方法 对兴降庄煤矿的中年以上干部和每两年进行一次体验。检测项目包括血液流变学 7项指标和血脂、血糖等 ,并对结果进行统计学分析比较。结果 行政干部组在全血粘度 (高切、中切、低切 )、红细胞压积、总胆固醇等多项指标较技术干部组高 ,两组存在差异或显著差异 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 0 1)。结论 行政干部较技术干部更易患循环系统疾病 ,他们更应注意饮食 ,锻炼身体 ,增强体质 ,改善血液的流变性。

骨髓增生异常综合征患者ETV6基因重排分析及其临床意义

目的用信号分离原位杂交(Split-signal FISH)技术分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者 ETV6基因重排情况,并初步探讨其与 MDS 分期和预后的关系。方法用常规细胞遗传学和 Split-signal FISH 技术分析58例 MDS 患者 ETV6基因重排,对涉及9p24、12p13平衡易位的患者以 ETV6F1、ETV6F2和 JAK2R1、JAK2R2为引物进行 RT-PCR。用 x^2检验和时序检验对患者的 ETV6重排与 MDS分期、预后之间关系进行分析。结果检出 ETV6基因重排4例(6.9%),其中1例(1.7%)经 RT-PCR证实形成了 ETV6/JAK2融合基因。平均随访12个月,4例(100%)重排患者全部转为急性白血病,中位生存时间7个月,另外54例患者10例(17%)转为急性白血病,中位生存时间28个月。4例重排患者均为 MDS 难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)阶段,另外54例有17例(31.5%)为 MDS 晚期阶段。结论 ETV6基因重排在 MDS 中有较高表达率(6.9%),并与 MDS 的分期和预后密切相关。

多变量模型预测再生障碍性贫血免疫抑制疗法疗效的初步研究

目的研究和评价外周血 T 细胞亚群、骨髓 T 淋巴细胞内 IFN-γ表达、Th_1/Th_2及 Tc_1/Tc_2值及 HLA-DRB1*1501表型在再生障碍性贫血(AA)患者免疫抑制疗法(IST)疗效预测中的价值;探讨建立临床和实验室指标多变量 AA 患者 IST 疗效预测模型的可行性。方法采用流式细胞术检测51例 AA 患者治疗前后外周血 T 细胞亚群,骨髓 T 细胞 IFN-γ、IL-4、并分析上述指标与疗效的关系。结果在所评价的指标中,CD8^+细胞内 IFN-γ的预测值最高,其灵敏度和特异度分别为94.3%和62.5%,阳性和阴性预测值分别为84.6%和83.3%,细胞内 IFN-γ阳性且 Tc_1/Tc_2<50能提高阳性预测值达92.3%。以中性粒细胞绝对计数(ANC)、骨髓 T 细胞内 IFN-γ染色、Tc_1/Tc_2分层和 HLA-DRB1*1501表型4个指标建立一个多变量模型,可用于诊断点的确定和个体患者治疗有效概率的预测。结论骨髓 CD8^+T 细胞内 IFN-γ敏感性和特异性最好,但对细胞内 IFN-γ阳性的原发性 AA 患者预测价值受限;CD8^+细胞内 IFN-γ阳性且 Tc_1/Tc_2<50预示患者有更多的机会通过 IST 治疗获得缓解;提示多变量 AA 患者 IST 疗效预测模型较单一预测指标更加适合临床,具有潜在的临床应用价值。

多发性骨髓瘤患者血清IL-17检测临床意义分析

目的:评估检测血清IL-17在多发性骨髓瘤(MM)诊断、预后及疗效判断方面的应用价值。方法:ELISA法检测21例MM患者(初诊7例,复发9例,平稳期5例)和15名健康体检者的IL-17、VEGF、TNF-α和β2-m血清含量,并分析IL-17与VEGF、TNF-α和β2-m水平之间的相关性。结果:初诊及复发MM患者的IL-17、VEGF、TNF-α和β2-m水平显著高于平稳期MM患者和对照组,差异有统计学意义,P<0.05。平稳期MM患者与对照组之间差异无统计学意义,P>0.05。IL-17、VEGF、TNF-α和β2-m的血清水平随着临床分期的增加而呈增高趋势,且除了IL-17外,Ⅲ期MM患者的VEGF、TNF-α和β2-m的血清水平均显著高于Ⅱ期患者,Ⅱ期患者显著高于Ⅰ期患者,差异均有统计学意义,P<0.05;ⅢA期MM患者的IL-17水平虽高于ⅡB期MM患者,但差异无统计学意义,P>0.05。比较各期患者A和B亚型各因子水平差异发现,除β2-m外,其余因子水平均是B亚型显著高于A亚型,差异有统计学意义(P<0.05),而ⅢB期MM患者的β2-m水平虽高于ⅢA期MM患者,但差异无统计学意义,P>0.05。MM患者的IL-17水平与TNF-α(r=0.918)、VEGF(r=0.862)和β2-m(r=0.953)均呈正相关,P值均<0.01。结论:IL-17能够促进血管新生并与MM进展相关,可作为MM临床分期、预后及疗效判断的潜在指标。

干扰素γ联合HLA-DRB1*1501预测再生障碍性贫血免疫抑制疗法的应用价值

目的研究和评价骨髓 T 淋巴细胞内 IFNγ与 HLA-DRB1*1501联合检测在再生障碍性贫血(AA)免疫抑制疗法(IST)疗效预测中的临床应用价值。方法 51例以含环孢素 A 的 IST 治疗的 AA 患者,治疗前检测骨髓 CD_8^+ T 细胞内 IFNγ染色和 HLA-DRB1*1501,随访后评价上述指标与临床疗效的关系。结果细胞内 IFNγ阳性的灵敏度为94.3%(33/35),特异度为62.5%(10/16);HLA-DRB1*1501阳性的灵敏度为45.7%(16/35),特异度为87.5%(14/16)。两者联合后,并行试验灵敏度和阴性预测值提高(分别为97.1%和90.0%);串联试验特异度和阳性预测值升高(均为93.7%)。由 logistic 回归方程计算出双阳性、细胞内 IFNγ阳性伴 HLA-DRB1*1501阴性、细胞内IFNγ阴性伴 HLA-DRB1*1501阳性和双阴性4组患者的预测概率分别为89.0%、77.4%、34.5%、18.2%。结论骨髓 T 细胞内 IFNγ和 HLA-DRB1*1501表型均简便实用,两者联合可以作为具临床实用价值的一种预测 AA 患者 IST 疗效的方法,双阳性预示患者治疗有效的可能性更高,对于大多数细胞内 IFNγ阳性的原发性 AA 患者来说有重要意义。

SATB1与HER2表达和乳腺癌分化程度的相关性

目的检测特异性核基质结合蛋白(SATB1)和人表皮生长因子受体2(HER2)在乳腺癌中的表达,探讨其与乳腺癌分化程度的关系。方法应用免疫组织化学方法检测乳腺癌患者SATB1和HER2蛋白的表达,使用荧光原位杂交(FISH)方法检测HER2基因扩增状态,分析二者表达的相关性及与临床病理参数之间的关系。结果乳腺癌中存在SATB1与HER2的高表达,且二者呈正相关(r=0.425,P<0.05)。SATB1和HER2的表达与肿瘤组织分级有关,其共表达的肿瘤组织具有更高的组织学分级,与Ⅲ级乳腺癌相关(r=0.472,P<0.05)。结论SATB1可调节乳腺癌中HER2的表达,SATB1/HER2双阳性表达是乳腺癌低分化的一个标志。

成人急性淋巴细胞白血病ETV6基因重排分析及其临床意义

目的检测成人急性淋巴细胞白血病(ALL)ETV6基因重排情况并探讨其临床意义。方法用Split-signalFISH技术检测32例初治及复发的成人急性淋巴细胞白血病患者骨髓样本ETV6基因重排情况,阳性样本行巢式RT-PCR证实融合基因形成。结果 FISH检测出1例ETV6易位样本,常规染色体检查为正常核型,RT-PCR证实形成ETV6-RUNX1融合基因。该患者为复发难治性白血病,复发后产生耐药,于确诊9个月后死亡。结论FISH检测ETV6基因重排较常规染色体核型分析更敏感。成人ALL中ETV6-RUNX1表达率低,可能与ALL复发患者的不良预后有关。

荧光原位杂交技术分析大剂量照射后Calyculin A诱导的早熟凝集染色体

目的 探索用荧光原位杂交（FISH）技术分析大剂量照射后Calyculin A（CA）诱导的早熟凝集染色体的可行性.方法 采用X射线照射离体外周血,吸收剂量为0、1、5、10、15和20 Gy.RPMI 1640培养基培养,CA诱导染色体早熟凝集,1、4号全染色体探针荧光原位杂交,荧光显微镜下观察,计数畸变阳性细胞数及两条染色体断片数,拟合剂量效应曲线.结果 以阳性细胞作为观察对象,剂量范围在0 ～15 Gy时,阳性细胞数和照射剂量呈现良好的剂量-效应关系,Y=0.008＋0.065D＋1.858x10-5D2（R2 =0.994）.以断片数作为观察对象,剂量范围在0～ 20 Gy时,同样呈现良好的剂量-效应关系：Y=-0.032＋0.216D-0.01D2（R2 =1.0）.结论 用FISH分析CA诱导的早熟凝集染色体,可用于估算大剂量照射后的生物剂量.

体内活化血小板表达CD40L及其对内皮细胞表达炎性因子的影响

目的探讨体内活化血小板表面细胞分化抗原40配体(CD40L)对内皮细胞炎性反应的影响。方法应用流式细胞术检测急性心肌梗死患者(AMI组,n=20)和健康人(正常对照组,n=20)血小板表面CD62P、CD40L的表达水平;体外分离AMI组及正常对照组血小板,分别与培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养,应用流式细胞术及ELISA法检测HUVECs膜性细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、E-选择素(E-selectin)和可溶性白介素-8(IL-8)的水平变化。结果 AMI组CD62P和CD40L表达水平较正常对照组显著升高(P<0.01);AMI组血小板作用于HUVECs后,能促进HUVECs表达ICAM-1、E-selectin和IL-8(P均<0.01),应用特异性CD40L单抗可显著抑制HUVECs炎性因子的表达(P<0.01),而正常对照组血小板对HUVECs表达炎性因子无明显影响(P>0.05)。结论 AMI患者体内活化血小板可高表达CD40L,并对内皮细胞表达炎性因子具有诱导作用。

山东省乙型血友病患者的基因检测及分析

目的分析乙型血友病患者FⅨ基因的突变类型,初步探讨乙型血友病发病的分子机制。方法采用PCR扩增目的片段结合直接测序方法,对19个家系24例乙型血友病患者FⅨ基因的8个外显子及其侧翼序列进行检测,并与国际FⅨ基因突变数据库相比对。结果 24例患者FⅨ基因共检测出18种不同突变类型,其中c.200del A、c.306del T、c.688-690del GGA、c.1025C>G、c.1157C>A等5种突变类型为首次发现。结论 FⅨ基因突变是导致乙型血友病的根本原因。FⅨ基因突变分散,呈高度异质性。研究发现5种新突变,丰富了FⅨ基因突变谱,为乙型血友病发病的分子机制提供了一定的分析依据。

HLA-DRB1*1501和TNF-α308位点基因多态性预测再生障碍性贫血免疫抑制疗法的疗效

目的研究再生障碍性贫血(AA)患者HLA-DRB1*1501表型及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)-308位点基因多态性对其免疫抑制疗法疗效的预测价值。方法 40例初治AA患者,给于环孢菌素(CsA)为主的免疫抑制治疗,应用PCR-SSP方法分析HLA-DRB1*1501表型,用PCR-RFLP技术检测TNF-a308位点基因型,并随访评价上述各指标与患者预后的关系。结果 HLA-DRB1*1501表达阳性患者与阴性患者对免疫抑制治疗有效率分别为85.7%和46.2%(P=0.024);TNF-a308A(TNF2)阳性患者与阴性患者对免疫抑制治疗有效率分别是78.6%和48.1%(P=0.039);HLA-DRB1*1501阳性TNF2阳性、HLA-DRB1*1501阳性TNF2阴性、HLA-DRB1*1501阴性TNF2阳性、HLA-DRB1*1501阴性TNF2阴性四种预测概率值分别为0.963、0.785、0.754、0.354。结论 HLA-DRB1*1501和TNF-a联合检测有可能成为AA患者免疫抑制治疗疗效的预测方法。

伴13号染色体缺失的多发性骨髓瘤患者CD138^+细胞差异表达miRNAs的筛选

目的初步筛选伴13号染色体缺失的多发性骨髓瘤患者CD138+细胞差异表达显著的microRNAs(miRNAs)并探求其生物学功能。方法通过荧光原位杂交(FISH)实验从29例多发性骨髓瘤初治患者中筛选出13号染色体缺失和核型正常的多发性骨髓瘤患者各3例;应用miRNA芯片技术获得差异表达miRNAs,并进行实时定量PCR验证;应用在线软件预测差异miRNAs的潜在靶基因,并建立miRNAs与靶基因的调控网络。结果检测出5个在伴13号染色体缺失的多发性骨髓瘤患者CD138+细胞中差异表达的miRNAs,其中4个表达下调,1个表达上调;生物信息学分析显示,SMAD3基因位于miRNAs-靶基因调控网络的关键节点上。结论伴13号染色体缺失的多发性骨髓瘤患者CD138+细胞中存在特异性表达的miRNAs;SMAD3基因可能在该类型多发性骨髓瘤发病中发挥作用。