流式细胞仪检测白细胞胞浆内抗原髓过氧化物酶的实验研究及其应用

目的评价流式细胞仪检测胞浆内抗原髓过氧化物酶(MPO)的方法,探讨实验中各因素对检测结果的影响。方法以HL-60细胞为模型,多参数流式细胞仪分析,比较FACS、Fix&Perm、Fixation&Permeabiliza-tion 3种破膜剂处理及不同处理时间、不同荧光染料对实验结果的影响。检测正常人和急性白血病患者的MPO表达情况。结果FACS破膜剂对细胞的前向散射角/侧向散射角(FSC/SSC)影响最小,相对荧光强度(RFI)明显高于其他两者。3种破膜剂在破膜时间15 min时均可达到最佳效果。藻红蛋白(PE)标记的MPO抗体在荧光强度上明显优于异硫氰酸荧光素(FITC)。41例初发急性白血病患者和20例非白血病患者骨髓检测结果证实,MPO为急性髓系白血病诊断中最为敏感的髓系抗原。结论流式细胞仪检测MPO的标准推荐方法:应用FACS破膜剂15 min,标本必须当天完成检测,尽量采用PE标记的MPO抗体。MPO对急性白血病的诊断和分型非常重要。

氨苯砜治疗15例对糖皮质激素耐药的成人原发性免疫性血小板减少症的临床疗效

目的:报道氨苯砜治疗15例对糖皮质激素耐药的成人原发性免疫性血小板减少症的临床疗效。方法:全部患者门诊治疗,给予氨苯砜口服50～100mg/d治疗12～104周,观察临床出血症状、血小板计数和血红蛋白值,并结合相关文献进行讨论。结果:平均治疗54.9(12～104)周后,1例获完全反应、7例有效、7例无效;5例血红蛋白值轻度下降。结论:氨苯砜是一种价格低廉且耐受性好的耐激素成人原发性免疫性血小板减少症的门诊治疗选择。

二乙酰己二胺(CAHB)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的心脏安全性临床评价

目的:对新型癌细胞诱导分化剂二乙酰己二胺(CAHB)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的心脏安全性进行临床观察和评价。方法:MDS患者10例,以CAHB注射液治疗2个疗程,每个疗程在用药前、用药中和用药后分别进行心脏安全性临床观察,包括不良反应、生命体征、心肌坏死标志物、心电图、超声心动图和动态心电图。结果:10例患者共完成18个疗程治疗,有2例观察到心电图心室除极和复极的相关性变化,包括出现U波(使QT时间延长)、ST段压低、T波低平、钝挫等,第二疗程时又重现上述改变。心电图的异常在停药后6 d内消失,不伴有胸闷、气急等不适症状,也无相应的心肌损伤标志物的异常升高、电解质异常、超声心动图和动态心电图的特异性改变。结论:心电图的异常改变与本试验药物相关,但停药后可恢复,且不伴有其他心脏安全性指标的相应变化。

多发性骨髓瘤免疫表型的特点

目的研究多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的免疫表型特点及意义。方法采用直接免疫荧光法及三色流式细胞术,分析30例多发性骨髓瘤免疫表型。结果 30例MM患者的CD38、CD138均为阳性,CD3、CD10、CD22、CD34均为阴性,CD56表达阳性25例(83.3%),CD28表达阳性8例(26.7%),CD117表达阳性3例(10.0%),CD 45弱阳性表达5例(16.7%),仅1例低表达CD19及CD20。结论细胞免疫表型可以鉴别良恶性浆细胞,对MM辅助诊断、监测微小残留及靶向治疗提供依据。

二乙酰己二胺治疗高危型骨髓增生异常综合征的研究

本研究探讨癌细胞诱导分化剂二乙酰己二胺(CAHB)对高危型骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效,查明其在体外对HL-60细胞的作用及可能机制。高危型MDS患者8例,给予CAHB治疗2个疗程,用药前后计数骨髓原幼粒细胞和单核细胞的比例。在体外试验中用MTT法检测CAHB对HL-60细胞增殖的抑制作用,流式细胞术(FCM)检测CAHB对HL-60细胞表面CD11b和CD14分化抗原表达的影响,Annexin V/PI双染色法检测CAHB诱导HL-60细胞凋亡的作用,FCM检测CAHB对HL-60细胞周期分布的影响。结果表明,8例患者用CAHB治疗后,骨髓的原幼粒细胞和单核细胞比例有不同程度的下降,造血系统毒副反应主要是血小板减少。MTT检测发现,HL-60细胞经1、2、3、4mmol/LCAHB作用72小时后,HL-60细胞的增殖受到抑制,并且该作用随药物浓度的增加而增强。HL-60细胞分别经1、2、3、4mmol/LCAHB作用72小时后,CD11b的阳性表达率为(22.39±3.97)%、(33.12±4.46)%、(49.25±5.27)%和(78.05±5.66)%,与空白对照组的(5.89±2.94)%比较,差异有统计学意义(p<0.01)。而CD14的表达在各组细胞中均为阴性,这表明CAHB可诱导HL-60细胞向成熟粒细胞系分化,并且该作用随药物浓度的增加而增强。HL-60细胞经1、2、3、4mmol/LCAHB作用72小时后,其凋亡率(Annexin+/PI-)仅较空白对照组略有增加。此结果提示在1-4mmol/L浓度下,CAHB诱导HL-60细胞凋亡的作用很微弱。HL-60细胞经1、2、3、4mmol/LCAHB作用72小时后,随药物浓度的增加,G0/G1期细胞的比例逐渐增加,而S期和G2/M期细胞的比例相应地逐渐减少,这表明CAHB能阻滞HL-60细胞于G0/G1期,并且该作用随药物浓度的增加而增强。结论:CAHB对MDS有减少原幼粒细胞和单核细胞的作用,该治疗作用可能主要是通过诱导分化实现的,在治疗浓度时无诱导凋亡的作用,细胞周期的阻滞作用可能是CAHB诱导分化的基础。用药后血小板减少的副作用可能与CAHB的抑制造血相关。

血液科医院感染致病菌分布及耐药性分析

目的:分析血液科住院病人医院感染致病菌分布及耐药情况。方法:回顾性研究我院发生医院感染的血液病住院病人2003年11月～2007年11月细菌送检阳性的390份标本,药敏试验用Kirby-Bauer法。结果:390株细菌依次分布于呼吸道分泌物、尿液、血液等标本。G^-菌占62.05%,G^+菌37.95%。单纯的头孢类和青霉素类抗生素除头孢他啶外,对G^-菌的敏感性不高,而碳青霉烯类、加β^-内酰胺酶抑制剂的头孢三代类和青霉素类对G^-菌敏感性较高。G^+菌对万古霉素、替考拉宁100%敏感,而对各种头孢类、青霉素类和喹诺酮类抗生素均显示出很高的耐药性;咽拭子及血标本中的金黄色葡萄球菌100%耐甲氧西林,仅万古霉素及替考拉宁100%敏感。结论:我院血液科医院细菌感染仍以G^-菌为主,G^+菌的比例处于上升趋势。呼吸道感染最常见。金黄色葡萄球菌100%耐甲氧西林。

大剂量米托蒽醌为主预处理联合自体外周血干细胞移植治疗血液系统恶性肿瘤39例

目的：观察以大剂量米托蒽醌为主的预处理方案联合自体外周血干细胞移植治疗血液系统恶性肿瘤的毒性反应及临床疗效。方法：39例患者，男22例，女17例，平均年龄（35．69±11．49）岁（12～59）岁。动员方案：CTX加VP16加rhG—CSF，采集单个核细胞（MNC）（3．62±1．69）×10^8／kg。CD34。细胞（4．31±3．16）×10^6／b。预处理一组22例采取米托蒽醌30mg／m。联合CTX、Vp-16化疗和全淋巴结照射（TLI）；另一组17例予NVT60mg／m^2，联合CTX、Vp-16，或加用卡铂或阿糖胞苷。结果：主要非血液系统毒性为呕吐100％（39／39）、腹泻25．64％（10／39）、黏膜溃疡33．33％（13／39）、皮疹23．08％（9／39），无严重不可逆的脏器功能损害。所有患者均获造血重建。白细胞计数〉1．0×10。／L的时间是（14．05±3．69）d（8～24）d；血小板计数〉20×10^9／L的时间是（14．86±5．69）d（9～37d）。全组随访时间截至2005年5月，中位生存期19（2～88）个月，复发13例，占33％（13／39）。结论：大剂量米托蒽醌为主的预处理方案联合自体外周血干细胞移植治疗血液系统恶性肿瘤是安全的。

非清髓性异基因骨髓移植小鼠模型的建立

为探讨非清髓造血干细胞移植小鼠模型的制备,以10-12周龄C57BL/6(H-2b)雌性小鼠为受体,以10-12周龄BALB/c(H-2d)雄性小鼠为供体,移植前采用环磷酰胺200 mg/kg)加5 Gy Y射线全身照射的非清髓预处理方案,移植后36 d检测雌性受体小鼠体内Y染色体特异性基因表达作为移植植活指标。结果发现,非清髓的预处理方案下可以实现异基因造血细胞的植活,同时发现移植回输的造血细胞数量对于造模成功率有着关键作用,在回输异基因骨髓细胞数量为2×107个时移植植活率为80％(8/10)。

二乙酰己二胺对骨髓增生异常综合征患者心电图的影响

目的:观察分析新型癌细胞诱导分化剂二乙酰己二胺(CAHB)对骨髓增生异常综合征(MDS)患者心电图的影响。方法:MDS患者48例序贯进入I期临床耐受性试验、单次给药药动学研究、多剂量给药的耐受性和药动学研究;MDS患者10例,进入ⅡA期临床试验。用药前、中、后进行十二导联心电图监测。结果:I期临床试验的48例患者完成全部试验,用药后出现心电图异常改变的有9例,包括偶发室性心律失常1例、T波改变3例、ST-T改变3例和左心室高电压2例,但均无不适主诉,也未予治疗,在停药后观察期内恢复正常。未观察到QT间期或QTc的延长。ⅡA期临床试验的10例患者共完成18个疗程治疗,有2例观察到心电图心室除极和复极的相关性变化,包括出现U波(使QT时间延长)、ST段压低、T波低平、钝挫等,第二疗程时又重现上述改变。但不伴有胸闷、气急等不适症状,也无相应的心肌损伤标志物的异常升高、电解质异常、超声心动图和动态心电图的特异性改变,心电图的异常在停药后6 d内消失。结论:心电图的异常改变与本试验药物相关,但停药后可恢复,且不伴有其他心脏安全性指标的相应变化。

流式细胞术检测红细胞相关抗体方法

目的:建立以全血为标本的流式细胞仪(FCM)检测抗红细胞相关抗体方法,探讨实验过程中各因素对检测结果的影响。方法:多参数、半定量FCM分析。结果:在细胞数稳定在(1.6～2.0)×105/μl时,稀释度为2∶1的抗-DIgG抗体即可使红细胞表面抗原饱和。随着加入的人抗-DIgG浓度逐渐增加,红细胞阳性率无变化;EDTA二钾、肝素钠和柠檬酸钠这3种抗凝剂之间各项指标差异无统计学意义;不同反应温度对阳性模型与二抗的反应无影响;抗体与样本反应时间在组内各时间段之间的比较中,反应时间>5min时平均荧光强度(MFI)、阳性率均无统计学差异;标本放置在室温与4℃下储存时,各时间段阳性细胞比例无明显差异,而标本放置时间超过2h后,MFI降低,标本在室温和4℃下存储24h内各时间段各项指标相比均无明显差异;二抗稀释度在≥1∶1时MFI即可达平台期;红细胞表面IgG抗体的参考范围:阳性细胞比例<0.33%,MFI<27.7;FCM法的重复性高。结论:全血法FCMFSC-SSC可特异地设置细胞门,无需指定特殊抗凝剂,不同反应温度对阳性模型与二抗的反应没有影响。反应时间>5min即可,存储温度在25℃及4℃时标本均应在2h内进行检测。二抗稀释度在1∶1时即可饱和红细胞表面抗体。FCM法的重复性较高。

六亚甲基二乙酰胺对K562细胞作用的实验研究

目的:研究六亚甲基二乙酰胺(HM-BA)体外对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡和促进分化的作用。方法:MTT法检测不同浓度HMBA对于K562细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测HMBA对于K562细胞周期分布的影响;AnnexinV/PI染色方法检测HM-BA诱导K562细胞凋亡的作用;通过瑞氏染色、联苯胺染色和FCM检测分化抗原研究K562细胞分化情况。结果:HMBA可以抑制K562细胞增殖,1、2、3和4mmol/L对K562细胞增殖抑制率分别为21.97%、36.05%、41.56%和47.59%;HMBA可以阻滞K562细胞周期,主要表现为G0/G1期的阻滞;HMBA诱导K562细胞凋亡的作用不明显,4mmol/L的HMBA对K562细胞诱导凋亡率<5%;HMBA处理后,瑞氏染色显示K562细胞有一定程度的成熟表现,联苯胺染色基本为阴性;K562细胞膜表面CD11b、CD14、CD68和胞质内溶菌酶抗原的表达在HMBA处理前后均为阴性。结论:HM-BA可以抑制K562细胞的增殖,提示具有一定的治疗作用;HMBA对K562的作用机制和阻滞细胞周期有关,诱导凋亡不是主要作用机制;HMBA有促进K562细胞分化的迹象,但分化方向和机制有待进一步研究。

单核苷酸多态性对原发性中枢神经系统淋巴瘤患者甲氨蝶呤化疗所致骨髓抑制的影响

目的 探讨甲氨蝶呤作用通路上6个相关基因SLCO1B1、SLC19A1、ABCC2、ABCB1、FPGS、GGH的单核苷酸多态性对原发性中枢神经系统淋巴瘤患者使用甲氨蝶呤化疗所致骨髓抑制不良反应的影响。方法 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对121例原发性中枢神经系统淋巴瘤患者的DNA样本进行基因分型。从电子病历系统获取患者的人口学及相应的临床资料,采用χ^(2)检验及多因素Logistic回归分析探讨单核苷酸多态性对患者化疗后骨髓抑制的影响。结果 121例患者共经历了508个疗程,其中186个疗程(36.6%)发生了骨髓抑制不良反应。单因素分析结果显示,SLCO1B1 rs2306283及GGH rs2305558位点的单核苷酸多态性对甲氨蝶呤所致骨髓抑制的发生率均有影响(P <0.05)。Logistic回归分析显示,SLCO1B1 rs2306283位点单核苷酸多态性仍然对甲氨蝶呤所致骨髓抑制的发生率有影响[OR=1.542,95%CI(1.040,2.287),P=0.031]。结论 SLCO1B1 rs2306283 GG基因型可作为甲氨蝶呤所致骨髓抑制的独立危险因素,为甲氨蝶呤的个体化给药提供依据。

合并尿崩症的成人甲状腺朗格汉斯细胞组织细胞增生症临床特点和诊断经验

目的分析归纳甲状腺朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)的临床特点,分享诊断经验。方法回顾性分析2015年1月至2022年1月复旦大学附属华山医院内分泌科收治的6例病理确诊甲状腺LCH患者的临床资料,分析甲状腺超声和18 F FDG-PET/CT影像学特点。结果6例(2男4女)确诊年龄18~58岁,均因尿崩症就诊于内分泌科,MRI显示垂体柄增粗。中枢性甲减2例,甲功正常4例;甲状腺抗体阳性3例。甲状腺超声提示3类结节3例,4类结节2例,结节性甲状腺肿1例。结节超声特点:均为低回声;5例边界清晰;4例回声分布不均匀;5例形态欠规则;均未见钙化。18 F FDG-PET/CT显示为高摄取结节(SUVmax值>10);手术切除病例确诊4例,粗针穿刺活检病理确诊2例。6例患者确诊时除垂体外,累及肝脏和胸腺各2例,累及肺和骨各1例。系统治疗后4例甲状腺结节缩小,2例伴肝脏累及者病情进展快速未行评估。结论甲状腺LCH超声特点为分布欠均匀的低回声结节,边界清但形态欠规则,不伴钙化;18 F FDG-PET/CT为高摄取。垂体柄增粗患者伴甲状腺低回声欠规则结节时优选甲状腺结节粗针穿刺联合CD1a和langerin染色以助诊断。

生物制剂Ⅰ期临床试验中的风险管控:案例分享

本文以1例健康受试者应用托珠单抗后出现中性粒细胞缺乏症不良事件为例,概述生物制剂Ⅰ期临床试验过程中进行风险管控的重要性,应从知情、筛选、给药、受试者培训及不良事件处理等各个方面做好风险管控,以确保受试者安全及临床试验顺利进行。

流式细胞仪检测白细胞髓过氧化物酶的方法研究

目的评价流式细胞仪检测胞浆内抗原髓过氧化物酶(MPO)的方法,探讨实验中各因素对检测结果的影响。方法以HL-60细胞为模型,多参数流式细胞仪分析,比较3种不同破膜剂处理及不同处理时间,标本不同放置时间,不同荧光染料对实验结果的影响。结果比较FACS、Fix&Perm、Fixation&Permeabilization 3种破膜剂,得出FACS破膜剂对细胞的前向散射角/侧向散射角(FSC/SSC)影响最小,相对荧光强度(RFI)明显高于其他两者,效果最佳。3种破膜剂均在破膜时间15 min时可达到最佳效果。标本放置在室温条件下,12 h内应对其进行处理,至24 h细胞已出现部分死亡,将影响实验结果的正确性。PE荧光的MPO在荧光强度上明显优于FITC荧光,因此推荐在条件允许的情况下,尽可能地选用PE荧光的MPO抗体。结论流式细胞仪检测MPO的推荐方法:调整样本细胞数,应用FACS破膜剂15 min,标本必须当天完成检测,尽量采用PE标记的MPO抗体。

颅脑创伤急性期凝血功能障碍诊治专家共识(2024版)

颅脑创伤急性期凝血功能障碍高发,显著增加颅内进展性出血及术中大出血风险、救治难度及患者病死率。颅脑创伤后大量组织因子暴露导致凝血异常激活是颅脑创伤急性期凝血功能障碍的主要病理机制,是一种特殊类型的创伤性凝血病。目前,颅脑创伤急性期凝血功能障碍起病隐匿、出现时往往不合并大出血、诊断标准不一、诊治不规范,尚缺乏相关共识或指南。为此,国家创伤医学中心颅脑创伤专业委员会和中国医师协会神经外科医师分会神经重症专家委员会组织国内相关专家,参考国内外相关领域最新指南、共识和临床研究,通过改良德尔菲法征集专家建议,共同制订《颅脑创伤急性期凝血功能障碍诊治专家共识(2024版)》,就颅脑创伤急性期凝血功能障碍的诊断与治疗提出18条推荐意见,旨在规范临床诊治。