糯玉米SW70和SW22是一类新的淀粉合成酶基因功能缺失多突变体

糯玉米是一类相对于粮食玉米的重要天然突变体,其淀粉合成的遗传机制复杂而又多样。以糯玉米自交系SW22、普通玉米自交系5003、SW22(♀)和5003(♂)的杂种定向选育的糯玉米自交系SW70(自交4代)为材料,研究了自交系授粉后1、2、4周时,SW22、SW70和5003籽粒中ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)、淀粉合酶(SS)、淀粉分支酶(SBE)和淀粉去分支酶(DBE)共4个家族21个成员编码基因表达水平的变化。结果表明:1)SW22中多个淀粉合成酶编码基因的表达动态与SW70及5003中有显著差异,差异主要存在于淀粉合酶SS和淀粉去分支酶DBE基因家族;2)SW22及SW70籽粒中有明显的Wx转录产物累积,但累积水平均显著低于5003籽粒中;3)SW22及SW70中颗粒结合淀粉合成酶编码基因GbssIIb和异淀粉酶型去分支酶编码基因Iso2完全不表达,意味着SW22胚乳中GbssIIb基因和Iso2基因的功能完全缺失。目前,有关玉米籽粒中GbssIIb和异淀粉酶型DBE Iso2同时突变或单个基因突变均未见报道。推测淀粉合成酶基因GbssIIb和异淀粉酶型DBEIso2功能缺失以及Wx功能部分缺失,共同导致了SW22和SW70籽粒中直链淀粉合成部分缺陷。

淀粉分支酶和去分支酶编码基因的功能

淀粉分支酶(SBE)和淀粉去分支酶(DBE)是直接参与淀粉生物合成的5类酶中的2类关键酶,前者催化α(1-6)糖苷键分支点形成支链淀粉,后者水解葡萄糖苷链中α(1-6)糖苷键。文章概述了已克隆的编码SBE和DBE同种型编码基因及其在体内外的表达特征,并提出DBE多聚体酶的结构和功能将成为淀粉粒起始形成研究中的起点,SBEI和SBEII表达调控是支链淀粉分子改良的途径的看法。

马铃薯表观淀粉含量与直链淀粉含量相关性研究

测定了48个不同马铃薯品种表观淀粉含量以及块茎中和淀粉中直链淀粉含量,对表观淀粉含量和块茎中直链淀粉含量间,表观淀粉含量和淀粉粒直链淀粉含量间进行了相关分析。结果表明:表观淀粉含量和块茎中直链淀粉含量间相关显著,表观淀粉含量和淀粉粒直链淀粉含量间相关不显著,且中熟和晚熟基因型表观淀粉含量和淀粉粒直链淀粉含量间相关也不显著,这些结论将为淀粉生物合成的理论研究和淀粉品质改良提供基本的表型数据。

枸杞蔗糖磷酸合成酶基因的克隆及组织表达分析

利用RT-PCR及RACE技术,从药用植物枸杞中克隆了1个编码蔗糖磷酸合成酶（SPS）基因的全长cDNA,命名为LbSPS（GenBank登录号KC834608）。序列分析表明：LbSPS基因长3 677 bp,开放阅读框为3 165 bp,编码1 033个氨基酸,分子量为118.457 5 kD,理论等电点6.05。系统进化分析显示,LbSPS编码的氨基酸序列与甜瓜、马铃薯、番茄等蔗糖磷酸合成酶基因编码氨基酸序列一致性为66%～98%。qRT-PCR分析显示,LbSPS基因在枸杞花中表达量最高,叶中表达水平较低。该研究为进一步了解LbSPS在枸杞生长发育、逆境胁迫等过程中的生物学功能奠定了基础。

马铃薯不同基因型直链淀粉含量比较分析

分离提取了 12 6个马铃薯品种 (系 )基因型的块茎内源淀粉 ,用Hovenkamp HermelinkJ .H .M的方法测定了其直链淀粉含量 ,用ANOVA比较分析了块茎成熟期基因型和品种基因型的直链淀粉含量 ,其基本结论是品种基因型间直链淀粉含量存在极显著差异 ,而成熟期基因型间直链淀粉含量不存在差异 ,该结论为淀粉品质改良提供基本依据和数据。

经皮肝穿刺胆管引流术并胆道支架植入治疗恶性梗阻性黄疸(附36例分析)

经皮肝穿刺胆管引流术（PDCT）并胆道支架植入一种针对梗阻性黄疸患者术前减轻黄疸和姑息性治疗的有效方法。恶性梗阻性黄疸常由胰腺癌、胆囊癌、胆管癌以及转移性肿瘤如胃癌胆道转移等所引起。以皮肤、巩膜黄染为主要表现，随着病情加重可引起肝、肾功能衰竭甚至多器官功能衰竭（multipleorganfailure，MOF），严重影响患者生活质量，因此对不宜手术或无手术机会的患者实施姑息治疗十分必要。

马铃薯AGPase大小亚基功能研究

马铃薯 1,6 二磷酸腺苷葡萄糖焦磷酸化酶 (AGPase)是淀粉合成的限速酶 ,该酶有大、小两个亚基形成异源四聚体。总结了迄今为止已克隆的马铃薯AGPase大、小亚基编码基因、小亚基和底物结合位点的识别、以及大亚基异构调控因子结合位点识别的研究结果 ,提出了大小亚基非自然重组是深入研究AGPase的途径 ,建立体内条件下高效可靠代谢调控研究手段是AGPase研究所必需的。

生物类分子生物学教学改革的探索与实践

分子生物学是生物类专业学生需要掌握的一门专业基础课程,具有知识量大、发展迅速和与其他相关学科关系密切等特点。为了满足生物学专业21世纪人才培养的要求,本院开展以优化教学内容、探讨新的教学方法和引入新的教学手段为内容的教学改革,旨在提高分子生物学课堂教学质量,培养高素质生物学人才,满足社会对生物学人才的需求。

思维导图在高校生物类分子生物学教学中的应用

思维导图作为一种思维工具和辅助学习工具,通过直观化、发散化和非线性方式来帮助掌握学习内容。在分子生物学教学中使用思维导图,可以帮助学生掌握学习重点,提高学习效率,更有效地训练学生的高级思维技能。

利用Ⅱ型启动子转录的U6 RNA提高植物病毒表达载体在植物中表达外源基因的水平

Ⅱ型启动子转录的外源短链RNA可以竞争性抑制细胞内源mRNA的核质转运,因而可能会提高植物RNA病毒载体表达的外源基因在植物中的积累.为了验证这一假说,利用OE-PCR技术合成拟南芥U6-1核内小RNA序列,并构建其Ⅱ型启动子转录的植物表达载体.以农杆菌渗滤技术,与烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)表达载体共接种寄主植物本氏烟,通过对报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的荧光观察,并以Western印迹和ELISA测定GFP在烟草中的表达情况,分析共表达Ⅱ型启动子转录的U6 RNA对外源基因在植物中表达的作用效果.结果表明,共接种Ⅱ型启动子转录的U6 RNA对TMV病毒表达载体表达外源基因的水平有明显的增效作用,推测RNA核质转运干扰是提高外源基因表达的可能机制.

CT与MRCP对肝胆管结石并发肝胆管癌的诊断效果比较

目的比较CT、磁共振胰胆管造影(MRCP)对肝胆管结石并发肝胆管癌的诊断效果。方法选取该院2012年12月至2014年12月收治的62例肝胆管结石并发肝胆管癌患者分别行CT、MRCP、B超联合CT、B超联合MRCP检查,记录并比较各种方法对肝胆管结石并发不同类型肝胆管癌的诊断率。结果 CT总诊断阳性率[69.4%(43/62)]低于MRCP[85.5%(53/62)],差异有统计学意义(χ2=4.613,P<0.05)。MRCP对肝胆管结石并发结节型、团块型和胆管乳头型肝胆管癌的诊断率略高于CT,但差异无统计学意义(P>0.05);MRCP对肝胆管结石并发胆管增厚型肝胆管癌的诊断率明显高于CT,差异有统计学意义(P<0.05);B超联合MRCP检测的诊断率明显高于B超联合CT,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CT和MRCP对肝胆管结石并发肝胆管癌均具有较高诊断准确率,并且B超分别与CT、MRCP联合使用可明显提高对肝胆管结石并发肝胆管癌的准确率。

THYESS法结合QSAR分析对环境内分泌干扰性物质的筛检研究

利用THYSS法对几种典型的环境内分泌干扰物质的毒理活性进行了定量筛检,并进一步结合量子化学对被检物质作了QSAR分析。结果表明,用THYESS法筛检出的环境内分泌干扰物质存在着良好的毒活性-反应剂量关系。这种测定方法再结合量子化学的QSAR分析,有望成为获得大量环境样品中EDCs毒害数据的一种良好方法。

盐胁迫下宁夏枸杞Na^+吸收及Na^+/H^+转运蛋白与H^+-ATPase基因表达的研究

为从分子水平揭示宁夏枸杞钠的吸收积累机理,本试验采用原子吸收分光光度法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,对盐胁迫下宁夏枸杞根中Na^+、K^+含量以及质膜和液泡膜Na^+/H^+转运蛋白与H^+-ATPase基因表达水平进行测定分析。结果表明,相同胁迫时间下,随着NaCl处理浓度的增加,枸杞根系中Na^+浓度总体呈缓慢增加趋势,K^+含量呈先增加后减少趋势,Na^+/K^+比值呈先减少后增加趋势;编码质膜和液泡膜的Na^+/H^+转运蛋白基因LbSOS1、LbNHX1以及液泡膜H^+-ATPase基因LbVHA-C1表达量均呈升高趋势,质膜H^+-ATPase基因LbHA1表达量呈先升高后降低趋势。相同NaCl处理浓度下,随着胁迫时间的延长,Na^+含量总体呈增加趋势,K^+含量呈先增加后减少趋势,Na^+/K^+比值呈增加趋势。LbSOS1、LbNHX1表达量总体呈先升高后降低趋势,LbVHA-C1、LbHA1表达量总体呈降低的趋势。相关性分析显示,不同胁迫时间下,枸杞根中LbSOS1、LbNHX1、LbVHA-C1和LbHA1表达量与Na^+含量存在一定的正相关或负相关。上述结果表明,在低浓度NaCl胁迫时,维持枸杞体内较高的K^+/Na^+比值是宁夏枸杞耐盐的主要方式之一,同时也说明在胁迫初期,质膜和液泡膜的Na^+/H^+转运蛋白与H^+-ATPase参与了枸杞细胞中Na^+及时排出胞外和区隔于液泡,从而保持了根细胞内Na^+的稳定性。此外,随着胁迫时间的延长和NaCl处理浓度的增加,LbSOS1、LbNHX1、LbVHA-C1和LbHA1的表达水平均降低,而Na^+积累量大幅增加,致使枸杞抗盐性降低。本研究揭示了宁夏枸杞的耐盐机理,为利用宁夏枸杞改良宁夏大面积盐碱地提供了理论依据。

疏水蛋白HFBI融合标签能显著提高外源基因在植物中的表达水平

目的针对植物生物反应器中外源基因表达水平普遍较低的问题,探索和评价丝状真菌瑞氏木霉(Trichode rma re e s e i)编码的小分子疏水蛋白(Hydrophobin,HFBI)作为融合标签在植物生物反应器中提高系统表达量的应用潜力;分析其提高外源基因表达水平的可能机制。方法以绿色荧光蛋白(GFP)为报道基因,采用基因体外合成技术和亚克隆技术构建GFP和GFPHFBI融合植物表达载体。利用农杆菌渗滤技术接种植物本明烟(Nicotiana be nthamiana)。通过GFP荧光观察,荧光显微镜镜检,Western blot,ELISA和RT-PCR等实验手段测定报告基因GFP在植物中的表达情况,探明HFBI融合标签在植物中表达外源基因的作用效果和特点并分析其可能的作用机制。结果 HFBI融合标签对植物细胞无明显的细胞毒性;GFP-HFBI融合蛋白在植物中的积累水平显著高于对照;GFP-HFBI融合蛋白在细胞内形成致密的蛋白质颗粒。结论 HFBI融合标签能够显著提高外源基因在植物中的积累水平。推测形成的蛋白质颗粒隔绝了细胞内源性蛋白酶对目的表达产物的降解,进而提高了外源基因产物在细胞中的积累。

助教主导的小组讨论模式与高校“课程思政”教育创新研究

探索助教主导的小组讨论模式在专业课课程思政建设过程中的应用。通过挑选助教,建立讨论提纲,构建学习、管理和评价系统,设置激励机制关键环节等措施,在助教主导的研讨会中系统、连续地渗透思政内容。将思政教育与专业课教学有机融合,落实“课程思政”理念,破解难以将思政教育融入高校专业课程教学中的难题,提升思政教育实效,实现全过程和全方位育人。

在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂

目的探索在植物中瞬时高效表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的可行性,探寻低成本rhPA表达新途径。方法构建表达rhPA的烟草花叶病毒(TMV)表达载体pTMV rhPA-NSK和Zera融合标签植物表达载体pJ Zera-rhPA;农杆菌渗滤接种受体植物Nicotiana benthamiana和N. excelsiana叶片;观察叶片接种部位表型变化;Western blot和ELISA测定和分析rhPA在受体烟草中的表达情况及表达产物特点;纤维蛋白琼脂糖平板法评价rhPA的体外生物活性。结果病毒载体实验结果显示,pTMV rhPA-NSK病毒载体在N. benthamiana和N. excelsiana叶片接种部位产生不同程度的坏死症状;在坏死组织中依然存在完整的rhPA蛋白;N. benthamiana中rhPA的表达量略高于N. excelsiana(P<0.05),约占接种叶片可溶性总蛋白的0.6%;表达的rhPA具有体外溶栓活性。Zera融合标签实验结果显示,pJ Zera-rhPA表达载体在烟草叶片接种部位未造成坏死;Zera标签与其融合蛋白rhPA之间可能存在着易断裂位点;Zera标签蛋白微粒的形成是一种逐步积累聚集的过程;在微粒形成过程中,部分可溶性多肽可能被包裹进了微粒。结论在烟草中可以快速地表达具有生物学活性的rhPA,植物病毒表达系统为低成本rhPA的生产提供一种富有潜力的新平台。

枸杞酸性转化酶基因的克隆及组织表达分析

以“宁杞1号”枸杞为试材，通过RT-PCR及RACE技术进行枸杞酸性转化酶基因的克隆及组织表达分析，并运用MEGA5．0软件对植物转化酶基因进行了系统树分析。结果表明：扩增获得2193bp的枸杞酸性转化酶基因，命名为LbSAJ（GenBank：KC776575），该基因推导氨基酸序列与马铃薯、番茄、梨等酸性转化酶基因氨基酸序列同源性为68％～100％；LbSAJ编码的蛋白质属于液泡酸性转化酶；Real—timePCR表达分析显示，L6SA，基因在枸杞花中表达量最高，在根中表达水平较低。

观察CT血管成像(CTA)联合数字减影血管造影(DSA)技术在胸腹主动脉瘤诊治中的应用价值

探索胸腹主动脉瘤诊治中CT血管成像联合数字减影血管造影技术的价值。方法:98例疑似胸腹主动脉瘤患者于2018年3月-2020年12月就诊,所选对象均CT血管成像、数字减影血管造影检查以及联合检查,检查结果与手术确诊结果做出对比。结果:CT血管成像、数字减影血管造影检查结果对比无较大差异(P>0.05),联合诊断的准确度要高于单一检查。结论:CT血管成像联合数字减影血管造影在诊断胸腹主动脉瘤中发挥的作用比较大,提升诊断的准确度,对患者的病理特征等进行观察和分析,获取到疾病的信息,为治疗创造条件。

同伴主导的小组讨论模式在动物分子生物学教学中的应用

同伴主导的小组讨论模式作为一种全新的教学方法,在完成动物分子生物学课程任务过程中被采用,通过骨干挑选与培训、适当的素材、合理的组织安排等关键环节,在同伴主导的研讨会中推动学生主动学习,激发学习兴趣,提高学习效率,完成学生能力的提升。

Hedgehog、p53和NF-κB信号通路在病原微生物入侵机体时的免疫应答机制

病毒、细菌等致病病原微生物一旦入侵机体,免疫系统会迅速启动抗感染免疫应答反应,但长期困扰免疫学界的问题是免疫系统通过什么样的细胞与分子机制特异性感知外源病原微生物入侵,并有效地启动免疫应答效应以杀伤、清除病原微生物,以及能否准确预测外源病原体入侵时机体做出的应答。