lncRNA AC131056.3通过调控miR-21-5p对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)AC131056.3对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的作用及可能机制。方法采用GEPIA数据库分析骨肉瘤患者总生存期和AC131056.3表达的相关性。采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞(Saos2、U-2OS、MG-63、143B、HOS)及正常成骨细胞hFOB1.19中AC131056.3的表达。将HOS细胞分为对照组和AC131056.3组,分别转染pcDNA质粒和pcDNA-AC131056.3质粒。CCK-8法检测HOS细胞增殖活力,Transwell实验检测HOS细胞侵袭活力,qRT-PCR检测两组HOS细胞中miR-21-5p表达,Western blot检测两组HOS细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白p-Akt、p-mTOR、p-PI3K、GSK-3、PDK-1表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因法验证AC131056.3与miR-21-5p的互补关系。结果与AC131056.3低表达的骨肉瘤患者相比,AC131056.3高表达的患者总生存期较长(P<0.01)。与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞Saos2、U-2OS、MG-63、143B、HOS中AC131056.3表达降低(P<0.05),HOS细胞中AC131056.3的表达最低(P<0.01)。与对照组比较,AC131056.3组HOS细胞增殖活力显著降低(P<0.05),细胞侵袭活力显著降低(P<0.01)。AC131056.3可靶向结合miR-21-5p(P<0.01)。与对照组比较,AC131056.3组HOS细胞中miR-21-5p表达降低(P<0.01),PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白p-Akt、p-mTOR、p-PI3K、GSK-3、PDK-1表达降低。结论AC131056.3表达与骨肉瘤患者总生存期正相关,AC131056.3可通过靶向抑制miR-21-5p的表达降低HOS细胞的增殖及侵袭活力。

长链非编码RNA DHRS4-AS1与骨肉瘤患者无病生存的关系及其体外对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DHRS4-AS1与骨肉瘤患者无病生存的关系及其体外对骨肉瘤细胞增殖和迁移影响的机制。方法收集GEPIA数据库建库以来骨肉瘤患者DHRS4-AS1转录组水平和生存情况数据,依据DHRS4-AS1转录组中位水平将患者分为DHRS4-AS1高表达组和低表达组,各59例,采用Kaplan-Meier法分析两组无病生存情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测DHRS4-AS1在骨肉瘤细胞株MG-63、HOS、143B、U-2OS、Saos2及正常成骨细胞株hFOB1.19中的表达,选择DHRS4-AS1表达水平最低的骨肉瘤细胞株进行后续实验。将载有DHRS4-AS1序列的质粒和载有阴性对照序列的质粒分别转染至选取的骨肉瘤细胞中,分别为DHRS4-AS1组和对照组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,以吸光度值为细胞增殖能力;细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况。采用生物信息学网站starBase V2.0预测DHRS4-AS1的靶基因,双荧光素酶报告基因法验证DHRS4-AS1与靶基因的靶向关系。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测对照组和DHRS4-AS1组骨肉瘤细胞靶基因及下游基因表达水平。结果生存分析显示,GEPIA数据库中DHRS4-AS1高表达组骨肉瘤患者无病生存优于DHRS4-AS1低表达组(P<0.001)。与正常成骨细胞hFOB1.19细胞相比,各骨肉瘤细胞中DHRS4-AS1的表达水平均低(均P<0.01),其中U-2OS细胞中DHRS4-AS1的表达水平最低(P<0.001)。DHRS4-AS1组U-2OS细胞培养1、2、3、4 d后细胞增殖能力均较对照组降低(均P<0.05)。DHRS4-AS1组U-2OS细胞迁移率低于对照组[(31±6)%比(63±4)%,t=4.38,P=0.005]。starBase V2.0网站预测DHRS4-AS1与miRNA-411-3p(miR-411-3p)互补结合;双荧光素酶报告基因实验显示,miR-411-3p过表达降低了野生型DHRS4-AS1报告基因的荧光素酶活性(P<0.001),但对突变型DHRS4-AS1报告基因荧光素酶活性无影响(P>0.05)。qRT-PCR检测显示,与对照组相比,DHRS4-AS1组U-2OS细胞miR-411-3p相对表达量低(0.22±0.06比1.06±0.23,t=3.55,P=0.012),转移抑制因子MTSS1 mRNA相对表达量高(5.58±1.03比1.06±0.22,t=4.28,P=0.005);蛋白质印迹法检测显示,MTSS1表达升高,细胞增殖表型蛋白CDK3、cyclin C和细胞迁移表型蛋白ZEB2、KLF8表达水平均低。结论lncRNA DHRS4-AS1高表达骨肉瘤患者无病生存较好,其在骨肉瘤细胞株中低表达。DHRS4-AS1可能通过靶向下调骨肉瘤细胞miR-411-3p的表达,促进MTSS1基因表达,抑制细胞增殖和迁移。