乙酰肉碱的化学合成与酶法拆分

采用化学方法以肉碱为底物,合成了外消旋乙酰肉碱,精制后可获得纯度99%以上的乙酰肉碱,收率为96%.利用蜗牛酶(SnailEnzyme)对其进行不对称酯水解反应,发现蜗牛酶对乙酰肉碱具有高度立体选择性,并且可得到光学纯度为98%的乙酰-L-肉碱.

Doppel蛋白研究进展

朊蛋白PrPC的错误折叠形式即PrPSc,它是瘙痒症感染因子的主要组成部分,也是可传播性海绵样脑病(TSE)的致病因子,但是PrPSc既不引发免疫应答也不产生炎症反应。编码细胞水平的PrPC蛋白的基因Prnp20年前就已经被克隆,但是其基因序列及功能仍不清楚。直到1999年才发现了一种新蛋白,命名为Doppel(Dpl),此蛋白与PrPC在生化和结构方面有不少相似性,其一级结构与PrPCC端的2/3有25%的同源性。尽管有关Dpl的研究尚处于萌芽状态,但它的发现已经解释了朊蛋白生物学上的一些谜团,而且对其生理功能也有了一定的了解。本文综述了近年来对Dop-pel蛋白的研究进展。

日本脑炎病毒E蛋白在酵母双杂交系统中的表达及其对报告基因激活作用的检测

用日本脑炎病毒(JEV)E蛋白基因片段构建酵母双杂交诱饵载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用。用RT-PCR从JEV感染的鼠脑中扩增出JEVE蛋白基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用。成功获得JEVE蛋白基因片段,表达的E蛋白对酵母菌AH109无毒性,对报告基因亦无激活作用。为利用酵母双杂交GAL4系统3进行JEV细胞受体蛋白的研究奠定了基础。

日本脑炎病毒内影像组抗独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 制备具有内影像作用的分泌日本脑炎病毒（JEV）抗独特型单克隆抗体（AId mAb)杂交瘤细胞系。方法 以传统免疫法和硝酸纤维素膜（NC膜）皮下包埋免疫法，用具有高中和活性的抗JEV mAb 2H4和2F2分别免疫Balb/c小鼠，按常规方法融合，经多种ELISA、表面等离子共振和动物免疫实验筛选并鉴定具有内影像作用的AId mAb。结果 获得了3株可分泌AId mAb的杂交瘤细胞系。结论 所获AId mAb均能模拟JEV抗原，为JEV受体的分离、纯化提供了条件。

适应高等医学教育发展需要,积极探索专业外语教学新模式

掌握外语和计算机是当代医科大学学生必备的专业素质，而当前医学生的实际外语水平并不太令人满意。系统总结了近十年来本教研室所采取的一些能够有效提高学生专业外语水平的方法，以达抛砖引玉之目的，为今后全面施行专业课的双语教学奠定基础。

研究生单克隆抗体技术课程双语教学的设计与实践

在高等教育阶段实施双语教学日益成为我国高校教学改革的一个重要方向。研究生院从2003年起选择单克隆抗体技术等课程进行了双语教学试点。几年来的教学实践表明,单克隆抗体技术课程双语教学总体上是成功的。同时总结经验,分析存在的问题及其原因,提出改进设想,以达到抛砖引玉之目的。

反义硫代寡聚核苷酸对抗日本脑炎病毒的活性

目的：针对日本脑炎病毒ＳＡ－１４株病毒基因组５＇端第一个ＡＵＧ起始码前后和非结构蛋白ＮＳ５的５＇端基因区设计并合成了两个硫代的反义寡聚核苷酸（二十聚），观察了它们对病毒在ＢＨＫ－２１细胞中复制的影响．方法：以定量病毒攻击ＢＨＫ－２１细胞，分别测定ＣＰＥ，病毒蛋白质表达及病毒空斑形成抑制率，观察不同浓度的反义核酸在不同时间对病毒复制的作用．结果：细胞培养液中含有１．０μｍｏｌ／Ｌ即可明显推迟ＣＰＥ的出现，时间可达４８ｈ，浓度提高４倍仍未能完全抑制ＣＰＥ的发生．２．５μｍｏｌ／Ｌ反义核酸对病毒蛋白抗原表达无抑制作用，而较高浓度（５．０，１０．０和２０．０μｍｏｌ／Ｌ）则可抑制抗原表达，并可维持９６ｈ左右．病毒空斑试验结果却显示反义核酸的抑制作用在１８ｈ时最强（其中片段一５．０μｍｏｌ／Ｌ时的空斑形成抑制率超过９０％），２４ｈ后上述作用很快消失．此外，高浓度（８０．０μｍｏｌ／Ｌ）反义核酸对ＢＨＫ－２１细胞无明显毒性．结论：人工合成的反义核酸能明显抑制日本脑炎病毒的致细胞病变作用、抗原表达及复制．此作用呈现出暂时性、特异性及反义核酸剂量依赖性．

探索性实验是创新型人才培养的有效途径

通过探索性实验与高素质创新型人才培养关系的探讨,阐述了探索性实验是高素质创新型人才培养的重要途径和探索性实验的实施程序。

酶解核桃仁制备低分子肽

以核桃仁为原料 ,采用酶解技术 ,经蛋白质提取、酶解、分离等工序制备高质量低分子肽制品 .蛋白酶水解核桃仁的最佳条件为 :温度 40℃、p H9、底物浓度 40 mg/m L、酶量1 5 0 U/g,反应时间 2 h,在此条件下核桃蛋白质的水解度约为 2 0 % .

乙型脑炎病毒E蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达

目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果 :由于糖基化不同 ,所表达产物的相对分子质量 (Mr)约为 1130 0 0和 780 0 0 ,表达量约为5 0mg/L。结论 :在巴斯德比赤酵母中成功地表达了JEVE蛋白 。

抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。

空斑法筛选具有中和活性的抗衣原体粘连蛋白McAb

本研究制备了抗１８ｋＤａ粘连蛋白的单克隆抗体，并证实在不同血清型之间，甚至不同种衣原体之间１８ｋＤａ粘连蛋白具有一定的共同抗原表位。我们建立的空斑形成试验和单克隆抗体空斑减少中和试验，实验结果明显、客观，易于判定，稳定性好。用此筛选出县有中和活性的２Ｂ９ＭｃＡｂ。该ＭｃＡｂ不同于目前已报道的ＭｃＡｂ，其中和活性不依赖于补体，而可能是抑制衣原体的粘附。

从噬菌体15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽

目的用抗JEV E蛋白的mAb 2H4筛选噬菌体15肽库，以研究JEV E蛋白模拟肽。方法用生物素标记的mAb 2H4，对噬菌体随机15肽库进行3轮筛选。经ELISA鉴定后，随机挑取10个阳性噬菌体克隆测序，并与JEV E蛋白进行同源性比较。结果筛选到的噬菌体能与mAb 2H4特异地结合，并且这种结合可被天然JEV抗原所抑制。10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同，均为RQDPQWPYANSTIAR。同源分析表明，在JEV E蛋白不同区域有两个同源性较高的序列：STXAR和WXXAXST。阳性噬菌体展示肽也能与抗天然JEV抗原的鼠血清产生特异性反应。结论筛选的该噬菌体克隆展示肽可模拟JEV E 蛋白的部分抗原性。

关于病原微生物毒力进化的若干思考

病原微生物的致病作用（毒力）差异很大。这些差异除了致病菌本身的原因外，还与宿主和外界环境有着极其密切的关系，并且处于不断的变化之中。作者依据现代进化理论，考察了一些传染病病原体的致病特点，认为其传播方式在某种程度上反映了其毒力的强弱，是长期适应宿主和外界环境的结果，并试图通过以上分析预测病原体毒力变异的趋势，进而制定正确的卫生保健策略，改善人类社会的行为方式，采取相应有效的医疗措施以阻止毒力向增强的方向进化，从而最终使人类自己受益。

SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备

目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb。结果: 从标本中扩增出 1 269bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因。将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达。表达产物经SDS- PAGE后, 在Mr约为 43 000处可见 1条明显的诱导表达带。Westernblot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应。从SDS- PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出 3株抗N蛋白的mAb。这些mAb与SDS- PAGE凝胶上Mr约为 43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。

医学微生物学课堂教学与网络课程的比较研究

高校网络课程的发展给传统课堂教学带来了挑战,同时也是传统课堂教学改革的重要契机。文章对这两种教学模式的优点和不足之处进行了深入分析,提出了网络课程和课堂教学进行优势互补和有效整合的几点意见,希望能够为高校医学微生物学探索出一种高效的适应时代发展的新的教学模式,从而激发学生学习兴趣,提高教学质量。

乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究

本研究根据已知的乙脑病毒 (JEV)SA14株基因序列设计一套引物 ,利用长模板RT PCR技术 ,一次扩增出了JEV的全长cDNA ,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的RNA聚合酶启动子下游。阳性克隆转录的RNA转染HBK细胞后细胞产生病变 ,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为JEV ,这一结果表明JEV感染性克隆的构建获得了成功。其次 ,合成一条含有RNA聚合酶启动子序列的 5′引物 ,利用长模板RT PCR方法扩增出带有启动子的JEV全长cDNA ,以此cDNA为模板作体外转录。转录产物转染BHK细胞后观察到了典型的JEV病变。收获的病毒经乳鼠脑内接种及免疫荧光染色证明为JEV ,从而建立了制备JEV感染性RNA的快捷方法。本研究构建的JEV感染性克隆与建立的长模板RT PCR快速制备JEV感染性RNA的方法 ,将为JEV分子生物学研究的后续工作提供有力的工具和奠定坚实的基础。